張軍

摘要：建立高效液相色譜法，色譜條件：采用Zorbax SB-C18色譜柱，流動相為甲醇-水-三乙胺-高氯酸（50：48：0.80：0.6），檢測波長280nm。結(jié)果表明：雙嘧達莫和阿司匹林分別在80～400μg/ml和10～50濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r>0.9993），平均回收率分別為99.69%（RSD=0.28%）和99.34%（RSD=0.48%），本方法可同時測定胃內(nèi)漂浮膠囊中雙嘧達莫阿司匹林的含量，方法簡便、快速，結(jié)果準確。

關(guān)鍵詞：雙嘧達莫阿司匹林胃內(nèi)漂浮膠囊;測定;高效液相色譜法

雙嘧達莫（D）用于預(yù)防血栓形成，小劑量阿司匹林（A）用于抗血栓、預(yù)防血栓形成， D、A的復(fù)方制劑（200mg：25mg）的作用為二者的抗血栓作用相加，用于因血栓形成引起暫時性腦缺血發(fā)作或完全缺血性中風(fēng)的病人，降低中風(fēng)危險，療效提高，劑量減少，不良反應(yīng)顯著降低〔1，2〕。由于A對胃刺激性大，D在水及堿性環(huán)境幾乎不溶，而溶于稀酸〔3〕，為此，研究了DA胃內(nèi)漂浮膠囊，以期提高療效、降低不良反應(yīng)、提高生物利用度、緩釋長效。本文建立了HPLC法，同時測定胃內(nèi)漂浮膠囊中D和A的含量。

1 材料與儀器

Waters高效液相色譜儀、515泵、2487雙波長紫外檢測器、717自動進樣器、Millennium32色譜工作站，電子天平FA1604S（上海天平廠）。

D對照品（江蘇啟東東岳藥業(yè)有限公司，批號20180733，含量99.36%），A對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100113-201802，含量100.0%），DA胃內(nèi)漂浮膠囊（自制，批號191220～191224），甲醇（TEDIA COMPANY .INC USA）;其它試劑均為市售分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱 Zorbax SB-C18（ 4.6×150mm，5μm）;流動相 甲醇-水-三乙胺-高氯酸（50：48：0.80：0.6）;流速1.0ml/min;檢測波長 280nm;柱溫 40℃;進樣量 10μl。

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取D對照品約25mg、A對照品約200mg，置100ml量瓶中，用含1%甲酸的甲醇液溶解并定容;精密量取上述溶液5ml于50ml的量瓶中，用含1%甲酸的甲醇溶液定容。

2.3 測定波長的選擇 取對照品溶液，在200～600nm波長范圍內(nèi)掃描，見圖1。結(jié)果表明在280nm處D、A有較大吸收，故選擇此波長作為檢測波長。

2.4 專屬性試驗 在“2.1”項色譜條件下，取對照品溶液和空白輔料溶液進樣，輔料見圖2，對照品見圖3，D和A的保留時間分別為9.6和3.4min，輔料不干擾測定。經(jīng)過酸降解（0.1mol/l HCL）、堿降解（0.1mol/lNaOH溶液）和熱降解（110℃加熱破壞）試驗，產(chǎn)生的各分解產(chǎn)物均能與被測組分有效分離。

2.5 線性試驗 精密稱取D和A對照品適量，用含1%甲酸的甲醇液溶解并稀釋成D濃度分別為80、160、240、320、400μg/ml和A濃度分別為10、20、30、40、50μg/ml的溶液，進樣測定。以峰面積（S）對濃度（C）進行線性回歸，得回歸方程為D：S=1.472×10-8 C-2.995×10-3 （r=0.9995），S：A =1.447×10-7 C-2.624×10-4（r=0.9993）。結(jié)果表明D在80～400μg/ml 、A在10～50μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗 精密稱取D和A對照品適量，用含1%甲酸的甲醇液溶解分別配成高、中、低濃度溶液，分別于1d內(nèi)測5次，得日內(nèi)RSD為D0.503%、0.339%、0.207%和A0.403%、0.486%、0.6275%;連續(xù)測定5d，得日間RSD為D0.438%、0.693%、0.295%和A1.038%、1.246%、1.085%。

2.7 回收率試驗 精密稱取D和A對照品適量及處方比例的輔料，用含1%甲酸的甲醇液溶解分別配成高、中、低濃度溶液，每種濃度配制三份，進樣測定，得平均回收率為D99.84%、99.83%、99.41%和A 99.25%、99.07%、99.71%，RSD為D 0.23%、0.10%、0.50%和A0.39%、0.33%、0.71%（n=3）。

2.8 樣品測定 取本品20膠囊，精密稱定，研細，精密稱取此細粉適量（約相當于D200mg、A25mg）于100ml量瓶中，用 含1%甲酸的甲醇溶液溶解并定容，用0.45μm的微孔濾膜過濾，精密量取續(xù)濾液5ml于50ml量瓶中，用含1%甲酸的甲醇溶液溶解并定容，照“2.1”項下色譜條件下測定。同法測定對照品溶液，按外標法以峰面積計算得樣品的含量，結(jié)果見表1。

3 討論

3.1 曾選用0.1mol/L HCL、0.1mol/L HCL-甲醇（1：1）、1%甲酸的甲醇等不同溶劑對樣品進行提取。結(jié)果表明，A在0.1mol/L HCL、0.1mol/L HCL-甲醇（1：1）中存在不同程度的水解現(xiàn)象;樣品在1%甲酸的甲醇中穩(wěn)定、提取率較高。對提取時間試驗的結(jié)果表明，提取10min后變化不大，故選擇10min。

3.2 參照文獻[4，5，6]，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，分別配制不同比例的流動相考察分離情況。在甲醇-水-三乙胺-高氯酸（50：48：0.80：0.6）時，D和A保留時間較長;比例為60：38.75：0.75：0.5時，D和A保留時間較短，A峰與輔料峰分離不好;比例為50：48.75：0.75：0.5時，D和A的保留時間分別為9.6和3.4min，且能與各降解產(chǎn)物有效分離。

參考文獻：

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