穆新華，涂 磊，吳小冬，趙 寬*

（1．江西科技師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江西南昌 330013；2．江西九嶺山國家級自然保護區(qū)管理局，江西宜春 330600； 3．靖安縣中醫(yī)院，江西宜春 330600）

紅菇屬是常見的外生菌根菌[1-4]，全球已知約有800個物種[5]，我國已報道160余種[6-7]，江西省已報道35種[8]。菌根菌在森林生態(tài)系統(tǒng)中，對于水分、碳素以及其他養(yǎng)分轉(zhuǎn)化和能量循環(huán)起著重要作用[9]。另外，紅菇屬真菌多數(shù)可食用，如正紅菇（R.vinosa）、美味紅菇（R.delica）在全國各地被廣泛食用，味道鮮美，富含蛋白質(zhì)、脂肪酸、維生素等營養(yǎng)成分[10]。該屬也不乏毒菇，如亞稀褶紅菇（R.subnigricans）,中毒事件時有發(fā)生[11]。同時，部分紅菇屬真菌，如血紅菇（R.sanguinea）、毒紅菇（R.emetica）則具有一定的藥用價值，具有抗腫瘤、抗病毒和促進免疫等功效[12]。

本文發(fā)現(xiàn)并描述了江西九嶺山國家級自然保護區(qū)（下稱九嶺山保護區(qū)）紅菇屬真菌一新記錄種——日本紅菇（Russula japonica），該物種為毒蘑菇，2020年被當(dāng)?shù)厝罕娬`食導(dǎo)致胃腸炎型中毒，患者在靖安縣中醫(yī)院就診后，因病情輕微自愈。

1 材料與方法

1.1 供試標(biāo)本

標(biāo)本于2020年10月采集于九嶺山保護區(qū)，拍攝新鮮標(biāo)本生境照片，采樣時盡量保證其完整性。詳細記錄標(biāo)本形態(tài)特征及生境后，將其放置于烘箱中，60 ℃烘干，經(jīng)干燥后保存于中國科學(xué)院昆明植物研究所隱花植物標(biāo)本館，同時保存與之配套的硅膠干燥材料，用于分子實驗。

1.2 研究方法

1.2.1 形態(tài)學(xué)鑒定

標(biāo)本的外部形態(tài)特征根據(jù)野外發(fā)現(xiàn)的子實體觀察記錄，包括采集地點、生境特點、采集時間以及子實體各部位結(jié)構(gòu)的特征等。

標(biāo)本的內(nèi)部顯微特征依據(jù)對烘干標(biāo)本的徒手切片觀察，使用5%的氫氧化鉀溶液為載浮劑，在顯微鏡下放大100倍（油鏡）下觀察得到。分別隨機選取30個孢子和擔(dān)子進行測量，記錄其形狀、大小和顏色等。

1.2.2 分子系統(tǒng)學(xué)研究

采用生工生物工程（上海）股份有限公司生產(chǎn)的Ezup柱式真菌基因組DNA抽提試劑盒對硅膠干燥的分子材料進行DNA提取。在查閱相關(guān)的文獻資料和進行預(yù)實驗的基礎(chǔ)上[13-15]，本研究選用ITS4/ITS5引物對內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）序列進行擴增。擴增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳檢測后送往生工生物工程（上海）股份有限公司進行測序。將測得的ITS序列采用BioEdit v7.0.9打開檢查序列峰形圖，核對堿基是否讀取正確，同時采用NCBI的在線軟件BLAST對所得序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中的序列進行比對，以確保所得序列與研究對象相互對應(yīng)，并按照BLAST比對結(jié)果選取重建系統(tǒng)發(fā)育樹的基因序列。采用MEGA v7.0以最大似然法（Maximum Likelihood）和鄰接法（Neighbor joining）進行系統(tǒng)發(fā)育分析，經(jīng)1 000次重復(fù)獲得統(tǒng)計學(xué)支持[16-18]。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)特征

日本紅菇（Russula japonica），子實體中到大型，菌蓋6～14 cm，初半球形，后呈漏斗狀，邊緣無條紋；乳白色，表面光滑，潮濕時略黏，常伴有淡黃色至褐色的污漬。菌褶近離生，密集，幼嫩時乳白色，成熟后淡赭色，有小菌褶。菌柄圓柱形，中生，長4～6 cm，粗1.5～2 cm，由上至下漸細，基部不膨大，內(nèi)部白色，海綿質(zhì)。孢子長5.5～7.5 μm， 寬5.0～7.0 μm，淡黃色，近球狀，表面具刺，淀粉質(zhì)。擔(dān)子長30～45 μm，寬7.0～11 μm，長棒狀，具4小梗。模式產(chǎn)地為日本，夏秋季散生或群生于闊葉林地上，分布于日本[19]、中國[20]。研究標(biāo)本于2020年10月10日采于江西宜春、九嶺山保護區(qū)海拔300 m處。

圖1 日本紅菇子實體生境照片

2.2 分子系統(tǒng)發(fā)育分析

采自江西的標(biāo)本ITS序列通過GenBank數(shù)據(jù)庫中BLAST序列比對，與Russula japonica序列同源性達97%。運用MEGA 7.0軟件，以最大似然法（Maximum Likelihood）和鄰接法（Neighbor Joining）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明，兩種方法建立的系統(tǒng)發(fā)育樹型非常接近，圖2為采用最大似然法建立的系統(tǒng)發(fā)育樹。系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果顯示，采自江西的標(biāo)本與Russula japonica聚在同一分枝上，支持率為99%。

圖2 基于ITS序列構(gòu)建的紅菇屬系統(tǒng)發(fā)育樹

3 結(jié)論

結(jié)合形態(tài)特征比對和分子系統(tǒng)發(fā)育分析的結(jié)果，最終確定本研究采集的標(biāo)本（HKAS 105290）為日本紅菇(Russula japonica)，可導(dǎo)致腸胃型中毒。其與可食用的白乳菇(Lactarius piperatus)形態(tài)特征十分相似而容易被誤食，但后者傷后泌出白色乳液、味辣[21-25]。建議在當(dāng)?shù)亻_展較廣泛的科普宣傳教育，提升群眾食品安全認知，同時避免蘑菇中毒事件的發(fā)生。