柳燕飛 劉雯雯 郭 蕾 張 藝 高天旸

廣東省第二人民醫(yī)院1.婦科；2.生殖醫(yī)學中心，廣東 廣州 510317

子宮內膜異位癥是一種常見的婦科疾病，發(fā)病率約為10%。子宮內膜異位癥患者不孕不育的發(fā)病風險約為健康女性的20倍，是引起女性不孕不育的主要原因［1-2］。子宮內膜容受性是指子宮內膜接受胚胎著床的能力，子宮內膜只有在月經周期的特定短暫時期具備接受胚胎植入的能力，該時期稱為“胚胎植入態(tài)”。研究顯示，半乳糖凝集素-3（Gelactin-3）在子宮內膜“胚胎植入態(tài)”時期表達量顯著增加［3-4］，說明當女性體內Gelactin-3表達量增加時，子宮內膜具備接受胚胎植入的能力，女性受孕幾率增加。血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可以參與新血管的形成，而血管生成在子宮內膜異位癥中發(fā)揮重要作用，因此，VEGF可能參與子宮內膜異位癥的發(fā)生發(fā)展［5］。腹腔鏡檢查及手術治療是臨床常見的治療子宮內膜異位癥的方式之一，但腹腔鏡治療是否可以提高女性患者子宮內膜容受度，目前暫缺乏相關證據。本研究通過檢查女性患者手術前后Gelactin-3和VEGF的表達水平，分析腹腔鏡治療對子宮內膜異位癥患者子宮內膜容受性的療效，為臨床上腹腔鏡治療提供更多的理論依據。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

收集2018年9月—2020年8月在我院就診并接受腹腔鏡治療的子宮內膜異位癥女性患者，共105例。根據美國生育學會提出的“ASRM修正子宮內膜異位癥分期法”將其分為Ⅰ、Ⅱ期（57例），Ⅲ期（35例），Ⅳ期（13例）。納入標準：（1）腹腔鏡檢查和病理檢查確定為子宮內膜異位癥，并接受腹腔鏡治療的患者；（2）患者年齡23～42歲；（3）夫妻正常性生活且未采取避孕措施1年以上未妊娠；（4）月經周期規(guī)律，周期為26～32天；（5）無內分泌、免疫和代謝性疾?。唬?）手術前3個月未接受其他治療。對照組患者選擇因輸卵管不孕、卵巢良性病變等接受腹腔鏡治療的患者，子宮內膜正常，共納入110例。

1.2 樣本收集

（1）血清樣本收集：所有患者在手術前后抽取外周靜脈血，離心后分離血清，-80℃冰箱保存；（2）子宮內膜標本采集：分別采集兩組患者手術前后的子宮內膜，避免排卵期對子宮內膜的影響，采集時間為手術前后月經周期的第19～22天，采集后組織放置于10%中性福爾馬林中固定保存。采集方法：使用子宮內膜采集器（北京賽普九洲科技發(fā)展有限公司生產）采集患者的子宮內膜。所有患者取膀胱截石位，暴露陰道和宮頸，將采集器置入患者宮腔底部，推出采集器的外套管，釋放采集環(huán)，將采集器順時針轉動15圈左右，將其退回外套中，并將采集器退出宮腔。

1.3 Gelactin-3和VEGF表達水平檢測

1.3.1 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清中Gelactin-3和VEGF表達水平（1）稀釋標準品，制作標準曲線；（2）在樣本孔中加入血清樣本，37℃放置2 h；（3）加入酶結合物工作液，37℃放置45 min；（4）加入底物，37℃放置15 min，加入終止液終止反應；（5）使用酶標儀在450 nm波長檢測吸光度，根據標準曲線計算血清中Gelactin-3和VEGF濃度。

1.3.2 免疫組化檢測子宮內膜Gelactin-3和VEGF表達水平 多聚甲醛固定采集的子宮內膜樣本，石蠟包埋后將其分別置于二甲苯、100%乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中脫蠟水化。PBS清洗后，滴加封閉液封閉。封閉完成后添加單克隆小鼠抗人Galectin-3或VEGF抗體，4℃過夜。PBS清洗后添加二抗，37℃放置30 min。添加顯色液，觀察切片顏色。當切片顏色變成褐色時，用水洗掉顯色液。蘇木素復染后用PBS清洗。將切片分別放置于95%乙醇、100%乙醇中脫水，再放置于二甲苯中使其變透明，最后采用中性樹膠封片，顯微鏡觀察計數。計數標準：隨機選取5個不同視野，計數5個視野中陽性著色細胞，求取平均值。

1.4 統(tǒng)計學處理

所有數據均采用SPSS 22.0進行統(tǒng)計分析。計量資料采用均數±標準差表示，兩組比較采用獨立樣本t檢驗，治療前后比較采用配對t檢驗；計數資料采用頻數與相對數表示，組間比較采用卡方檢驗。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 血清中Gelactin-3和VEGF表達水平

子宮內膜異位癥患者手術前Gelactin-3水平顯著低于對照組，而VEGF表達則顯著高于對照組；經過手術治療后，子宮內膜異位癥患者Gelactin-3表達顯著升高，而VEGF則顯著降低，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。對照組患者手術治療前后Gelactin-3和VEGF水平均無顯著變化。見表1。

表1 兩組患者手術前后血清中Gelactin-3和VEGF表達水平（±s，pg/mL）

表1 兩組患者手術前后血清中Gelactin-3和VEGF表達水平（±s，pg/mL）

2.2 子宮內膜組織中Gelactin-3和VEGF表達

與血清中Gelactin-3和VEGF表達結果一致。手術治療可以提高子宮內膜異位癥患者子宮內膜組織的Gelactin-3水平，并降低VEGF水平，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。對照組患者手術前后Gelactin-3和VEGF水平均無顯著變化。見表2。

表2 兩組患者手術前后子宮內膜組織中Gelactin-3和VEGF表達水平比較（±s）

表2 兩組患者手術前后子宮內膜組織中Gelactin-3和VEGF表達水平比較（±s）

3 討論

子宮內膜異位癥是一種生育期婦女常見的慢性炎癥性疾病，是女性不孕不育的主要原因之一。其基本病理變化是異位的內膜細胞增生黏附、侵襲和血管生成等，導致周圍纖維組織增生、粘連、形成結節(jié)或囊腫等［6-8］。子宮內膜異位癥的發(fā)病原因不明，目前的治療方式無法從根本上治愈，其引發(fā)的疼痛、不孕和性生活異常極大地影響了患者的心理健康和生活質量［9］。目前臨床上常見的治療手段是腹腔鏡手術，通過手術可以定點治療異位組織，顯著提高患者的妊娠率［10-11］，但腹腔鏡手術治療目前仍存在較大的爭議，需進一步在臨床研究評估其價值。本研究旨在探討腹腔鏡治療對子宮內膜異位癥患者子宮內膜容受性的治療效果，為臨床上腹腔鏡治療提供更多的理論依據。

新血管生成是子宮內膜異位發(fā)生的關鍵過程，而VEGF是參與調控血管生成最重要的血管生成因子［12］，其主要功能包括促進內皮細胞分裂、刺激新血管生成、提高血管通透性等。目前研究顯示，子宮內膜異位癥患者的血清、腹腔液和子宮內膜組織中VEGF的表達均顯著高于健康婦女，且子宮內膜異位癥越嚴重的患者，VEGF表達量越高［13-15］。推測VEGF可以促進異位病灶血管的生長，為內膜異位提供了生長環(huán)境。本研究結果顯示，子宮內膜異位癥患者血清和子宮內膜組織中的VEGF水平均顯著高于對照組患者，與其他研究結果一致［16］，提示VEGF表達可能可以作為診斷子宮內膜異位癥的分子標志物之一。子宮內膜異位癥患者接受腹腔鏡手術治療后，血清和子宮內膜組織中的VEGF水平均顯著降低，說明腹腔鏡手術可以緩解子宮內膜異位癥患者的病情，改善其不孕癥狀。

Galectin-3是一種結合蛋白，可以參與細胞黏附、凋亡、分化、遷移等多種生理病理過程［17］。有研究表明，Galectin-3的表達與子宮內膜異位癥之間具有一定的相關性［18-19］。也有文獻報道，Galectin-3在子宮內膜容受的植入窗期表達量顯著增加，在異位內膜組織中的表達顯著低于正常子宮內膜，其表達量與不孕不育可能存在一定的相關性［20］。本研究結果顯示，Galectin-3在子宮內膜異位癥患者血清和子宮內膜組織中的表達量顯著低于對照組患者，接受腹腔鏡手術治療后，其表達量升高，說明Galectin-3可能參與了子宮內膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展過程。

綜上所述，VEGF和Galectin-3可能參與子宮內膜異位癥的發(fā)生發(fā)展，而腹腔鏡手術可以顯著降低VEGF的表達，并增加Galectin-3表達，可以改善子宮內膜異位癥患者的病情，增加其妊娠率，該結果為臨床上進一步使用腹腔鏡治療提供了理論依據。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突