元雪湞，張磊，達(dá)列亞·阿合買(mǎi)提，許小友，舒暢，司慧民，陳薔，馬發(fā)順

(1.河南省獸藥飼料監(jiān)察所，鄭州450000；2.新疆獸藥飼料監(jiān)察所，烏魯木齊830063；3.駐馬店獸藥飼料監(jiān)察所，駐馬店463000；4.安陽(yáng)工學(xué)院生物與食品工程學(xué)院，安陽(yáng)455000)

粗脂肪是動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中不可缺少的一類(lèi)營(yíng)養(yǎng)素[1]，也是衡量動(dòng)物性飼料質(zhì)量的重要指標(biāo)。準(zhǔn)確測(cè)定飼料中粗脂肪含量，為不同生長(zhǎng)階段的動(dòng)物提供營(yíng)養(yǎng)配比合理的飼料具有重要意義。司慧芳[2]曾對(duì)黑龍江省農(nóng)科院的大豆粗脂肪浸提法進(jìn)行改進(jìn)，提取效率提高3~4倍；蔣曉玲[3]研究指出飼料中粗脂肪測(cè)定的最短醚浸時(shí)間可縮短為6 h；汪紅等[4]在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《飼料中粗脂肪的測(cè)定》（GB/T 6433-1994）[5]的基礎(chǔ)上，將乙醚換成石油醚并烘干樣品包，從而提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確度和工作效率；李巧琪等[6]針對(duì)索氏抽提法中濾紙筒不能重復(fù)利用的問(wèn)題進(jìn)行改進(jìn)，用定量濾紙將濾渣包住后放入濾紙筒再進(jìn)行脂肪提取，保證了濾紙筒干凈整潔并可重復(fù)使用。按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《飼料中粗脂肪的測(cè)定》（GB/T 6433-2006）規(guī)定，動(dòng)物性飼料的脂肪含量測(cè)定需要經(jīng)過(guò)酸水解、過(guò)濾、烘干，然后再進(jìn)行脂肪提取[7]；王滿(mǎn)紅等[8]和樊霞等[9]指出，膨化飼料和動(dòng)物性飼料原料的粗脂肪提取需要進(jìn)行酸水解。過(guò)濾是保證酸水解法提取效率和粗脂肪測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的重要環(huán)節(jié)，在快速過(guò)濾時(shí)保證殘?jiān)蜑V紙的完整性是酸水解法脂肪提取的關(guān)鍵。目前關(guān)于酸水解法粗脂肪提取中過(guò)濾方法的研究還未見(jiàn)報(bào)道，也沒(méi)有采用直接過(guò)濾法測(cè)定飼料中粗脂肪含量的先例。本試驗(yàn)以肉粉、肉骨粉、奶粉和魚(yú)粉等17種飼料為樣本，對(duì)直接過(guò)濾法和布氏漏斗抽濾法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了比較，以掌握兩種過(guò)濾方法的測(cè)定效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 飼料樣品

14個(gè)進(jìn)口飼料編號(hào)為1~14（1.雞肉配方犬糧；2.三文魚(yú)雪魚(yú)配方犬糧；3.雞肉配方貓糧；4.三文魚(yú)配方貓糧；5.牛肉配方罐頭；6.雞肉配方罐頭；7.羊肉配方罐頭；8.紅魚(yú)粉；9.白魚(yú)粉；10和11牛肉骨粉；12.犢牛配方奶粉；13.羔羊配方奶粉；14.乳豬配方奶粉），從市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)。3個(gè)自選樣品，編號(hào)為15~17[15.豬肉粉；16.無(wú)害化處理豬肉骨粉；17.無(wú)害化處理豬肉骨粉（去油）]。樣品用鋼磨粉碎并過(guò)40目篩，置于塑料自封袋中，陰涼干燥保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 主要儀器和試劑

電子分析天平（型號(hào)：BT224S），德國(guó)賽多利斯（Sartorius）公司生產(chǎn)；六聯(lián)加熱電熱套（型號(hào)：KDM），山東鄄城光明儀器有限公司生產(chǎn)；脂肪測(cè)定儀（型號(hào)：SOXTeX TM 8000.230V）丹麥福斯公司生產(chǎn)；電熱恒溫干燥箱（型號(hào)：ED53），德國(guó)BINDER公司生產(chǎn)；真空抽濾泵（型號(hào)：DOA-V517-BN），美國(guó)GAST MANUFACTURING公司生產(chǎn)；石油醚（規(guī)格：60~90℃分析純），天津市大茂化學(xué)試劑廠生產(chǎn)；鹽酸（規(guī)格：分析純），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；定量濾紙（規(guī)格：15cm，快速），國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。玻璃漏斗，直徑約9.5 cm；三角瓶，500 mL；布氏漏斗，直徑約6cm。

1.2 方法

1.2.1 粗脂肪測(cè)定流程

抽提桶放入103℃烘箱烘至恒重（m1），稱(chēng)取5 g（m，精確至0.0001 g）；樣品置于500 mL平底燒瓶中，加入100 mL的3 mol/L鹽酸溶液，同時(shí)放入數(shù)粒玻璃珠，連接球形冷凝回流裝置，打開(kāi)冷卻水，將燒瓶放入六聯(lián)加熱電熱套微沸1h。水解過(guò)程需多次晃動(dòng)燒瓶，防止水解物糊在燒瓶壁上。室溫冷卻后過(guò)濾，80℃烘干，提取粗脂肪。提取條件為：沸騰溫度110℃，沸騰時(shí)間2.5 h，淋洗時(shí)間3 h，回收時(shí)間45 min。將盛有脂肪的抽提桶放入103℃烘箱干燥10 min，在干燥器中冷卻后再次稱(chēng)量（m2，精確至0.0001 g）。按參考文獻(xiàn)[7]中公式（2）計(jì)算粗脂肪含量，以百分含量計(jì)。

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用配對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每種樣品分別使用直接過(guò)濾法（A）和布氏漏斗抽濾法（B）過(guò)濾，每對(duì)試驗(yàn)均設(shè)3次重復(fù)；除過(guò)濾環(huán)節(jié)外，其他測(cè)定流程相同。直接過(guò)濾法具體操作為：①將定量濾紙折疊放于玻璃漏斗內(nèi)，將漏斗置于三角瓶上，先用少量三級(jí)水濕潤(rùn)濾紙，使濾紙與玻璃漏斗充分貼合，然后開(kāi)始過(guò)濾；②將燒瓶中酸水解物緩慢倒入濾紙內(nèi)，直至燒瓶?jī)?nèi)酸水解物全部倒完為止；③燒瓶?jī)?nèi)酸水解物倒完后，用三級(jí)水沖洗燒瓶3~4次，沖洗液全部倒入濾紙內(nèi)過(guò)濾，用三級(jí)水沖洗濾紙內(nèi)酸水解物至濾液呈中性，棄去燒瓶中的玻璃珠。布氏漏斗抽濾法具體操作為：①將抽濾瓶、布氏漏斗和真空泵依次連接，折疊兩張定量濾紙放于布氏漏斗內(nèi)，先用少量三級(jí)水濕潤(rùn)濾紙，使濾紙和布氏漏斗充分貼合；②將適量酸水解物倒入布氏漏斗內(nèi)，打開(kāi)真空抽濾泵抽濾酸水解物；③同直接過(guò)濾法③。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析

測(cè)定結(jié)果按不同處理分別計(jì)算平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。每種樣品兩種過(guò)濾法間的比較采用成組數(shù)據(jù)t檢驗(yàn)法，17種樣品整體間的比較采用配對(duì)數(shù)據(jù)的t檢驗(yàn)法。使用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 17種飼料樣品粗脂肪含量測(cè)定結(jié)果

17種飼料樣品使用兩種不同過(guò)濾方法測(cè)定的粗脂肪含量及t檢驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 17種飼料樣品粗脂肪含量測(cè)定結(jié)果

從表1可知，除11號(hào)樣品兩種過(guò)濾方法所得粗脂肪含量間差異顯著（P<0.05）外，其余樣品兩種過(guò)濾方法所得粗脂肪含量均無(wú)顯著差異（P>0.05）。17種飼料樣品兩種過(guò)濾方法間的整體比較差異也不顯著（P>0.05）。

2.2 兩種過(guò)濾方法的工作效率

從設(shè)備數(shù)量、過(guò)濾操作難易、濾紙是否容易破損，以及樣品過(guò)濾時(shí)間和工作效率等方面對(duì)兩種過(guò)濾方法進(jìn)行比較，見(jiàn)表2。

表2 直接過(guò)濾法和布氏漏斗抽濾法效率比較

由于真空抽濾泵價(jià)格昂貴，設(shè)備數(shù)量受到限制，使用布氏漏斗抽濾法抽濾1個(gè)樣品約需20min，1臺(tái)真空泵1h最多可抽濾3個(gè)樣品。直接過(guò)濾法幾乎不受設(shè)備限制，可根據(jù)需要自由增加擺放三角瓶和玻璃漏斗的數(shù)量；雖然過(guò)濾1個(gè)樣品約需30 min，但1名操作者可同時(shí)兼顧7~8個(gè)樣品的過(guò)濾，若增加操作員就可在有限的時(shí)間內(nèi)完成更多樣品的過(guò)濾任務(wù)。另外，布氏漏斗抽濾法操作不易，需要操作者小心謹(jǐn)慎，而直接過(guò)濾法則操作簡(jiǎn)單。

3 討論與結(jié)論

在粗脂肪提取過(guò)程中若使用布氏漏斗真空泵抽濾法，需先濕潤(rùn)濾紙，確保濾紙和布氏漏斗充分貼合；如果貼合不緊密，則過(guò)濾速度較慢；此法在抽濾過(guò)程中易抽爛濾紙，造成酸水解物顆粒抽到抽濾瓶中，這樣就無(wú)法進(jìn)行下一步的脂肪提取，或可影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。而直接過(guò)濾法不存在濾紙破損問(wèn)題，使全部酸水解物都可以進(jìn)行脂肪提取，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性提高。試驗(yàn)中11號(hào)樣品使用布氏漏斗抽濾時(shí)，濾紙被輕微抽爛，是導(dǎo)致兩種過(guò)濾方法測(cè)定結(jié)果比較時(shí)差異顯著的原因。此外，直接過(guò)濾法所用工具價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單，可根據(jù)需要自由增加過(guò)濾套數(shù)。所以，直接過(guò)濾法比布氏漏斗抽濾法不僅經(jīng)濟(jì)，而且高效，特別是大批量樣品過(guò)濾時(shí)，宜用直接過(guò)濾法。

在動(dòng)物性飼料和飼料原料粗脂肪含量測(cè)定中，飼料酸水解物過(guò)濾時(shí)，直接過(guò)濾法避免了布氏漏斗真空泵抽濾時(shí)濾紙易破損的問(wèn)題，也規(guī)避了過(guò)濾設(shè)備數(shù)量的限制，這種過(guò)濾法不僅操作簡(jiǎn)單，而且過(guò)濾效率比布氏漏斗抽濾法高，特別適合于多個(gè)樣品同時(shí)過(guò)濾。直接過(guò)濾法和布氏漏斗抽濾法所得粗脂肪含量差異不顯著（P>0.05）。說(shuō)明測(cè)定動(dòng)物性飼料和飼料原料中的粗脂肪含量過(guò)濾時(shí)使用直接過(guò)濾法可行。