劉靜，穆敬平，廖恒

脊髓損傷致殘率高、治愈率低[1]，除導(dǎo)致?lián)p傷水平以下感覺、自主神經(jīng)功能障礙及軀體運動功能損傷外，還可造成中樞性疼痛[2]。患者主觀感受為損傷水平以下皮膚痛覺已消失區(qū)域的疼痛，常表現(xiàn)為誘發(fā)痛、自發(fā)間斷痛或自發(fā)持續(xù)痛[3]。在脊髓損傷后急性期（15天內(nèi)）表現(xiàn)為急性痛超敏并伴有自發(fā)痛行為學(xué)改變[4]。在自發(fā)痛動物模型中，神經(jīng)源性疼痛的動物會出現(xiàn)損傷平面以下部位搔抓、舔咬和自噬，其中自噬現(xiàn)象是公認(rèn)的嚴(yán)重自發(fā)痛[5]。脊髓損傷誘發(fā)痛、自發(fā)間斷痛或自發(fā)持續(xù)痛的發(fā)生率達(dá)11%～94%，且重度疼痛甚至達(dá)到5%～30%，可導(dǎo)致患者藥物成癮、抑郁、甚至出現(xiàn)自殺傾向[6]。研究表明，低頻電針可提高大鼠50%足底機械縮足反應(yīng)閾值而抑制紫杉醇誘發(fā)的周圍神經(jīng)痛[7]，也可改善脊髓損傷維持期神經(jīng)痛[8]，但低頻電針是否影響脊髓損傷急性期自發(fā)痛（中樞性疼痛）的實驗研究較少。本研究擬研究低頻電針刺激對脊髓損傷急性痛超敏和自發(fā)痛的影響，為臨床治療提供實驗參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與材料

1.1.1 動物及分組 健康SPF級雄性SD大鼠60只，63日齡，體質(zhì)量（360.2±7.4）g，購于湖北省實驗動物中心，飼養(yǎng)于十堰市太和醫(yī)院實驗中心[合格證號：SCX K(鄂)2019-0005]并在中心完成全部實驗。實驗期間滿足動物福利，術(shù)后分籠飼養(yǎng)。

1.1.2 實驗器材 NeuroExam M-800A肌電圖/誘發(fā)電位儀（珠海市邁康科技有限公司）；足底熱輻射測痛儀（上海瑞鮑生物科技有限公司）；纖毛機械刺激針（von Frey hair，瑞典）；LH202H-四導(dǎo)韓氏穴位神經(jīng)刺激儀（北京華運安特）。

1.2 方法

1.2.1 分組 采用隨機數(shù)字表編號，按隨機、對照、盲法原則將大鼠隨機分為對照組、模型組和低、中、高頻電針組，每組12只。

1.2.2 大鼠脊髓損傷致急性自發(fā)痛模型 模型組和低、中、高頻電針組實驗前禁食6 h、不禁水。10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，以L1為中心切開脊正中皮膚、分離淺肌層，暴露T13～L2椎板及棘突并用咬骨鉗咬除L1椎板，充分暴露L2節(jié)段脊髓，在長有機玻璃管（20 cm）引導(dǎo)下將銅棍（20 g）設(shè)定在15 cm處，自由墜落擊打L2節(jié)段脊髓造成3N脊髓損傷[9]。對照組手術(shù)同前，但不擊打L2節(jié)段脊髓。術(shù)后分層縫合，碘伏消毒后分籠飼養(yǎng)。隔日觀察，以大鼠雙后肢癱瘓，自發(fā)嘶叫及對軀體下部、尾部和后肢舔咬、搔抓或自噬為成功造模標(biāo)準(zhǔn)[10]。

1.2.3 治療 于術(shù)后12 h，將低、中、高頻電針組大鼠固定，參照《華興邦大鼠穴位圖譜》，選擇0.25 mm×1 mm針灸針，于T8～T12節(jié)段棘突下緣兩側(cè)4 mm處取夾脊穴，于后肢外踝與跟腱之間的凹陷中取昆侖穴，于膝關(guān)節(jié)后外側(cè)、腓骨小頭下5 mm取足三里進(jìn)針，接穴位神經(jīng)刺激儀，分別用低頻（2 Hz，2 mA）、中頻（50 Hz，2 mA）、高頻（100 Hz，2 mA）進(jìn)行針刺，25 min/次，1次/d，共14 d。對照組、模型組僅固定25 min。

1.2.4 自發(fā)痛行為學(xué)觀察 實驗期間每天定時觀察2 h大鼠是否出現(xiàn)自發(fā)嘶叫及對軀體下部、尾部和后肢舔咬、搔抓和自噬等現(xiàn)象。

1.2.5 痛閾測定 治療結(jié)束后采用von Frey Hairs痛閾測定方法測量大鼠損傷下端軀干對非傷害性機械性輕壓和輕觸之疼痛反應(yīng)閾值，同時觀察引起50%前爪抬足的閾值。以開始后10 s內(nèi)出現(xiàn)對輕壓的嘶叫、躲避或攻擊，并出現(xiàn)抬前爪1次者為陽性；以引起5次痛反應(yīng)重力為痛反應(yīng)閾值；以橡皮撫過下端軀體皮膚引起痛反應(yīng)為對輕觸刺激的痛反應(yīng)閾值；采用足底熱輻射測痛儀檢測各組大鼠熱縮足潛伏期（thermal paw withdrawal latency，PWL）和50%機 械 性 縮 足 閾 值（paw withdrawal threshold，PWT）[9,10]。

1.2.6 體感誘發(fā)電位（somatosensory evoked potential，SEP）記錄 治療結(jié)束后麻醉大鼠，在背部正中切開皮膚，暴露L1段硬脊膜并在表面接銀絲電極，于足跟處給予電刺激（1.2～1.4 mA），記錄SEP潛伏期及N波、P波的波幅。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 21.0軟件處理數(shù)據(jù)。符合正態(tài)分布以及方差齊性的計量資料以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 低頻電針對自發(fā)痛行為學(xué)的影響

模型組的自發(fā)疼痛行為學(xué)動作（自發(fā)嘶叫、對損傷平面以下部位、尾部和后肢的搔抓、舔咬和自噬）的發(fā)生次數(shù)較對照組增多（P＜0.05）；3個電針組的自發(fā)疼痛行為學(xué)動作的發(fā)生次數(shù)均低于模型組（均P＜0.05），且低頻電針組低于中、高頻電針組（均P＜0.05）；中、高頻電針組組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組大鼠自發(fā)痛行為學(xué)比較（次,±s）

表1 各組大鼠自發(fā)痛行為學(xué)比較（次,±s）

注：與對照組比較，①P<0.05；與模型比較，②P<0.05；與低頻電針組比較，③P<0.05

組別對照組模型組高頻電針組中頻電針組低頻電針組只數(shù)12 12 12 12 12搔抓1.02±0.02 22.87±2.09①16.03±1.21②③15.97±1.03②③10.59±0.84②舔咬0.05±0.00 13.23±1.90①10.99±0.98②③10.92±1.14②③8.79±0.71②自發(fā)嘶叫0.00±0.00 13.34±1.81①10.25±0.92②③9.13±1.24②③7.95±0.57②自噬0.00±0.00 5.97±0.38①4.26±0.52②③3.92±0.63②③3.06±0.97②

2.2 低頻電針對急性痛超敏的影響

與對照組相比，模型組脊髓損傷后急性期對非傷害性機械性輕觸、輕壓損傷軀干下端皮膚和前爪痛閾顯著降低（均P＜0.05），3個電針組的上述指標(biāo)高于模型組（均P＜0.05），且低頻電針組高于中、高頻電針組（均P＜0.05）；與對照組相比，模型組急性痛超敏發(fā)生率增高（P＜0.05），3個電針組的急性痛超敏發(fā)生率均低于模型組（P＜0.05），且低頻電針組低于中、高頻電針組（均P＜0.05）；而中、高頻電針組組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 各組大鼠急性痛超敏結(jié)果比較（±s）

表2 各組大鼠急性痛超敏結(jié)果比較（±s）

注：與對照組比較，①P<0.05；與模型比較，②P<0.05；與低頻電針組比較，③P<0.05

組別對照組模型組高頻電針組中頻電針組低頻電針組只數(shù)12 12 12 12 12機械輕壓/g 67.94±7.42 9.03±1.17①19.57±1.69②③20.54±1.72②③26.41±1.26②輕觸皮膚/g 71.58±5.76 10.61±3.34①26.36±1.02②③27.01±1.92②③33.82±2.30②輕壓前爪/g 59.54±4.24 5.61±1.05①29.14±1.31②③30.75±1.17②③36.25±2.17②急性痛超敏%0.00 11.78①8.97②③8.54②③6.09②

2.3 低頻電針對PWL和PWT的影響

與對照組相比，模型組PWL和PWT降低（均P＜0.05）；3個電針組的PWL和PWT均高于模型組（均P＜0.05），且低頻電針組高于中、高頻電針組（均P＜0.05）；中、高頻電針組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

表3 各組PWL和PWT比較（s,±s）

表3 各組PWL和PWT比較（s,±s）

注：與對照組比較，①P<0.05；與模型比較，②P<0.05；與低頻電針組比較，③P<0.05

組別對照組模型組高頻電針組中頻電針組低頻電針組只數(shù)12 12 12 12 12 PWL 12.76±1.32 6.98±0.76①8.92±0.72②③9.05±0.69②③11.07±0.54②PWT 13.07±1.29 9.63±0.53①10.04±0.66②③10.48±0.81②③12.37±0.93③

2.4 低頻電針對SEP的影響

與對照組相比，模型組SEP潛伏期及N波、P波波幅均增加（均P＜0.05）；3個電針組的SEP潛伏期及N波、P波波幅低于模型組（均P＜0.05），且低頻電針組低于中、高頻電針組（均P＜0.05）；中、高頻電針組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表4。

表4 各組SEP比較（±s）

表4 各組SEP比較（±s）

注：與對照組比較，①P<0.05；與模型比較，②P<0.05；與低頻電針組比較，③P<0.05

組別對照組模型組高頻電針組中頻電針組低頻電針組只數(shù)12 12 12 12 12潛伏期/ms 22.54±1.87 34.27±2.10①32.03±1.97②③32.29±1.70②③30.57±1.32②N波/mv 9.71±0.98 13.13±1.50①12.01±1.14②③12.05±1.37②③10.85±1.82②P波/mv 14.56±1.91 18.04±1.25①17.21±1.03②③17.09±1.82②③15.39±0.87②

3 討論

電針對不同類型的疼痛均有鎮(zhèn)痛作用，但電針的刺激頻率對不同病因?qū)е碌奶弁吹逆?zhèn)痛效果不同[11]。脊髓損傷后的疼痛可為痛覺過敏、痛覺超敏、自發(fā)痛等[12]，其癥狀與脊髓受損的部位和損傷程度有關(guān)[13]。

急性痛超敏和自發(fā)痛行為學(xué)改變是脊髓損傷急性期的重要表現(xiàn)，如患者在脊髓損傷后出現(xiàn)捏掐、捶打下肢等行為改變[5]。本研究模型大鼠自發(fā)疼痛行為學(xué)動作明顯增多，對非傷害性機械性輕觸、輕壓損傷軀干下端皮膚和前爪痛閾顯著降低，急性痛超敏發(fā)生率增高，PWL和PWT降低。本研究采用低、中、高3種頻率電針分別刺激夾脊穴和雙側(cè)昆侖和足三里，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3種頻率的電針均可減輕急性痛超敏和改善自發(fā)痛行為學(xué)，且低頻電針較中、高頻效果更明顯。痛閾檢查結(jié)果也顯示電針可提高脊髓損傷大鼠的PWL和PWT，低頻組效果更好。這提示電針治療有利于降低脊髓損傷大鼠的痛覺敏感性，減輕應(yīng)激性損傷[14]。

SEP可反映脊髓運動及感覺上行通路傳導(dǎo)通路的完整性及功能狀態(tài)，脊髓損傷后上行通路纖維受損，其傳導(dǎo)的神經(jīng)沖動和同步興奮的皮質(zhì)感覺神經(jīng)元數(shù)量減少，由此上行神經(jīng)沖動傳導(dǎo)速度減慢，SEP潛伏期延長，N波和P波波幅增加[15]。本實驗?zāi)Ｐ徒MSEP潛伏期延長、N波和P波波幅增加，提示本模型為脊髓不完全性損傷為主且疼痛持續(xù)時間延長。電針治療組SEP潛伏期縮短，N波和P波波幅降低，提示針刺可降低脊髓損傷造成的傷害性刺激持續(xù)時間，低頻效果更好。根據(jù)中醫(yī)臟腑經(jīng)絡(luò)理論推論：脊髓的功能與督脈相似，脊髓損傷可視為“督脈損傷”，用低頻微電流刺激可疏通經(jīng)絡(luò)并促進(jìn)脊髓再生[16]。而“足三里”、“昆侖”二穴具有調(diào)補氣血、活血化瘀等功效，在針刺治療炎性痛及神經(jīng)痛中有廣譜性與特異性[17]。這也是本研究選用基本思路。

綜上所述，低頻電針刺激T8～T12節(jié)段夾脊穴和雙側(cè)昆侖和足三里，能提高急性自發(fā)痛模型大鼠痛閾，減輕脊髓損傷致痛超敏，并改善由自發(fā)痛引起的行為學(xué)變化。