韓超，余勤薇，孫雅迪，吳佳薇，李雲(yún)娜，黃金莎

帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）是第二大神經(jīng)退行性疾病，以強(qiáng)直、震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩和步態(tài)、姿態(tài)異常為主要臨床表現(xiàn)[1]。PD的病因尚未完全明確，基因和環(huán)境因素的交互作用共同導(dǎo)致PD發(fā)病的假說已被廣泛接受。其中基因的遺傳變異被認(rèn)為是PD易患性的重要因素之一[2,3]。近來一項(xiàng)歐洲全基因組關(guān)聯(lián)研究（Genome-Wide Association Studies，GWAS）證實(shí)固醇調(diào)控元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子（SREBF1）基因內(nèi)含子上的位點(diǎn)rs11868035可增加PD患病率[4]。但目前SREBF1與中國PD人群患病率之間的關(guān)系尚不確定。本研究以華中地區(qū)漢族人群為研究對(duì)象，探討SREBF1基因rs11868035位點(diǎn)與PD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性，為揭示該基因與PD的關(guān)聯(lián)提供進(jìn)一步證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年9月至2017年12月在協(xié)和醫(yī)院就診的華中地區(qū)PD患者471例納入PD組，其中男275例，女196例；選擇同期在協(xié)和醫(yī)院體檢的健康人536例納入對(duì)照組，其中男300例，女236例。入組患者均為漢族人群。PD診斷依據(jù)英國腦庫的PD診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。所有入組患者均自愿參加并簽署知情同意書。本研究方案經(jīng)華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 基因多態(tài)性檢測(cè) 使用DNA提取試劑盒（北京百泰克公司）提取入組受試者外周血基因組DNA，提取方法參考試劑盒說明書。rs11868035位點(diǎn)正向引物序列為：ACGTTGGATGTGGAAGTCAGTCCATCCTCC，反向引物序列為ACGTTGGATGTCAACCCTTAGGGCCT CCAT。通過PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物純化，單堿基延伸反應(yīng)，再經(jīng)ABI 3730 DNA分析儀測(cè)序，數(shù)據(jù)分析使用Gene Mapper（4.1版）。

1.2.2 組間數(shù)據(jù)比較 首先比較PD組和對(duì)照組rs11868035位點(diǎn)等位基因和基因型頻率，然后進(jìn)一步對(duì)2組進(jìn)行亞組等位基因和基因型頻率數(shù)據(jù)比較：①發(fā)病年齡≤50歲的患者歸于早發(fā)性帕金森?。╡arly-onset Parkinson’s disease，EOPD）亞組，與對(duì)照組中年齡≤50歲的亞組人群進(jìn)行比較。②年齡＞50歲的患者歸于晚發(fā)性帕金森?。╨ate-onset Parkinson’s disease，LOPD）亞組，與對(duì)照組中年齡＞50歲的亞組人群比較。③男性PD患者納入男性PD亞組，與對(duì)照組男性亞組人群比較。④女性PD患者納入女性PD亞組，與對(duì)照組女性亞組人群比較。

1.2.3 文獻(xiàn)檢索 行文獻(xiàn)檢索及Meta分析，進(jìn)一步探索SREBF1基因rs11868035位點(diǎn)變異與中國人群PD易患性的關(guān)聯(lián)。使用Review Manager 5.4軟件，納入Pubmed、Cochrane Central Register of Controlled Trials、EMBASE、Chinese National Knowledge Infrastruction Database數(shù)據(jù)庫中有關(guān)“SNP rs11868035和PD”的相關(guān)原始資料。檢索詞由主體詞+自由詞組成，中文檢索詞包括：SREBF1、rs11868035、帕金森?。挥⑽臋z索詞為SREBF1、rs11868035、Parkinson’s disease。檢索時(shí)限為建庫至2020年10月，進(jìn)行后續(xù)分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0、Review Manager 5.4軟件處理數(shù)據(jù)。等位基因和基因型頻率以百分比表示，Hardy-Weinberg平衡驗(yàn)證基因型分布的一致性。Logistic回歸分析比值比（OR）和95%置信區(qū)間（CI），并比較基因型和等位基因頻率；Meta分析使用固定或隨機(jī)效應(yīng)模型計(jì)算總OR值和95%CI，Z檢驗(yàn)確定總OR值有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，I2統(tǒng)計(jì)量反應(yīng)數(shù)據(jù)來源異質(zhì)性；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 rs11868035基因多態(tài)性與PD發(fā)病關(guān)系

PD組和對(duì)照組的基因型和等位基因頻率分布見表1-5。PD組和對(duì)照組rs11868035位點(diǎn)分布均符合Hardy-Weinberg平衡。

表1 PD和對(duì)照組rs11868035位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布[例(%)]

2組基因遺傳學(xué)分析結(jié)果示rs11868035位點(diǎn)等位基因A/G在2組間頻率分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［Avs.G,P=0.128,OR=1.259,95%CI(0.715-1.172)］。其中，G是頻率較小的基因，顯性模型[AG+GG/AA,P=0.335,OR=0.872,95%CI(0.660-1.152)]及校正年齡、性別等因素后[P=0.449,OR=0.897,95%CI(0.676-1.189)]，隱性模型［GG/AG+AA,P=0.612,OR=1.236,95%CI(0.544-2.810)］及校正年齡、性別等因素后[P=0.481,OR=1.349,95%CI(0.586-3.108)]在2組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 EOPD及對(duì)照亞組rs11868035位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布[例(%)]

表3 LOPD及對(duì)照亞組rs11868035位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布[例(%)]

2.2 Meta分析結(jié)果

為進(jìn)一步評(píng)估SREBF1基因位點(diǎn)rs11868035與PD相關(guān)性，共納入包括本研究在內(nèi)的4項(xiàng)研究（表6）進(jìn)行Meta分析。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，存在異質(zhì)性（I2=91%，P＜0.01），后續(xù)采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。等位基因模型中，以G基因?yàn)楸┞兑蛩?，A基因?yàn)榉潜┞兑蛩?。結(jié)果顯示，具有G等位基因的人群發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無明顯升高（OR=1.24，95%CI0.84-1.83）。因而我們推測(cè)等位基因模型中SNP rs11868035與PD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無明顯相關(guān)性（P=0.28），見表6，圖1。

表4 男性PD及對(duì)照亞組rs11868035位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布[例(%)]

表5 女性PD及對(duì)照亞組rs11868035位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布[例(%)]

表6 rs11868035位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布文獻(xiàn)分析[例(%)]

圖1 rs11868035位點(diǎn)與PD發(fā)病關(guān)系等位基因模型森林圖

3 討論

SREBF1基因參與體內(nèi)脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)，具有調(diào)控脂肪生成[6]及脂肪細(xì)胞分化[7]的能力。最新研究發(fā)現(xiàn)SREBF1是調(diào)控中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元神經(jīng)再生的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子[8]，敲減SREBF1基因表達(dá)可引起PD相關(guān)基因Parkin易位及中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元發(fā)生線粒體自噬改變[9]。以上提示SREBF1基因在分子機(jī)制上參與PD的發(fā)病。

rs11868035位點(diǎn)位于SREBF1基因的內(nèi)含子上。GWAS研究提示rs11868035增加PD發(fā)病概率，最近一項(xiàng)中國東北地區(qū)人群的臨床研究亦顯示rs11868035與PD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈正相關(guān)，并且相關(guān)人群PD運(yùn)動(dòng)癥狀及認(rèn)知功能障礙損害更為嚴(yán)重[10]。一項(xiàng)國外研究指出SREBF1基因與PD患者步態(tài)異常發(fā)生率呈正相關(guān)性[11]。但也有研究認(rèn)為，SREBF1基因rs11868035位點(diǎn)表達(dá)在PD組與正常對(duì)照組無顯著差別[12,13]，與本研究結(jié)論一致。

鑒于已有的研究結(jié)果示rs11868035與PD的患病風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系結(jié)論不一致，本研究進(jìn)一步對(duì)既往研究進(jìn)行匯總并進(jìn)行Meta分析，結(jié)果示rs11868035位點(diǎn)與PD易患性無明顯相關(guān)性，與此前大樣本GWAS研究結(jié)論不一致。究其原因，可能與以下因素相關(guān)。①不同地區(qū)人群種族、遺傳結(jié)構(gòu)等不同，SREBF1基因多態(tài)性存在差異。②PD的發(fā)病同時(shí)受到基因環(huán)境交互作用影響，不同地域環(huán)境因素差異也可能是重要原因之一。③不同研究中樣本量大小及統(tǒng)計(jì)分析方式亦存在差異。

綜上所述，本研究結(jié)合病例及Meta分析，發(fā)現(xiàn)SREBF1基因rs11868035位點(diǎn)與華中地區(qū)漢族人群PD的易患性無明顯相關(guān)性。但由于本研究納入的樣本量有限，統(tǒng)計(jì)效能有所下降。為進(jìn)一步確定SREBF1基因rs11868035位點(diǎn)是否與中國人群PD發(fā)病相關(guān)，研究者需要納入更大樣本進(jìn)一步分析其與PD發(fā)病相關(guān)性。