余 蘭，藏漢青，偉乃蓮

(河北省保定市第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河北 保定 071051)

大多數(shù)學(xué)者認為，短暫性腦缺血發(fā)作(transient ischemic attack，TIA)發(fā)病病因可能和血管微小栓塞、血流動力學(xué)改變有著一定的關(guān)聯(lián)[1]。TIA是神經(jīng)內(nèi)科的常見病、多發(fā)病，是一種由頸動脈或者椎基底動脈系統(tǒng)發(fā)生血供不足導(dǎo)致的腦組織局灶性缺血所造成的突發(fā)、短暫的可逆性神經(jīng)功能障礙。該病可作為腦梗死的一種預(yù)警信號[2-3]。腦梗死又稱缺血性腦卒中，是一種腦部血液循環(huán)障礙，由缺血或缺氧所導(dǎo)致的局限性腦組織缺血壞死或者軟化[4-5]。大量臨床研究顯示，血管平滑肌細胞出現(xiàn)異常增生會導(dǎo)致動脈粥樣硬化的出現(xiàn)，而動脈粥樣化的出現(xiàn)常會導(dǎo)致腦缺血的出現(xiàn)。微小RNA-145(microrna-145,miR-145)是一種血管平滑肌細胞表型和增殖的一種重要的調(diào)節(jié)因子，對miR-145進行過表達能夠促進血管平滑肌細胞的分化、抑制平滑肌細胞的增殖[6]。TIA發(fā)生后有著極高的概率進展為腦梗死，所以對TIA患者進行早期的診斷以及同時結(jié)合影像學(xué)檢查評估及其預(yù)估尤為重要[7]。ABCD2評分(age blood pressure,clinicalfeatures,durationofsymptoms,diabetes)量表是一種臨床上用來預(yù)測TIA短期進展為腦梗死的一種較為有效的方法，其中A代表著年齡、B代表血壓、C代表著臨床特征、D代表著癥狀持續(xù)時間以及糖尿病[8]。兩種方法均對TIA的轉(zhuǎn)歸有一定預(yù)測價值，但目前對于miR-145聯(lián)合ABCD2評分表的研究較少。為臨床對TIA患者進行更有效風(fēng)險評估，本研究中使用miR-145、ABCD2評分聯(lián)合動脈超聲對TIA發(fā)作后進展為腦梗死患者進行檢測，旨在探究miR-145、ABCD2評分聯(lián)合動脈超聲對TIA發(fā)作后進展為腦梗死的風(fēng)險評估價值分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年2月—2020年2月我院神經(jīng)內(nèi)科收治的TIA患者132例，按照有無近進展為腦梗死分為TIA未進展為腦梗死組和TIA進展為腦梗死組，TIA未進展為腦梗死組患者76例，TIA進展為腦梗死組患者56例。其中TIA未進展為腦梗死組包括男性41例，女性35例，年齡60～72歲，平均(66.0±4.8)歲；TIA進展為腦梗死患者組包括男性32例，女性24例，年齡65～76歲，平均(70.5±4.4)歲。所有患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，具有可比性。

納入標準：所有患者在入院時均經(jīng)過頭磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)+擴散加權(quán)成像(diffusion weighted imaging,DWI)檢測確診為TIA患者。排除標準：①合并有心、肝、腎等器官功能不全者；②依從性差者；③所有患者均無異常腫瘤等疾病。

所有患者及家屬對本研究均知情，并通過我院倫理委員會認可，倫理委員會批準文號(2020)倫申第(56號)。

1.2方法

1.2.1檢測方法 miR-145檢測：提取miR-145總RNA，檢測RNA純度、含量，逆轉(zhuǎn)錄處理后獲得cDNA，使用Primer5.0軟件設(shè)計引物，采用2-△△Ct方法計算，內(nèi)參U6。設(shè)置反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：25 ℃ 10 min,40 ℃ 60 min,85 ℃ 5 min；設(shè)置擴增條件:94 ℃ 20 s、72 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s,35個循環(huán)，采用2-△△Ct方法計算出需要檢測的miR-145表達量。

ABCD2評分檢測[9]：根據(jù)Johnson以及Roth等提出的ABCD2評分法進行評分，最高分數(shù)為7分，0～3分為低危人群，4～5分為中危人群，6～7分為高危人群。

miR-145+ABCD2+動脈超聲檢測：受檢者取頭后仰臥位，在頸后置一低枕，使用M2540A型多普勒超聲顯像儀進行檢測，將探頭調(diào)至7.5 MHz進行檢測。檢查頸部一側(cè)血管時，頭頸部偏向的對側(cè)約45 ℃，充分暴露頸部。將頸部直接置于頸部，從長軸和縱軸兩個方向連續(xù)掃查血管走行情況以及解剖結(jié)構(gòu)。觀察頸總動脈、頸總脈分叉處、椎動脈顱外段以及雙側(cè)鎖骨下動脈，對TIA進展情況進行檢測評比。使用動脈超聲檢測后聯(lián)合miR-145、ABCD2評分對TIA進展為腦梗死患者進行評判。

1.2.2纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)IB)、超敏C-反應(yīng)蛋白(hypersensitive C-reactive protein，hs-CRP)、低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平檢測比較 使用酶聯(lián)免疫吸附法檢測FIB、hs-CRP、LDL-C水平，將血清置于室溫后，標記酶標板，制作標準品，然后取出試劑盒，以1∶2的稀釋液稀釋樣品；在反應(yīng)孔上依次加入稀釋好的待測血清和標準品100 μL/孔，放置37 ℃恒溫孵育箱中濕育2 h；然后用專用的洗滌液將反應(yīng)板清洗3次，再加入抗體工作液(1∶100倍稀釋后)100 μL/孔，放于37 ℃恒溫孵育箱中濕育45 min；繼續(xù)清洗反應(yīng)板4次后，在反應(yīng)孔內(nèi)加入TMB溶液100 μL/孔，置于37℃恒溫孵育箱中濕育45 min后在反應(yīng)孔內(nèi)加入終止液100 μL/孔終止反應(yīng)，在450 nm波長測定吸光度，顏色反應(yīng)深淺與FIB、hs-CRP、LDL-C水平成正比，經(jīng)繪制標準曲線計算FIB、hs-CRP、LDL-C水平。

1.2.3檢查結(jié)果統(tǒng)計 對所有受檢者分別進行miR-145、ABCD2評分、miR-145+ABCD2+動脈超聲檢測檢查后的確診情況以及漏診、誤診情況進行統(tǒng)計，比較三種檢測手段的漏診率和誤診率。

1.2.4診斷效能 對血清檢測和多普勒超聲診斷的敏感度、特異度和準確性進行統(tǒng)計。敏感度=真陽性例數(shù)/(真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù))×100%。特異度=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù))×100%。準確度=(真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù))/總例數(shù)×100%。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。計量資料比較采用兩獨立樣本的t檢驗；計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.12組患者ABCD2評分和miR-145表達比較 與TIA未進展為腦梗死組相比，TIA進展為腦梗死組患者ABCD2評分上升，miR-145表達下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表 2組ABCD2評分和mir-145表達對比

2.22組患者FIB、hs-CRP、LDL-C水平比較 與TIA未進展為腦梗死組相比，TIA進展為腦梗死組患者FIB、LDL-C水平下降，hs-CRP水平上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組FIB、hs-CRP、LDL-C水平比較

2.3各種檢測手段對TIA進展腦梗死的檢測率比較 miR-145檢測和ABCD2評分檢測相比，兩種檢測手段對TIA進展腦梗死的檢出率相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與miR-145檢測和ABCD2評分檢測，miR-145+ABCD2評分+動脈超聲檢測對TIA進展腦梗死的檢出率有所上升(P<0.05)。見表3。

表3 3種檢測手段對TIA進展腦梗死的檢測率比較

2.43種檢測手段漏診、誤診情況比較 miR-145檢測手段和ABCD2評分檢測手段漏診率、誤診率相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與miR-145檢測手段和ABCD2評分檢測手段相比，miR-145+ABCD2評分+動脈超聲檢測手段誤診率、漏診率較低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 3種檢測手段的漏診、誤診率比較

2.53種檢測手段敏感度、特異度和準確度比較 miR-145檢測和ABCD2評分檢測的敏感度、特異度和準確度比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與miR-145檢測和ABCD2評分檢測手段比較，miR-145+ABCD2評分+動脈超聲檢測敏感度、特異度和準確度有所上升(P<0.05)。見表5。

表5 3種檢測手段敏感度、特異度和準確度對比

3 討 論

TIA是一種腦、脊髓或者視網(wǎng)膜等局部局灶性缺血所導(dǎo)致的一種短暫性的神經(jīng)功能缺損，屬于較為常見的缺血性腦血管疾病。該病的發(fā)生與動脈粥樣硬化、動脈狹窄以及血流動力學(xué)異常等多種因素密切相關(guān)[10-11]。TIA的轉(zhuǎn)歸有著幾種情況，進展為腦梗死便是其中之一。TIA作目前依然成為短期內(nèi)發(fā)生腦梗死的特級警報，單一的因素預(yù)測難以預(yù)測TIA進展為腦梗死的準確性較低[12]。TIA進展為腦梗死是多種危險因素共同的作用，其中顱內(nèi)外大血管動脈粥樣化病變是其重要的危險因素，是由頸動脈易損斑塊導(dǎo)致顱內(nèi)血管血流動力學(xué)改變，從而促進TIA進展為腦梗死的重要風(fēng)險因素[13-14]。腦梗死是一種高致殘率的疾病，腦梗死急性期和后續(xù)的治療將會產(chǎn)生巨大的費用支出，往往會導(dǎo)致患者喪失勞動能力，甚至生活無法自理或者死亡，對社會和家庭造成嚴重的負擔。為了有效的避免TIA進展為腦梗死，對其進行早期積極的臨床干預(yù)尤為重要[15-16]。

大量臨床研究顯示，miR-145、miR-127等miRNA是影響粥動脈硬化穩(wěn)定性的重要因素。miRNA是一類微小非編碼RNA，單個的miRNA能夠?qū)Χ鄠€的mRNA發(fā)揮抑制作用。大量臨床研究顯示，miR-145可能同時調(diào)節(jié)不同的mRNA，其在動脈粥樣硬化中發(fā)揮著重要的作用，表現(xiàn)在對血管平滑肌細胞的炎癥水平、轉(zhuǎn)分化的調(diào)控。ABCD2評分是目前最成熟和應(yīng)用最為廣泛的模型，具有一定的應(yīng)用價值。TIA后早期內(nèi)發(fā)生腦梗死往往是由多種危險因素共同的結(jié)構(gòu)，其危險因素越多，發(fā)生腦梗死的風(fēng)險越高。ABCD2評分是由年齡、血壓、臨床特征、癥狀持續(xù)時間和糖尿病5項內(nèi)容組成，總分為7分，分數(shù)越高證明患者病癥越嚴重[17-18]。李杰等[19]在研究中指出，ABCD2評分越高，患者TIA進展為腦梗死的概率就越高。本研究中使用miR-145、ABCD2評分聯(lián)合動脈超聲對TIA患者進行檢測，結(jié)果顯示，TIA發(fā)作后進展為腦梗死患者的ABCD2評分較高。說明使用miR-145、ABCD2評分聯(lián)合動脈超聲對TIA發(fā)作后進展為腦梗死患者進行檢測，能夠提高對患者的準確率和診斷效能。

FIB是由肝細胞合成和分泌的一種糖蛋白，是一種參與凝血和止血過程中的重要蛋白纖維蛋白。高FIB是各種血栓性疾病重要的危險因素，在臨床上被認定疾病狀態(tài)的標志物。hs-CRP是機體受到微生物入侵或者組織損傷等炎癥性刺激時肝細胞合成的急性相關(guān)蛋白。血漿中LDL-C是運輸內(nèi)源性膽固醇的主要載體，能夠通過結(jié)合其細胞膜上的低密度脂蛋白受體被降解和轉(zhuǎn)化。大量臨床研究顯示，F(xiàn)IB、LDL-C、hs-CRP與TIA發(fā)作后進展為腦梗死患者具有一定的相關(guān)性，對FIB、LDL-C、hs-CRP進行檢測，能夠?qū)IA發(fā)作后進展為腦梗死病癥的發(fā)生發(fā)展直觀的評價[20]。吳躍華等[21]在研究中指出，TIA進展為腦梗死患者FIB水平異常下降，說明FIB與TIA發(fā)作后進展為腦梗死病癥有著密切的關(guān)聯(lián)。本研究顯示，對其進行檢測顯示，TIA發(fā)作后發(fā)展腦梗死患者FIB水平異常下降，說明血清FBI與TIA發(fā)作后發(fā)展腦梗死患者有著密切的關(guān)聯(lián)。

綜上所述，使用miR-145、ABCD2評分聯(lián)合動脈超聲對TIA患者進行檢測，可對于TIA進展為腦梗死患者的檢出率上升，漏診、誤診情況有所降低，降低了TIA發(fā)作后進展為腦梗死的風(fēng)險評估，對TIA發(fā)作后進展為腦梗死有著重要的臨床。