吳敏華，蔡 葵，朱琳睿，黎裕元

佛山市第一人民醫(yī)院輸血科，廣東 佛山 528000

輸血前檢測(cè)是保證臨床用血安全的重要手段，隨著輸血技術(shù)的不斷完善和發(fā)展，輸血前ABO血型鑒定已避免了極大一部分的輸血不良反應(yīng)的發(fā)生，現(xiàn)隨著不規(guī)則抗體篩查的普及，使由于不規(guī)則抗體引起的臨床輸血不良反應(yīng)逐漸得到重視［1］。血型不規(guī)則抗體是指ABO血型系統(tǒng)以外的其他血型系統(tǒng)抗體，如Rh、MNS、Lewis等血型系統(tǒng)的抗體，是引起免疫性溶血性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病、血型鑒定以及交叉配血困難的主要因素之一［2］，把不規(guī)則抗體篩查作為擬輸血患者輸血前檢測(cè)的常規(guī)項(xiàng)目，進(jìn)一步保障臨床用血安全。由于抗體分布有地域差異，收治不同患者不同醫(yī)院存在差異［3-4］，特別是綜合性醫(yī)院和?？?。佛山市第一人民醫(yī)院屬于南方綜合性三甲醫(yī)院，人群分布會(huì)導(dǎo)致抗體分布有所不同，故現(xiàn)對(duì)本地區(qū)人群不規(guī)則抗體的分布特征和頻率進(jìn)行調(diào)查分析，報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從臨床輸血安全與血液管理軟件（廣州創(chuàng)惠信息科技有限公司，2.0版）選擇2020年1月—11月佛山市第一人民醫(yī)院擬進(jìn)行輸血患者的不規(guī)則抗體檢查結(jié)果共10 423例，陽(yáng)性結(jié)果共112例。（1）陽(yáng)性納入標(biāo)準(zhǔn)：①不同方法學(xué)復(fù)查確定陽(yáng)性標(biāo)本者；②譜細(xì)胞鑒定陽(yáng)性標(biāo)本者。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①?gòu)?fù)查后陰性標(biāo)本者；②譜細(xì)胞無(wú)法鑒定標(biāo)本者；③使用抗CD38等用藥干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果標(biāo)本者。（3）符合納入/排除標(biāo)準(zhǔn)112名患者入組研究對(duì)象，年齡1天～78歲，其中男性40名、女性72名，見表1。

表1 紅細(xì)胞不規(guī)則抗體陽(yáng)性結(jié)果比較 例

1.2 設(shè)備與儀器

不規(guī)則抗體檢測(cè)紅細(xì)胞試劑盒[奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易（中國(guó)）有限公司、上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司]；抗人球蛋白試劑卡[奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易（中國(guó)）有限公司、達(dá)亞美有限責(zé)任公司]、AUTOVUE innova全自動(dòng)血型配血分析儀[奧森多醫(yī)療器械貿(mào)易（中國(guó)）有限公司]；抗體鑒定譜細(xì)胞（Reagens公司）；孵育器；離心機(jī)。以上所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

（1）收集患者靜脈血2～5 ml于EDTA-K2抗凝管中，離心后利用全自動(dòng)血型分析儀進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，具體操作按照科室SOP文件進(jìn)行，質(zhì)控在控。結(jié)果由系統(tǒng)自動(dòng)判讀，以任何一系或多系細(xì)胞出現(xiàn)凝集在凝膠上層或中間為抗體陽(yáng)性。（2）對(duì)抗體篩查初步陽(yáng)性患者標(biāo)本進(jìn)行復(fù)檢：采用不同試劑、不同試劑卡、試管法進(jìn)行復(fù)查，復(fù)查結(jié)果仍為陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)一步用抗體鑒定譜細(xì)胞進(jìn)行抗體特異性鑒定。（3）血型不規(guī)則抗體特異性鑒定：采用譜細(xì)胞使用微住凝膠法進(jìn)行進(jìn)一步鑒定，同時(shí)加做自身對(duì)照試驗(yàn)，根據(jù)反應(yīng)格局明確抗體性質(zhì)。當(dāng)受檢血漿與所有譜細(xì)胞以及自身細(xì)胞的凝集強(qiáng)度一致時(shí)判斷為非特異性自身抗體；對(duì)存在同種抗體的患者血清分別采用鹽水法、不同標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞的微住凝膠法檢測(cè)后對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞譜采用陰性排除法判斷抗體類型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用IBM SPSSStatistics V22.0.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，納入標(biāo)準(zhǔn)和剔除標(biāo)準(zhǔn)分別為0.05和0.10；以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體分布特點(diǎn)

10 423例檢測(cè)不規(guī)則抗體的患者中共鑒定出特異性抗體112例，總體檢出率1.07%，男性患者不規(guī)則抗體檢出率為0.73%，女性患者不規(guī)則抗體檢出率為1.47%，男性顯著低于女性（P＜0.001）；此外有輸血史患者陽(yáng)性檢出率為1.47%，明顯高于無(wú)輸血史患者的0.85%（P＜0.005）；72例不規(guī)則抗體陽(yáng)性女性患者中有61例有妊娠史，其陽(yáng)性率明顯高于無(wú)妊娠史患者（P＜0.001），見表1。

2.2 112例不規(guī)則抗體陽(yáng)性患者鑒定

112例不規(guī)則抗體陽(yáng)性患者鑒定出107例，占87.70%（107/112），主要為Rh血型系統(tǒng)60例，占56.07%，其中以抗-E抗體檢出率最高，占35.51%；其次為MNS血型系統(tǒng)26例，占24.30%，其中以抗-M檢出率最高，占19.63%；P血型抗體檢出2例、Lewis 9例、Kidd血型5例、Duffy血型1例、Diego血型1例，混合抗體3例，見表2。

表2 紅細(xì)胞血型特異性抗體分布

3 討論

本研究對(duì)10 423例預(yù)輸血患者進(jìn)行了抗體篩查試驗(yàn)，共檢出不規(guī)則抗體陽(yáng)性112例，陽(yáng)性檢出率為1.07%，我國(guó)擬輸血患者中不規(guī)則抗體陽(yáng)性檢出率不同地區(qū)不同種族之間存在較大區(qū)別，大概在0.3%～2.0%之間，與研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果接近［5-7］。不規(guī)則抗體是免疫血液學(xué)中被廣泛熟知的紅細(xì)胞抗體，目前已發(fā)現(xiàn)其能與ABO以外的32種血液系統(tǒng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生反應(yīng)，可能導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)紅細(xì)胞輸注無(wú)效、新生兒溶血病、免疫性溶血性輸血反應(yīng)、自身免疫性溶血反應(yīng)等輸血不良反應(yīng)，極大地危害患者生命安全［8］。因此，輸血前進(jìn)行紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體的檢查對(duì)于確保輸血安全十分重要。

本研究檢出的112例不規(guī)則抗體陽(yáng)性患者中，男性患者的陽(yáng)性率為0.73%，明顯低于女性患者的陽(yáng)性率1.47%；有輸血史患者陽(yáng)性率為1.47%，明顯高于無(wú)輸血史患者的陽(yáng)性率0.85%；有妊娠史患者陽(yáng)性率4.97%，明顯高于無(wú)妊娠史患者的0.30%；輸血和妊娠兩者差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。輸血和妊娠是導(dǎo)致患者產(chǎn)生不規(guī)則抗體的主要原因［9-10］，而女性同時(shí)存在輸血和妊娠雙重免疫機(jī)會(huì)，這使女性獲得不規(guī)則抗體幾率比男性更大，這與本次研究的結(jié)果相符合。這也提示我們輸血醫(yī)務(wù)工作人員要嚴(yán)格遵循《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定，對(duì)有輸血史、妊娠史或短期內(nèi)需要輸血者必須做抗體篩查試驗(yàn)和抗體鑒定試驗(yàn)，對(duì)抗體陽(yáng)性者要選擇適當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)不規(guī)則抗體進(jìn)行鑒定。有報(bào)道顯示，每輸注1 U血液制品產(chǎn)生不規(guī)則抗體的概率為1.0%～1.6%，多次輸血?jiǎng)t紅細(xì)胞致敏風(fēng)險(xiǎn)高達(dá)15%～20%［11］，說(shuō)明多次輸血患者做抗體篩查試驗(yàn)意義十分重大。此外這也提示有輸血史或妊娠史的孕婦及其丈夫進(jìn)行產(chǎn)前抗體篩查試驗(yàn)，以減少新生兒溶血病的發(fā)生率。

112例不規(guī)則抗體陽(yáng)性患者中共鑒定出了107例不規(guī)則抗體，檢出率87.70%。分布結(jié)果表示，Rh血型系統(tǒng)占大部分，其次是MNS血型系統(tǒng)和P血型系統(tǒng)。這提示Rh血型系統(tǒng)可能是造成遲發(fā)性溶血反應(yīng)的重要原因之一，大多數(shù)Rh血型抗體為免疫性IgG抗體，此類抗體可結(jié)合輸入患者體內(nèi)的或表面具有此相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，進(jìn)而破壞紅細(xì)胞縮短紅細(xì)胞的壽命，引起溶血性輸血不良反應(yīng)。如果母嬰Rh血型不合，母親體內(nèi)可能會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)不規(guī)則抗體進(jìn)入胎兒血液循環(huán)，導(dǎo)致嚴(yán)重的新生兒溶血病［12］。本次研究中Rh血型系統(tǒng)中又以抗-E抗體分布為主，這可能的原因如下：E抗原在我國(guó)漢族人群中分布頻率為47%［5］，研究表明，抗原陽(yáng)性與陰性百分率越接近，產(chǎn)生的抗體機(jī)會(huì)也越多。并且由于臨床輸血中，對(duì)患者E抗原的檢測(cè)普及程度較低，故E抗原陰性的患者基本上是隨機(jī)輸血，患者通過(guò)輸血獲得E抗原刺激產(chǎn)生抗-E抗體的概率明顯增加［13-14］。對(duì)比之下，抗-D抗體雖是Rh血型系統(tǒng)中免疫原性最強(qiáng)的抗原，且我國(guó)漢族人群D抗原分布頻率高達(dá)99.6%，但本次研究產(chǎn)生的抗-D抗體僅2例，這與目前國(guó)內(nèi)普遍開展了D抗原檢測(cè)有關(guān)，對(duì)RhD陰性的患者確保盡量輸注RhD陰性血制品。此外，本研究發(fā)現(xiàn)抗-M抗體與抗-Lea抗體也是臨床相對(duì)較常見的抗體，多為IgM類抗體。由于抗-M抗體容易造成新生兒溶血病，對(duì)于抗-M為陽(yáng)性的孕婦或者兒童，輸血時(shí)應(yīng)特別注意預(yù)防溶血反應(yīng)的發(fā)生，有條件的可采取輸注相應(yīng)抗原陰性的紅細(xì)胞。

本研究檢出Kidd血型系統(tǒng)抗體共4例，其中抗-Jka抗體3例，抗-Jkb抗體1例，抗體產(chǎn)生率為0.047%，構(gòu)成比為4.67%，比例高于其他同類型的研究［15］，可能與Kidd血型系統(tǒng)的抗體產(chǎn)生快，消失快，沒(méi)有免疫刺激，抗體強(qiáng)度迅速下降至檢測(cè)閾值以下的特點(diǎn)，以及本研究單位屬于三甲醫(yī)院，重癥患者，反復(fù)輸血患者較多，因此抗體檢出相對(duì)較容易等原因有關(guān)。Kidd血型系統(tǒng)抗體不容易檢出，卻容易導(dǎo)致嚴(yán)重的遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)，因此對(duì)于一旦產(chǎn)生這類型抗體的患者，后期無(wú)論抗體是否減弱至無(wú)法檢出，都要盡量選擇抗原陰性的紅細(xì)胞為其進(jìn)行交叉配血，避免因?yàn)槊庖呋貞浄磻?yīng)，導(dǎo)致溶血［16］。

在本研究中，還發(fā)現(xiàn)一例罕見的抗-Fya抗體。由于國(guó)內(nèi)Fya抗原屬于高頻抗原，在我國(guó)抗原頻率達(dá)到99.85%［17］，在佛山地區(qū)的獻(xiàn)血員中，找到Fya抗原陰性的個(gè)體極其困難。因此本院通過(guò)在患者家系中尋找，以及求助稀有血型庫(kù)等方法，為該患者選擇合適的獻(xiàn)血者。這要求我們?cè)趹?yīng)對(duì)高頻抗原抗體時(shí)，要有更廣闊的思路。各地區(qū)的輸血醫(yī)學(xué)醫(yī)務(wù)工作者也應(yīng)通力合作，盡快建立針對(duì)不同抗原的稀有血型庫(kù)。

由于本單位在抗體鑒定譜細(xì)胞（Reagens公司）、抗體篩查細(xì)胞（美國(guó)強(qiáng)生公司奧森多公司、上海血液生物醫(yī)藥責(zé)任有限公司）所有批次的細(xì)胞中，均沒(méi)有標(biāo)注是否包含Mur抗原。而Mur抗原在我國(guó)南方地區(qū)抗原頻率相當(dāng)高，廣州地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者中Mur抗原陽(yáng)性的頻率為6.59%，番禺地區(qū)為7.16%，香港地區(qū)為6.28%，臺(tái)灣地區(qū)平均頻率高達(dá)7.3%。香港地區(qū)的研究更顯示，抗-Mur在患者和孕婦中出現(xiàn)的頻率分別為0.34%和0.46%，是該地區(qū)最常見的同種不規(guī)則抗體［18-19］。因此不排除本研究有漏檢抗-Mur抗體的可能性，這為本次研究的局限性。在后續(xù)研究中，應(yīng)針對(duì)本地區(qū)抗原分布的特點(diǎn)，在抗體篩查細(xì)胞中，增加具有Mur表型的紅細(xì)胞，使本研究中抗體分布的數(shù)據(jù)，更加真實(shí)客觀，也更能保障患者輸血的安全。

綜上所述，臨床對(duì)于擬輸血的患者進(jìn)行紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的篩查和鑒定具有重要臨床意義，選擇輸注對(duì)應(yīng)抗原陰性的血液制品能夠有效減少輸血反應(yīng)的發(fā)生，提高臨床輸血安全性和有效性。對(duì)此輸血科于2020年開始對(duì)擬輸血患者普及了Rh血型鑒定，給與輸血患者輸注相應(yīng)抗原陰性的血液制品，減少輸血不良反應(yīng)的發(fā)生，保證醫(yī)療安全、保障患者利益。同時(shí)應(yīng)加強(qiáng)不規(guī)則抗體記錄管理，一旦患者檢出不規(guī)則抗體陽(yáng)性，應(yīng)提前備血，避免患者需急用輸血時(shí)無(wú)法提供合適血制品；并及時(shí)記錄避免隨時(shí)間推移患者體內(nèi)抗體滴度減弱至無(wú)法檢測(cè)而導(dǎo)致記憶性免疫反應(yīng)。本研究的局限性在于只是針對(duì)一家醫(yī)院一段時(shí)間的紅細(xì)胞不規(guī)則抗體篩查病例所作的回顧性分析，是否能代表該地區(qū)的紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的現(xiàn)狀，尚需更大范圍、更長(zhǎng)時(shí)間以及更多的病例數(shù)，對(duì)紅細(xì)胞不規(guī)則抗體陽(yáng)性患者進(jìn)行抗體鑒定并輸注對(duì)應(yīng)抗體陰性血液具有重要臨床意義。