湯志鴻 蔣豐智 黎小秀 段高羊 廖瓊

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)是胃內(nèi)第一個被發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌,可致胃炎、胃潰瘍等多種疾病。研究表明,機(jī)體感染Hp后可產(chǎn)生一定程度的免疫應(yīng)答反應(yīng),這種應(yīng)答在清除Hp 的同時其導(dǎo)致的免疫損傷可能又進(jìn)一步加重胃黏膜的損傷［1］。積極探討Hp 感染所產(chǎn)生的機(jī)體免疫答規(guī)律和感染慢性化后免疫損傷造成胃腸疾病的復(fù)雜機(jī)制具有重要的臨床意義。Th9 細(xì)胞是CD4+T 細(xì)胞,通過增強(qiáng)免疫球蛋白E(IgE)介導(dǎo)的免疫反應(yīng),對誘導(dǎo)免疫性疾病發(fā)揮著重要的作用,是腸道免疫系統(tǒng)成熟的標(biāo)志。本研究探討兒童Hp 感染后外周血免疫成熟因子Th9 及主要效應(yīng)因子IL-9 的水平及意義,為預(yù)防、減輕和治療兒童Hp 感染后的免疫損傷提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年1 月～2021 年1 月收治的28 例確診Hp 感染相關(guān)性胃炎患兒作為病例組,另選取同期進(jìn)行健康體檢的28 例Hp 陰性兒童(13C 尿素呼氣試驗(yàn)檢測為陰性)作為對照組。病例組男14 例,女14 例,平均年齡(8.46±3.62)歲。對照組男14 例,女 14 例,平均年齡(7.86±2.42)歲。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 病例組患兒均有消化道癥狀,表現(xiàn)為上腹或臍周疼痛、上腹脹、反酸、噯氣、嘔吐、食欲不振等不適癥狀。既往未進(jìn)行過根除Hp 治療。根據(jù)兒童Hp 感染診治專家共識對Hp 現(xiàn)癥感染的診斷標(biāo)準(zhǔn),完善13C 尿素呼氣試驗(yàn)、糞便Hp 抗原檢測,完善胃鏡檢查、鉗取胃黏膜標(biāo)本用于快速尿素酶試驗(yàn)、組織病理學(xué)檢查。符合下述四項(xiàng)之一者可判斷為Hp 現(xiàn)癥感染［2］：①組織病理學(xué)檢查和快速尿素酶試驗(yàn)均陽性；②13C 尿素呼氣試驗(yàn)或糞便Hp 抗原檢測陽性,并且組織病理學(xué)檢查或快速尿素酶試驗(yàn)結(jié)果其中一項(xiàng)陽性；③有消化性潰瘍出血,病理組織學(xué)或尿素呼氣試驗(yàn)中任一項(xiàng)陽性。

1.3 方法 病例組根除Hp的治療采用10 d序貫療法：質(zhì)子泵抑制劑奧美拉唑+阿莫西林5 d,質(zhì)子泵抑制劑奧美拉唑+克拉霉素+甲硝唑5 d。病例組在治療前和根除Hp 治療后4 周分別采集靜脈血3 ml,離心吸取血清檢測外周血Th9 細(xì)胞、IL-9 水平。對照組僅體檢當(dāng)日留取外周靜脈血檢測Th9 細(xì)胞、IL-9 水平。采用流式細(xì)胞學(xué)檢測外周血Th9 細(xì)胞表達(dá),采用 ELISA 法檢測外周血IL-9 表達(dá),具體操作步驟參照試劑盒說明書。病例組根除Hp 治療后4 周復(fù)查13C 尿素呼氣試驗(yàn)。

1.4 觀察指標(biāo) 比較兩組Th9 細(xì)胞比例及血清IL-9 水平變化；分析病例組Th9 細(xì)胞比例、IL-9 水平與13C 尿素呼氣試驗(yàn)濃度的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。若雙變量呈正態(tài)分布資料,采用Pearson 相關(guān)分析,變量不符合正態(tài)性分布時采用Spearman 相關(guān)分析。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Th9 細(xì)胞比例及血清IL-9 水平變化比 較 病例組治療前外周血Th9 細(xì)胞比例、IL-9 水平均高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=6.47、3.38,P＜0.05)；治療后Th9 細(xì)胞比例、IL-9 水平均較治療前下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.29、4.01,P＜0.05)；病例組治療后Th9 細(xì)胞比例高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.42,P＜0.05)。見表1。

表1 兩組Th9 細(xì)胞比例及血清IL-9 水平變化比較()

表1 兩組Th9 細(xì)胞比例及血清IL-9 水平變化比較()

注：與本組治療前比較,aP＜0.05；與對照組比較,bP＜0.05

2.2 病例組Th9 細(xì)胞比例、IL-9 水平與13C 尿素呼氣試驗(yàn)濃度的相關(guān)性分析 病例組治療前及治療后行13C尿素呼氣試驗(yàn),治療后13C 尿素呼氣試驗(yàn)陰性(＜4‰)判斷為Hp 根除,陽性(＞4‰)判斷為Hp 未根除,Hp根除率為82.14%。13C 尿素呼氣試驗(yàn)濃度與外周血Th9 細(xì)胞比例、血清IL-9 水平采用Spearman 相關(guān)分析,13C 尿素呼氣試驗(yàn)濃度與Th9 細(xì)胞比例、血清IL-9 水平正相關(guān)(rs=0.82、0.74,P＜0.05),即13C 尿素呼氣試驗(yàn)濃度程度越高,外周血Th9 細(xì)胞比例、血清IL-9 水平越高。

3 討論

流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示,全球超過50%的人口感染Hp［3］,其中10%以上可發(fā)展為胃炎［4］,Hp 感染相關(guān)性胃炎表現(xiàn)為腹痛、腹脹、惡心、嘔吐、噯氣及食欲不振等癥狀。慢性Hp 感染可引起生長發(fā)育遲緩、缺鐵性貧血、免疫性血小板減少癥、胃癌［5］。Hp 菌株、宿主、內(nèi)環(huán)境、免疫應(yīng)答反應(yīng)等多方面因素決定了疾病的發(fā)生發(fā)展［6］。

Th9 細(xì)胞是CD4+T 細(xì)胞通過增強(qiáng)IgE 介導(dǎo)的免疫反應(yīng),對誘導(dǎo)免疫性疾病中發(fā)揮著重要的作用,是腸道免疫系統(tǒng)成熟的標(biāo)志,Th9 主要通過分泌IL-9 發(fā)揮相應(yīng)生物學(xué)效應(yīng)。IL-9 作為Th9 細(xì)胞的效應(yīng)細(xì)胞因子,是胃腸道重要的調(diào)節(jié)因子,能夠直接對B 淋巴細(xì)胞產(chǎn)生作用,并在免疫球蛋白的形成和調(diào)控中產(chǎn)生重要作用,此過程對兒童Hp 感染疾病的發(fā)生發(fā)展具有促進(jìn)作用。近年研究顯示,IL-9 具有雙重調(diào)節(jié)功能,正向調(diào)節(jié)和負(fù)向調(diào)節(jié)相互維持免疫系統(tǒng)的平衡,IL-9 一方面增加調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞(Treg 細(xì)胞)的免疫抑制活性,負(fù)向調(diào)節(jié)細(xì)菌、病毒介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)；另一方面誘導(dǎo)肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞以及嗜酸性細(xì)胞等免疫細(xì)胞的激活,促 進(jìn)炎癥信號通路激活,加劇過敏反應(yīng)和炎癥進(jìn)程［7-10］。

研究表明,IL-9 參與了Hp 感染后產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng),動物實(shí)驗(yàn)顯示,感染Hp 的IL-9 敲除小鼠在4 周 時小鼠胃組織黏膜炎癥較野生型小鼠嚴(yán)重,同時當(dāng)IL-9 回注到IL-9 敲除小鼠中后,小鼠中Hp 的定植量較對照組明顯降低,并且炎癥程度明顯減弱,證實(shí)了IL-9 通過抑制Hp 在小鼠胃黏膜組織中的定植而發(fā)揮保護(hù)性作用,并發(fā)現(xiàn)這一作用可能是通過促進(jìn)Th17 及抑制 Th1 而產(chǎn)生［11］。陳周利［12］通過檢測消化性潰瘍和胃息肉患者血清和胃黏膜組織IL-9 表達(dá),發(fā)現(xiàn)IL-9參與了Hp 感染誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答,且可能對Hp 感染所致的消化性潰瘍和胃息肉具有抑制作用。本研究結(jié)果顯示,Hp 感染相關(guān)性胃炎患兒外周血Th9 比例及IL-9水平明顯高于健康對照組(P＜0.05),提示患兒在感染Hp 后釋放Th9 及IL-9 炎癥細(xì)胞因子,參與Hp 感染誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答。采用10 d 序貫療法進(jìn)行抗Hp 治療,在根除Hp 治療后,Th9 細(xì)胞比例、血清IL-9 水平下降,提示10 d 序貫療法根除Hp 治療有助于控制Hp 感染胃炎患兒機(jī)體的免疫應(yīng)答。

機(jī)體感染Hp 后產(chǎn)生的免疫應(yīng)答反應(yīng)也可能造成免疫損傷,進(jìn)一步加重胃黏膜的損傷。這可能與Hp 進(jìn)入宿主胃黏膜細(xì)胞后產(chǎn)生炎癥反應(yīng),炎癥因子對胃上皮細(xì)胞具有直接的毒性作用,破壞黏膜的緊密連接,血管通透性增加,胃黏膜水腫。免疫因子誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號級聯(lián)的炎癥反應(yīng),促進(jìn)胃黏膜上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,改變細(xì)胞形態(tài)［13］,程序性死亡受體1 高表達(dá),使得Hp 感染后的免疫反應(yīng)不能有效的根除Hp,Hp 持久性感染引起胃黏膜慢性持續(xù)性的損傷。13C 尿素呼氣試驗(yàn)通過檢測受試者呼出氣中核素標(biāo)記的Hp 的尿素酶分解尿素產(chǎn)生的CO2,可反映整個胃內(nèi)Hp 感染狀況,診斷Hp 感染敏感性及特異性高。13C 尿素呼氣試驗(yàn)的濃度可反映Hp 感染對胃黏膜的損傷程度,濃度高提示胃黏膜炎癥反應(yīng)強(qiáng),黏膜損傷程度高。相關(guān)性分析顯示,13C 尿素呼氣試驗(yàn)濃度與Th9 細(xì)胞比例、血清IL-9水平正相關(guān),13C 尿素呼氣試驗(yàn)濃度程度越高,外周血Th9 細(xì)胞比例、血清IL-9 水平越高,提示Th9 及IL-9分泌導(dǎo)致的免疫反應(yīng)可能加重了胃黏膜損傷,有關(guān)機(jī)制需要更深入的研究。

綜上所述,Th9 細(xì)胞及其主要效應(yīng)因子IL-9 參與了兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎免疫應(yīng)答過程,Th9 及IL-9分泌導(dǎo)致的免疫反應(yīng)可能加重胃黏膜損傷,根除Hp 治療有助于控制HP 感染相關(guān)胃炎患兒機(jī)體的免疫應(yīng)答。對IL-9 及Th9 細(xì)胞的深入研究,將有助于闡明兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎的病理機(jī)制,并且抑制IL-9 的產(chǎn)生及分泌可能是未來治療兒童Hp 感染相關(guān)性胃炎的新選擇。