李淑婷，劉楠，李袁飛

1 山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，太原030000；2 山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院腫瘤科

結(jié)直腸癌（CRC）是一種惡性實體腫瘤，在所有腫瘤類型中發(fā)病率（10.2%）居第三位、病死率（9.2%）居第二位［1］。由于CRC 起病隱匿，早期篩查方法缺乏特異性，導(dǎo)致早期診斷困難。研究表明，Ⅳ期CRC 的5年生存率僅為12.5%，而早期CRC 的5年生存率可達(dá)90%。因此，探索一種可靠的方法以增加早期診斷率將成為提高CRC 患者生存率的有效措施［2］。目前，活組織病理學(xué)檢查仍是診斷CRC的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于其具有侵入性，很難在無明顯特異性癥狀的早期階段接受這一檢查，易導(dǎo)致診斷延遲。血清生物標(biāo)志物由于具有簡單經(jīng)濟(jì)、非侵入性、可重復(fù)性等諸多優(yōu)勢在腫瘤早期診斷方面具有廣泛應(yīng)用前景，可能是改善CRC 早期診斷率的潛在方法。癌胚抗原（CEA）是臨床上最常用的早期診斷CRC 的腫瘤標(biāo)志物，但特異度、敏感度仍不夠理想。胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7（IGFBP7）可通過抑制血管生成、誘導(dǎo)癌癥特異性衰老和凋亡發(fā)揮抑癌作用［3］，有研究發(fā)現(xiàn)其在CRC患者中高于正常人，具有作為血清診斷標(biāo)志物的潛能［4］。本研究旨在觀察血清IGFBP7 水平在CRC 和結(jié)直腸息肉患者中是否存在差異，并以CEA 為標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)一步分析血清IGFBP7對CRC的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 經(jīng)山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（倫理批準(zhǔn)號：2019GK049，日期：2019年2月20 日），收集2020年8 月—2021年3 月我院收治的CRC 患者及結(jié)直腸良性息肉患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①既往未診斷過其他腫瘤；②接受胸部CT 及全腹CT檢查；③CRC 患者：經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為CRC且未接受過任何形式的抗癌治療；④結(jié)直腸良性息肉患者：檢查指標(biāo)沒有任何惡性腫瘤證據(jù)；⑤均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重肝腎功能不全；②臨床病理資料不全。共選取符合標(biāo)準(zhǔn)的CRC 患者46例（CRC 組）、結(jié)直腸良性息肉患者20 例（良性組）。CRC 組 男27 例、女19 例，年 齡27～91（63.41 ±13.31）歲，有吸煙史12例、飲酒史10例，腫瘤部位左半結(jié)腸11 例、右半結(jié)腸17 例、直腸18 例，腫瘤大?。?.58 ± 2.08）cm，組織學(xué)分級高分化7 例、中分化26 例、低分化8 例、不明確5 例，腫瘤浸潤深度Tis 4例、T12例、T22例、T327例、T47例、不明確4例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移N020 例、N117 例、N26 例、不明確3 例，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移M031 例、M115 例，TNM 分期早期16 例（0 期4例、Ⅰ期4 例、ⅡA 期8 例）、晚期25 例（ⅡB 期2 例、Ⅲ期8例、Ⅳ期15例）、不明確5例，CEA為（107.92 ±493.11）ng/mL。良性組男15 例、女5 例，年齡40～77（58.20 ± 9.47）歲，有吸煙史7 例、飲酒史6 例，CEA 為（2.11 ± 2.37）ng/mL。兩組性別、年齡、吸煙史、飲酒史比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，CEA 水平兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 血清IGFBP7檢測方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗。采集兩組清晨空腹靜脈血，以2 500 r/min 離心10 min，取上清液，-80 ℃保存待檢。IGFBP7 試劑盒購自中國Boster公司。操作步驟：①樣本稀釋：以1∶2的比例稀釋血清樣本，配置標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)濃度（0、625、1 250、2 500、5 000、10 000、20 000、40 000 pg/mL）。②加樣：將100 μL稀釋后的血清樣品加入酶標(biāo)板的每個孔中，37 ℃孵育90 min。③除去酶標(biāo)板中的液體，每孔加入100 μL 生物素標(biāo)記抗體，37 ℃孵育60 min。④加酶標(biāo)試劑：洗板3 次后，每孔加入100 μL親和素—過氧化物酶復(fù)合物，37 ℃孵育30 min。⑤顯色：洗滌5 次后，每孔加入90 μL TMB 顯色底物，37 ℃孵育15 min。⑥終止反應(yīng)及讀數(shù)：加入終止液后5 min 內(nèi)讀取450 nm 波長下的光密度（OD）值。所有血清樣品均一式兩份測試，取平均值進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS25.0統(tǒng)計軟件。計量資料以± s表示，組間比較行Mann-Whitney U檢驗。繪制血清IGFBP7、CEA單獨及聯(lián)合診斷CRC的受試者工作特征（ROC）曲線，計算曲線下面積（AUC）、靈敏度、特異度等。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清IGFBP7 水平比較 CRC 組、良性組血清IGFBP7 水平分別為（5.29 ± 2.13）、（3.92 ±1.71）ng/mL，早、晚期CRC 患者血清IGFBP7水平分別為（5.79 ± 2.69）、（5.18 ± 1.86）ng/mL，CRC 組及其早、晚期CRC 患者血清IGFBP7 水平均高于良性組（P均<0.05）。

2.2 血清IGFBP7、CEA 對CRC 的診斷價值 ROC曲線分析結(jié)果見表1。

表1 血清IGFBP7、CEA對CRC的診斷價值

2.3 血清IGFBP7、CEA 對早期CRC 的診斷價值ROC曲線分析結(jié)果見表2。

表2 血清IGFBP7、CEA對早期CRC的診斷價值

3 討論

胰島素樣生長因子（IGF）家族成員包括IGF、IGF 受體和IGF 結(jié)合蛋白（IGFBPs），其中IGFBPs 是與IGFs 共同進(jìn)化的同源蛋白，賦予IGF 調(diào)控系統(tǒng)的功能和組織特異性。IGFBP7 可與IGF 低親和力結(jié)合，在大多數(shù)正常組織中的蛋白質(zhì)和mRNA 水平上都有表達(dá)，包括大腦、肝臟、胰腺和骨骼肌，并分泌入循環(huán)［5］。研究表明，IGFBP7 與多種信號通路及腫瘤有關(guān)。IGFBP7 可激活Ras-MEK-ERK、Ras-MAPK 及IRS-PI3K-AKT-mTOR 信號通路，起到誘導(dǎo)蛋白質(zhì)增殖、蛋白質(zhì)合成、抗凋亡、促進(jìn)細(xì)胞生長等多種不同效應(yīng)［6］。既往研究顯示，IGFBP7 在食管鱗癌、食管胃交界處腺癌、軟組織肉瘤等腫瘤患者血清中均檢測到升高［7-9］；但也有研究顯示，IGFBP7 水平在肺癌患者血清中有所降低［10］。可見，血清IGFBP7在不同腫瘤中的水平有所不同，其水平變化對于不同腫瘤中是否具有特異性尚需要進(jìn)一步研究。

有研究表明，IGFBP7在CRC腫瘤組織中的表達(dá)顯著高于正常結(jié)腸組織，且在CRC 的發(fā)生中起潛在的抑癌作用［11-13］。此外，IGFBP7 還被發(fā)現(xiàn)與CRC 的組織分化程度、腫瘤轉(zhuǎn)移、疾病預(yù)后密切相關(guān)［14］。目前，對IGFBP7 在CRC 血清水平的研究較少。本研究結(jié)果顯示，CRC患者IGFBP7水平與結(jié)直腸良性病變患者比較具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異，且這種差異在CRC 早期即出現(xiàn)，因此我們推測其能否作為一種新的血清腫瘤標(biāo)志物用于診斷CRC。本研究ROC 曲線可見，IGFBP7 診斷CRC 的AUC 為0.720，敏感度為67.4%，特異度為80.0%。但上述指標(biāo)如要作為一種診斷標(biāo)志物，其靈敏度并不樂觀。因此我們進(jìn)一步探討了IGFBP7 與CEA 聯(lián)合應(yīng)用對CRC 的診斷能力，結(jié)果提示聯(lián)合應(yīng)用可使優(yōu)勢互補，提高診斷的準(zhǔn)確性。IGFBP7 與CEA 聯(lián)合應(yīng)用診斷CRC 的AUC為0.812，敏感度提高至89.1%，但特異度有所降低（60%）。更重要的是，我們發(fā)現(xiàn)在早期CRC 中，IGFBP7 診斷CRC 的AUC 為0.747，高于本研究中納入的CEA 數(shù)據(jù)。上述結(jié)果提示，血清IGFBP7 在CRC 診斷中有一定價值，其具有作為CRC 早期無創(chuàng)診斷性腫瘤標(biāo)記物的潛力，與CEA 聯(lián)合應(yīng)用可能提高診斷的準(zhǔn)確性。但限于樣本量較少，且我們的研究僅使用良性疾病作為對照，不能很好的代表所有非腫瘤患者，未來應(yīng)加入無息肉的正常人群進(jìn)行分析，其診斷價值也有待進(jìn)一步大規(guī)模臨床數(shù)據(jù)的驗證。