高平瑤，李文學

延邊大學農學院，吉林延吉 133000

華支睪吸蟲病是一種常見的人畜共患病，主要由吸蟲寄生于哺乳動物或人類的肝臟、膽管以及膽囊內而引起的。華支睪吸蟲最終宿主一般是哺乳動物，淡水螺是華支睪吸蟲的第一中間宿主，多種淡水魚和淡水蝦是華支睪吸蟲的第二中間宿主。該病容易引起肝臟等器官病變，造成一定程度上的危害，在東亞地區(qū)廣泛流行，該病現(xiàn)已成為中國、韓國等國家重點防治的寄生蟲病之一。

目前，傳統(tǒng)的病原學檢查方法是臨床上較為常用的診斷華支睪吸蟲病的檢測方法。傳統(tǒng)的鏡檢法由于華支睪吸蟲排卵具有周期性且蟲卵較小，容易漏診，且費時費力，需要有經驗的實驗室技術人員，不適合在大規(guī)模的流行病學調查中應用，吸蟲在蟲卵形態(tài)上也受到不同程度的的影響。而協(xié)同凝集試驗，由于其操作步驟復雜繁多，也不是很適合于臨床診斷的檢測。綜合分析上述所列舉的幾種情況，實驗室認為這些方法已經不能適應當前該病的診斷及防治需求。

所以想要完成這個試驗，實驗室認為只有具有高敏感性和高特異性血清學診斷方法，才能避免那些傳統(tǒng)病原學檢查方法的不足之處。而酶聯(lián)免疫吸附試驗(簡稱ELISA)正具有這個特點，操作簡單、快速、不需要特殊的儀器設備，適用于大量檢查，血液樣本用量很小，判斷結果是很容易的，現(xiàn)場應用方便，可用于對犬華支睪吸蟲病陽性血清的檢測，與犬其他相似相近血清均不發(fā)生反應，已應用于華支睪吸蟲病的臨床診斷和流行病學調查，主要是檢測病患血清中的特異性抗體。

人或動物在感染華支睪吸蟲病之后，體內的肝臟器官以及膽道內，首先會產生一系列對身體及組織起到負面作用的病理變化，具體可能表現(xiàn)為膽結石、膽囊炎、膽管上皮增生或是膽管炎等，嚴重者也極有可能會演變成肝硬化、膽管上皮癌和肝細胞癌等病癥，病狀十分嚴重。因此準確快速的對華支睪吸蟲病進行診斷和治療不僅對疾病的防控起到積極作用，同時對社會具有長遠意義。有效控制該病需要系統(tǒng)、完整的流行病學調查資料，但至今尚未見該地區(qū)犬華支睪吸蟲病的流行病學調查報告，為此開展了本調查研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品收集

本次試驗在汪清縣福興鎮(zhèn)按常規(guī)方法采集83份犬血液（其中公狗37只，母狗46只），分離血清，保存于-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 主要儀器和試劑

96孔板半自動酶標儀，購自陜西西安賽默飛世爾制版廠。

犬華支睪吸蟲血清抗體ELISA檢測試劑盒，購自廣州創(chuàng)侖生物制造公司。

1.2 方法

1.2.1 將裝有試驗用板條的鋁箔袋在室溫下恒溫20 min后，從中取出所需數(shù)量板條，剩余板條用自封袋密封好后放回4 ℃環(huán)境下保存。

1.2.2 在實驗中設置一對陰性對照孔和陽性對照孔，再設置一對陰性樣本孔和陽性樣本孔，隨后向陰性對照孔和陽性對照孔中加入陰性對照50 μL和陽性對照各 50 μL。

1.2.3 將10 μL待測樣本加入待測樣本孔，再加入40 μL 樣本稀釋液。

1.2.4 隨后在陰性對照孔和陽性對照孔每孔加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100 μL，再向陰性樣本孔和陽性樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100 μL，將反應孔使用封板膜封住，令其在37 ℃水浴鍋或恒溫箱溫育60 min。

1.2.5 舍棄液體，使用吸水紙將其拍干，再用洗滌液加滿各孔，靜置1 min后，甩去其中洗滌液，再使用吸水紙將其拍干，反復重復上述操作5次至洗板潔凈。

1.2.6 取底物50 μL加入A孔中，再另取底物50 μL加入B孔中，避免陽光直射，將樣本孔在37 ℃下孵育15 min。

1.2.7 向A孔加入終止液50 μL，再向B孔加入終止液各50 μL，等待15 min后，在450 nm波長處測定A、B兩孔的0D值，并記錄其數(shù)據(jù)結果。

2 結果

按照說明書步驟對汪清縣福興鎮(zhèn)83份犬血清待檢樣本進行了華支睪吸蟲血清抗體的檢測。

2.1 性別結果

在83份待檢血清中，公犬血清37份，其中被感染動物血清13份，感染率為35.1%；母犬血清46份，其中被感染動物血清15份，感染率為32.6%，實驗得出犬感染華支睪吸蟲病與性別概率無關，結果見表1。

表1 汪清縣福興鎮(zhèn)華支睪吸蟲犬類感染情況及性別分布

2.2 年齡結果

在83份待檢血清中，幼犬（年齡不滿一歲）血清24份，其中被感染動物血清15份，感染率為62.5%；成犬（年齡大于等于一歲）血清59份，其中被感染動物血清13份，感染率為22.0%，實驗得出幼犬感染華支睪吸蟲概率遠大于成犬，該情況可能與幼犬年齡小，免疫力弱有關，結果見表2。

表2 汪清縣福興鎮(zhèn)華支睪吸蟲犬類感染情況及年齡分布

2.3 總體結果

在83份待檢血清中，被感染動物血清28份，感染率為33.7%，陽性檢出率為33.7%，實驗表明該地區(qū)1/3犬類患有華支睪吸蟲病，該情況可能與家養(yǎng)犬類喂食魚蝦等有關，結果見表3。

表3 汪清縣福興鎮(zhèn)華支睪吸蟲犬類感染情總調查

3 分析與討論

華支睪吸蟲病的診斷，主要依靠分辨檢查蟲卵，但在感染度較輕的情況下，常因糞便內蟲卵少，加以蟲卵體積很小，糞樣鏡檢易漏診。近年來，隨著酶聯(lián)免疫吸附診斷、同位素標記診斷、膠體金診斷等技術和方法的應用，華支睪吸蟲病的流行病學診斷取得較大進展。

由實驗結果中可以得出結論，犬類感染華支睪吸蟲病的概率與性別無關，而相對于成年犬來說，幼犬更容易患病，該情況可能與幼犬年齡小，自身免疫力弱有關。本次試驗中同樣也分析了其他人的調查結果。唐劍棟（2006）調查中表明，犬平均每只感染23條華支睪吸蟲，而貓平均每只感染64條，貓的感染率要比犬的高得多，原因可能是貓更愛吃生魚，除了捕食水池的小魚外，還經常吞食人丟棄的魚頭、鰓、鰭等器官，故在疫區(qū)中感染普遍；全炳昭（2010）對46只可疑病犬尸體進行剖檢，其中19只病犬尸體膽囊和肝臟內含有華支睪吸蟲（7～30條/只），感染率約為41.3%。存在這種差異的原因不僅是因為試驗中所采用的檢測方法不同，同時也與動物是否圈養(yǎng)、是否喂養(yǎng)魚類等有關。

華支睪吸蟲病作為一種常見的人獸共患寄生蟲病，其流行范圍十分廣泛，該病宿主種類數(shù)量不少，并且因為自身有其自然疫源地區(qū)，所以如果想要有效地預防華支睪吸蟲病的產生，需要對其流行的各個環(huán)節(jié)進行防控。首先從源頭遏制，控制其傳染源頭的產生，避免各類動物受到病情的感染，堅決不喂食動物生魚蝦等。其次如果出現(xiàn)緊急感染問題，相關地方部門要及時進行治療，病情嚴重時可以采取撲滅、捕殺等措施。同時要加強監(jiān)控排泄物的處理途徑，防止蟲卵入水，排泄物的無害化處理是切斷病情傳播途徑的重要一環(huán)，只有這樣才能有效地預防華支睪吸蟲病的流行。當然也應當適當控制第一中間宿主，可以采用藥物滅螺等方法，以切斷華支睪吸蟲病的最終流行環(huán)節(jié)。