曾煥虹 黃東航 ▲ 李 峰 陳 旭

1.福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床醫(yī)學(xué)院，福建福州350001；2.福建省立醫(yī)院基本外科，福建福州350001；3.福建省立醫(yī)院病理科，福建福州350001

腫瘤相關(guān)鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2（tumor-associated calcium signal transducer 2，TACSTD2）是一種單體跨膜糖蛋白，在正常人體細(xì)胞中表達(dá)很少或不表達(dá)，而在多種實(shí)體腫瘤中呈高表達(dá)，參與腫瘤增殖和侵襲的過(guò)程，被認(rèn)為與腫瘤的不良預(yù)后密切相關(guān)[1-4]。

甲狀腺癌是常見(jiàn)的頸部惡性腫瘤，而其中最常見(jiàn)的是甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC），約占 70%[5]，近年來(lái)發(fā)病率增長(zhǎng)較快[6]。雖然PTC一般預(yù)后良好，但是PTC的復(fù)發(fā)率、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較高，難治性PTC仍可致死[7]。近年來(lái)一些免疫組化標(biāo)志物如半乳糖凝集素-3（Galectin-3）、細(xì) 胞 角 蛋 白 19（CK19）、CD56、人骨髓內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物-1（HBME-1）用于診斷PTC，但其敏感性和特異性均不理想，需要尋找更好的免疫標(biāo)志物來(lái)協(xié)助診斷PTC[8-9]。目前有關(guān)甲狀腺癌組織中TACSTD2表達(dá)的臨床意義的研究較少。本研究通過(guò)檢測(cè)TACSTD2 mRNA及TACSTD2蛋白在PTC組織中的表達(dá)，研究TACSTD2表達(dá)與PTC臨床病理特征之間的關(guān)系，探討其臨床意義。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理診斷證實(shí)為PTC的患者；②初發(fā)病例；③術(shù)前未經(jīng)過(guò)任何治療。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①?gòu)?fù)發(fā)病例；②術(shù)前接受過(guò)針對(duì)病灶的射頻消融治療或其他治療；③既往因各種原因接受過(guò)甲狀腺手術(shù)或131I治療；④合并毒性彌漫性甲狀腺腫（Graves病）、甲狀腺炎。

根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)，收集2014年2月至2018年2月就診于福建省立醫(yī)院基本外科的130例PTC患者的臨床病理資料以及病理標(biāo)本切片。130例PTC患者中男36例，女94例；年齡15～79歲，平均48歲；TNM分期：Ⅰ期75例，Ⅱ期34例，Ⅲ期16例，Ⅳ期5例。

1.2 主要試劑

兔超敏二步法免疫組化檢測(cè)試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)公司），兔抗人TACSTD2抗體（德國(guó)R&D公司）。

1.3 免疫組織化學(xué)法

標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。采用PV二步法進(jìn)行免疫組化染色，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用已知的陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸緩沖鹽溶液代替一抗作陰性對(duì)照。

采用雙盲法，由兩名高年資病理科醫(yī)師讀片，結(jié)果不一致時(shí)協(xié)商判定結(jié)果。每例切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野，每個(gè)高倍鏡視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。組織染色強(qiáng)度：無(wú)染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕黑色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目百分比：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。染色指數(shù)為以上兩項(xiàng)得分之積（0～12分），染色指數(shù)≥4分為TACSTD2陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，TACSTD2在癌組織及相應(yīng)的癌旁正常組織表達(dá)的陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)；TACSTD2表達(dá)與PTC患者臨床病理特征的相關(guān)性分析采用單因素χ2檢驗(yàn)及多因素logistic回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TACSTD2蛋白在PTC組織及相應(yīng)癌旁正常組織中的表達(dá)情況

TACSTD2的免疫反應(yīng)產(chǎn)物呈棕黃色顆粒，主要定位于細(xì)胞膜，也可少量出現(xiàn)于細(xì)胞質(zhì)中，見(jiàn)圖1。130例PTC組織及相應(yīng)癌旁正常組織中TACSTD2陽(yáng)性例數(shù)分別為 86（66.2%）、17（13.1%）。PTC組織中TACSTD2陽(yáng)性率明顯高于相應(yīng)癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=76.55，P＜ 0.001）。

圖1 TACSTD2在PTC組織及癌旁正常組織的表達(dá)情況（免疫組化PV二步法，×200）

2.2 TACSTD2蛋白表達(dá)與PTC患者臨床病理特征關(guān)系

TACSTD2表達(dá)與腫瘤大?。≒=0.002）、被膜侵犯（P＜ 0.001）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.006）顯著相關(guān)。在腫瘤≥1 cm組表達(dá)陽(yáng)性率高于＜1 cm組，被膜侵犯組表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)被膜侵犯組，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。TACSTD2表達(dá)與性別、年齡、TNM分期等無(wú)明顯相關(guān)。見(jiàn)表1。

表1 TACSTD2表達(dá)與PTC患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3 多因素logistic回歸分析TACSTD2表達(dá)與PTC患者臨床病理特征的相關(guān)性

將上述分析中P＜0.05的因素引入多因素logistic回歸模型，TACSTD2表達(dá)是否為陽(yáng)性作為因變量，相關(guān)因素作為自變量進(jìn)行賦值，見(jiàn)表2。結(jié)果表明，TACSTD2表達(dá)與被膜侵犯（P=0.007）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.001）呈獨(dú)立相關(guān)性，見(jiàn)表3。

表2 賦值方法

表3 TACSTD2表達(dá)與PTC患者臨床病理特征多因素logistic回歸分析

3 討論

近年來(lái)，甲狀腺癌發(fā)病率逐漸上升，其中主要是PTC[10]。PTC一般預(yù)后良好，10年總生存率可在90%以上，盡管如此，PTC的復(fù)發(fā)率、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率均較高，難治性PTC仍可致死[7]。如何篩查高風(fēng)險(xiǎn)PTC，以便更好地為患者制訂個(gè)體化治療方案，對(duì)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較高的患者進(jìn)行更積極的治療已成為目前甲狀腺癌的研究熱點(diǎn)之一[11-12]。

TACSTD2又稱滋養(yǎng)層細(xì)胞表面抗原（trophoblast cell-surface antigen 2，Trop-2）、胃腸腫瘤相關(guān)抗原（gastrointestinal tumor-associated antigen，GA-733-1）等，是由染色體1p32上的TACSTD2基因編碼的、分子量約為35kD的跨膜糖蛋白。TACSTD2由323個(gè)氨基酸構(gòu)成。TACSTD2作為細(xì)胞表面受體，是一種重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，具有調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞遷移的作用[13-14]。Guo等[3]觀察到，TACSTD2在非小細(xì)胞肺癌組織及細(xì)胞株中均有過(guò)表達(dá)，TACSTD2過(guò)表達(dá)可促進(jìn)肺癌細(xì)胞的增殖及侵襲行為。Xia等[15]應(yīng)用免疫組化技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，在涎腺腺樣囊性癌中TACSTD2明顯呈高表達(dá)，TACSTD2過(guò)表達(dá)與TNM分期、局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。Lin等[1]應(yīng)用實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)和免疫組化技術(shù)研究，發(fā)現(xiàn)乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中TACSTD2的表達(dá)高于癌旁非瘤組織。TACSTD2高表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期顯著相關(guān)。Kaplan-Meier生存率和Cox回歸分析表明TACSTD2高表達(dá)是乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者獨(dú)立的預(yù)后因素之一。

目前，關(guān)于PTC組織中TACSTD2表達(dá)及其臨床意義的報(bào)道較少。Sadullahoglu等[16]檢測(cè)了29例濾泡性腺瘤，57例甲狀腺乳頭狀癌和12例濾泡性甲狀腺癌的石蠟切片中TACSTD2的表達(dá)，結(jié)果顯示，PTC組織和濾泡性甲狀腺癌組織中TACSTD2表達(dá)陽(yáng)性率顯著高于濾泡性腺瘤組織。Zargari等[17]對(duì)102例甲狀腺病變進(jìn)行TACSTD2的檢測(cè)，結(jié)果顯示TACSTD2對(duì)甲狀腺惡性病變的敏感性為93%，特異性為74%，可用于甲狀腺癌的鑒別診斷。本研究亦提示在PTC組織中TACSTD2的表達(dá)顯著高于相應(yīng)的癌旁組織，TACSTD2在一定程度上可用于甲狀腺良惡性病變的鑒別診斷。文獻(xiàn)中亦提及TACSTD2聯(lián)合其他免疫組化標(biāo)志物，如CD56、CK19、HBME-1、Stomatin樣蛋白 -2（SLP-2）等可提高甲狀腺惡性腫瘤的診斷率，尤其對(duì)一些不典型的惡性腫瘤病變[17-19]。

TACSTD2在多種腫瘤中的過(guò)度表達(dá)與腫瘤的不良預(yù)后和侵襲行為有關(guān)。目前亦有一些相關(guān)的文獻(xiàn)指出，TACSTD2的表達(dá)或許是侵襲性PTC的一個(gè)潛在生物標(biāo)志物。Abdou等[18]的研究中發(fā)現(xiàn)TACSTD2的陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Guan等[20]的研究回顧性收集了145例PTC患者的臨床病理特征，采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)方法檢測(cè)癌組織及癌旁正常組織中TACSTD2 mRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示，TACSTD2的過(guò)度表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤向甲狀腺外延伸顯著相關(guān)，是獨(dú)立危險(xiǎn)因素。章萍萍等[21]的研究中亦指出TACSTD2表達(dá)與PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究將多種臨床病理參數(shù)進(jìn)行分層分析，發(fā)現(xiàn)在PTC組織中TACSTD2的表達(dá)與腫瘤大小、被膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。多因素logistic回歸分析表明，TACSTD2的表達(dá)與被膜侵犯和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈獨(dú)立相關(guān)。提示TACSTD2表達(dá)與PTC的侵襲及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切?；蛟S提示對(duì)TACSTD2蛋白過(guò)表達(dá)的PTC患者應(yīng)考慮制訂較積極的治療方案。

TACSTD2過(guò)表達(dá)在人類癌癥發(fā)生、進(jìn)展中起到的作用尚未被完全闡明，初步研究結(jié)果顯示miR-125b-1啟動(dòng)子甲基化可引起miR-125b-1表達(dá)缺失，進(jìn)而引起TACSTD2過(guò)表達(dá)。TACSTD2過(guò)表達(dá)可激活絲裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MAPK）信號(hào)通路，進(jìn)而通過(guò)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular signalregulated kinase，ERK）磷酸化激活 Myc，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖并增強(qiáng)其侵襲能力[4]。ERK信號(hào)通路的激活，還可促進(jìn)腫瘤新生血管生成[3]。ERK磷酸化抑制劑U0126可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和腫瘤新生血管生成[3-4]。在臨床試驗(yàn)中已證實(shí)，sacituzumab govitecan作為一種由抗TACSTD2抗體和化療藥物拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑SN-38組成的抗體偶聯(lián)藥物，可用于對(duì)一線化療耐藥的TACSTD2過(guò)表達(dá)的非小細(xì)胞肺癌及轉(zhuǎn)移性三陰性乳腺癌患者的治療，起到縮小腫瘤并延長(zhǎng)帶瘤生存期的作用[22-25]。TACSTD2可否作為難治性PTC及晚期PTC靶向治療的靶點(diǎn)，值得今后進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，PTC患者的癌組織中存在TACSTD2過(guò)表達(dá)的情況，其過(guò)表達(dá)與被膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示TACSTD2過(guò)表達(dá)可能參與PTC的局部侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程。