周惠

（泰州市第三人民醫(yī)院，江蘇 泰州，225300）

目前對于MDPV 藥物的檢測，主要集中在氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜法等。液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）技術(shù)屬于較為先進(jìn)技術(shù)，目前被廣泛用于食品、醫(yī)藥等方面。1 次進(jìn)樣后可以獲取二級以及三級子離子的全掃描質(zhì)譜圖，定性分析時，獲取的化合物結(jié)構(gòu)信息比四級桿質(zhì)譜多，由此液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)已成為代謝物結(jié)構(gòu)分析的常用方法。本次研究主要探討采用液相色譜-電噴霧離子阱質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，構(gòu)建MDPV 藥物代謝產(chǎn)物的鑒定方法，對于代謝動力學(xué)、病毒學(xué)等方面均具有一定指導(dǎo)意義。

1 資料與方法

1.1 樣品來源檢測樣品為亞甲基二氧吡咯戊酮（MDPV），來源于安徽省公安廳合肥市公安局提供；SD 大鼠，均為雄性。

1.2 試驗(yàn)條件色譜條件：色譜柱（150mm×2.1mm，5μm），流動相為醋酸銨-甲酸緩沖溶液，甲醇為B 為洗脫液，0-1min，10%B，1-6min，10%B-90%B，6-14min，90%B，0.2ml/min，10 μL。質(zhì)譜條件為電噴霧離子化源、正離子檢測，全離子掃描，選擇反應(yīng)監(jiān)測掃描模式，毛細(xì)血管350℃，霧化氣30.00L/min，加熱輔助氣8.00L/min，吹掃氣2.00L/min。

1.3 體外代謝與樣品處理過程配置MDPV 樣品濃度，加入蒸餾水溶液調(diào)整樣品濃度為50.0μg/ml，制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液，獲取適量標(biāo)準(zhǔn)品溶液于試管，再加2.0mg/ml 蛋白質(zhì)溶液的SD 大鼠肝微粒體S9組分KCl-PBS 緩沖溶液，劑量為200μL，混勻，再試管置于水浴鍋內(nèi)進(jìn)行孵育處理，再予以適量的NADPH KCl-PBS溶液，獲取MDPV 孵育體系，MDPV（5.0 μ g/ml）、NADPH（1.0mmol/L）、肝微粒體蛋白質(zhì)（1.0mmol/L）。將其置于水浴鍋孵育，加乙腈，混勻，冰浴，離心，14000r/min，過有機(jī)濾膜，采用LC-MS 檢測。

2 結(jié)果

2.1 構(gòu)建MDPV 及代謝物的LC-MS 方法優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下MDPV分析的LC-MS 圖譜，見圖1。

2.2 MDPV 以及其代謝物的LC-MS 分析色譜圖MDPV 以及其代謝物的LC-MS 分析色譜圖。見圖2。

圖2 MDPV 以及其代謝物的LC-MS 分析色譜圖

2.3 大鼠肝微粒體S9 組分中MDPV 濃度孵育時間變化趨勢隨著大鼠孵育時間的增加，MDPV 濃度逐漸下降，孵育時間至120min時，MDPV 濃度無明顯變化，由此，最終確定孵育最佳時間為120min。見圖3。

圖3 大鼠肝微粒體S9 組分中MDPV 濃度孵育時間變化趨勢

2.3 MDPV 代謝物的MSn圖譜化合物M2色譜保留時間9.64min，m/z 為264.3，經(jīng)過二級串聯(lián)質(zhì)譜分析，m/z 為193.0，經(jīng)過三級串聯(lián)質(zhì)譜分析，m/z 為175.0。見圖4。

圖4 MDPV 代謝物的MSn圖譜

3 討論

本次研究采用多級串聯(lián)質(zhì)譜法，確定MDPV 及其代謝物，與MDPV 樣品色譜保留時間以及各級色譜行為，最終鑒定為MDPV。二級串聯(lián)質(zhì)譜m/z 為207.0，對于MDPV 在一致條件下獲取的準(zhǔn)分子離子以及二級串聯(lián)質(zhì)譜，三級串聯(lián)質(zhì)譜基峰離子具有一致性，表明二者存在相似骨架結(jié)構(gòu)，因?yàn)镸DPV 的化學(xué)結(jié)構(gòu)與MDMA相似，MDMA 在體外代謝產(chǎn)物主要為HMMA，而HMMA 與MDMA 質(zhì)譜基峰離子相差2Da，由此，進(jìn)一步推測該化合物為MDPA 的代謝物去亞甲基-甲基化產(chǎn)物1-（4-羥基-3-甲氧基）苯基-2-吡咯戊酮?；衔颩2m/z 為264.3，對于MDPV 基峰降低12Da，經(jīng)過二級串聯(lián)質(zhì)譜分析，得到m/z193.0，經(jīng)過三級串聯(lián)質(zhì)譜分析，獲取碎片離子m/z175.0，推測M2 化合物為MDPV 的去亞甲基產(chǎn)物1-（3,4-二羥基）苯基-2-吡咯戊酮。本次研究鑒定結(jié)果與肖惠貞等人研究具有一致性[3]?；衔颩3 和M4m/z 相同，對于MDPV 增加了16Da，三級質(zhì)譜碎片分別為191.1、258.2，色譜保留的時間也存在差異，進(jìn)一步推測M3 和M4 為同分異構(gòu)體[4]。

本次研究所構(gòu)建的體系成本小，設(shè)備要求低，另外可以在較短時間檢測代謝產(chǎn)物，便于提取、分離、純化等，本研究采用LC-MS 分析藥物代謝產(chǎn)物，一定程度為代謝動力學(xué)、病毒學(xué)等提供參考。