李佩，穆丹，陳利平

監(jiān)利市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北監(jiān)利433300

子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）指子宮內(nèi)膜組織在子宮體之外部位生長，是婦科常見良性疾病，在育齡期女性中發(fā)病率為10%~15%，且呈逐年上升趨勢(shì)［1-2］，可引發(fā)月經(jīng)紊亂、痛經(jīng)、盆腔痛、難治性不孕等，嚴(yán)重影響患者身心健康及生活質(zhì)量［3］。既往研究顯示，EMs雖然屬于良性病變，但具備局部種植、浸潤性生長、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等類似惡性腫瘤的特點(diǎn)，其發(fā)病與遺傳、內(nèi)分泌、免疫、炎癥等因素有關(guān)，但其確切發(fā)病機(jī)制尚不明確［4-5］，探討其發(fā)生機(jī)制是當(dāng)前研究熱點(diǎn)課題。叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1（FoxM1）在細(xì)胞增殖、遷移及血管生成等過程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用；細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6（CDK6）是關(guān)鍵細(xì)胞周期相關(guān)蛋白，可誘導(dǎo)細(xì)胞增殖過程；兩者均與惡性腫瘤細(xì)胞增殖過程關(guān)系密切［6-8］，而EMs發(fā)生機(jī)制與惡性腫瘤存在相似之處，推測(cè)FoxM1、CDK6可能參與EMs的病理過程，既往研究中鮮有FoxM1、CDK6與EMs關(guān)系的探討。我們觀察了EMs患者異位病灶組織FoxM1、CDK6表達(dá)的變化，分析了EMs異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達(dá)之間的關(guān)系及與患者病理分期、臨床分型的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選取2019年2月—2021年1月在監(jiān)利市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科就診的EMs患者105例（觀察組），年齡23~46（32.78±6.19）歲，體質(zhì)量指數(shù)（BMI）為（23.27±2.56）kg/m2，月經(jīng)周期（30.18±3.19）d，月經(jīng)持續(xù)時(shí)間（5.51±0.95）d。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后病理學(xué)結(jié)果證實(shí)為EMs；6個(gè)月內(nèi)無激素類藥物使用史；月經(jīng)規(guī)律；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并內(nèi)分泌疾病、免疫性疾病、其他嚴(yán)重器質(zhì)性病變、惡性腫瘤者；妊娠及哺乳期女性。依據(jù)《子宮內(nèi)膜異位癥的診治指南》中的分期標(biāo)準(zhǔn)［9］可分為：Ⅰ期11例，Ⅱ期27例，Ⅲ期58例，Ⅳ期9例；依據(jù)EMs病理分型可分為：卵巢型86例，深部浸潤型19例。另外選取同期行子宮切除手術(shù)的105例子宮肌瘤患者為對(duì)照組，年齡23~46（33.73±6.52）歲，BMI（23.41±2.51）kg/m2，月經(jīng)周期（30.26±3.24）d，月經(jīng)持續(xù)時(shí)間（5.32±1.07）d。兩組基線資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（LD2018-113），研究對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 組織中FoxM1、CDK6檢測(cè)術(shù)中分別收集觀察組異位病灶組織及對(duì)照組健康子宮內(nèi)膜組織，用生理鹽水沖洗，紗布蘸干，10%甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，然后采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)組織中FoxM1、CDK6。由經(jīng)驗(yàn)豐富的兩名病理科醫(yī)師采用雙盲法對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行獨(dú)立評(píng)價(jià)。隨機(jī)在每張切片上選取6個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，以出現(xiàn)棕黃色或深棕色顆粒判定為陽性細(xì)胞，F(xiàn)oxM1定位于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核，CDK6定位于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞膜，根據(jù)陽性細(xì)胞比例以及染色程度進(jìn)行評(píng)分。陽性細(xì)胞比例評(píng)分：5%以下判為0分，5%~25%判為1分，26%~50%判為2分，51%~75%判為3分，75%以上判為4分；陽性細(xì)胞染色程度評(píng)分：未著色判為0分，棕黃色判為1分，深棕色判為2分。兩項(xiàng)評(píng)分相乘得到總分，0~3分判為陰性表達(dá)，4分及以上判為陽性表達(dá)［10］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以xˉ±s表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例或百分率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher's精確檢驗(yàn)。采用Spearman分析EMs患者異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達(dá)相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對(duì)照組組織中FoxM1、CDK6表達(dá)比較觀察組FoxM1、CDK6陽性分別為7、11例，對(duì)照組分別為34、37例，與對(duì)照組相比，觀察組異位病灶組織中FoxM1、CDK6陽性表達(dá)率高（χ2值分別為22.094、18.256，P均＜0.01）。觀察組異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達(dá)見圖1、圖2。

圖1 觀察組異位病灶組織中FoxM1表達(dá)（免疫組織化學(xué)染色，400×）

圖2 觀察組異位病灶組織中CDK6表達(dá)（免疫組織化學(xué)染色，400×）

2.2 EMs異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達(dá)與患者臨床分期、病理分型的關(guān)系Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期EMs患者異位病灶組織中FoxM1陽性分別為2（18.18%）、6（22.22%）、19（32.76%）、7例（77.78%），CDK6陽 性 分 別 為2（18.18%）、7（25.93%）、21（36.21%）、7例（77.78%），不同分期EMs患者異位病灶組織中FoxM1陽性表達(dá)率相比，χ2=9.658，P=0.017；CDK6陽 性 表 達(dá) 率 相 比，χ2=8.806，P=0.028。卵巢型、深部浸潤型患者異位病灶組織中FoxM1陽性分別為23（26.74%）、11例（57.89%），CDK6陽性分別為24（27.91%）、13例（68.42%），不同分型EMs患者異位病灶組織中FoxM1陽性表達(dá)率相比，χ2=6.897，P=0.000；CDK6陽性表達(dá)率相比，χ2=11.193，P=0.001。

2.3 EMs患者異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達(dá)相關(guān)性EMs患者異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.512，P=0.000）。

3 討論

EMs依據(jù)異位病灶部位可分為卵巢型、深部浸潤型、腹膜型等，其中卵巢最易被侵犯，是EMs最為典型的分型，深部浸潤型指病灶浸潤深度在5 mm及以上的特殊類型，可累及盆腔［11］。部分EMs患者無典型臨床癥狀，加之目前缺乏有效的特異性生物標(biāo)志物，故臨床診斷需依靠腹腔鏡檢查，EMs患者手術(shù)治療費(fèi)用高昂且術(shù)后存在復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。目前尚無確切有效的根治方法，以上因素導(dǎo)致EMs的診療極具臨床挑戰(zhàn)性，探究EMs的發(fā)生機(jī)制顯得尤為關(guān)鍵［12-13］。

細(xì)胞周期包括DNA合成前期的G1期、DNA合成期的S期、DNA合成后期的G2期，有絲分裂期的M期，細(xì)胞過度增殖是腫瘤的主要發(fā)生原因之一，其分子機(jī)制為細(xì)胞周期調(diào)控失常，異位的子宮內(nèi)膜能夠在宮腔外種植、轉(zhuǎn)移，依賴于細(xì)胞增殖能力的增強(qiáng)［14-15］。在衰老及正常終末分化組織中FoxM1呈低表達(dá)或不表達(dá)，在多種惡性腫瘤中FoxM1呈高表達(dá)，參與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移，是近年來惡性腫瘤領(lǐng)域的熱點(diǎn)研究分子［16-17］。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxM1在細(xì)胞有絲分裂過程中發(fā)揮重要作用，其異常表達(dá)可引起紡錘體缺陷，進(jìn)而使有絲分裂過程延遲，最終參與宮頸癌細(xì)胞增殖過程［18］。CDK6是G1期重要調(diào)控因子，可促進(jìn)細(xì)胞周期從G1期向S期轉(zhuǎn)變，其基因定位于人染色體7q21［19］。研究發(fā)現(xiàn)，CDK6與子宮內(nèi)膜相關(guān)疾病密切相關(guān)；子宮內(nèi)膜癌病灶組織中CDK6表達(dá)較子宮肌瘤病灶組織高，CDK6可通過影響腫瘤細(xì)胞增殖過程參與子宮內(nèi)膜癌的病情演變［20-21］。本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，觀察組異位病灶組織中FoxM1、CDK6陽性表達(dá)率較高，且不同分期、分型EMs患者異位病灶組織中FoxM1、CDK6陽性表達(dá)率存在差異，提示FoxM1、CDK6參與EMs的發(fā)生、發(fā)展，隨著EMs患者病情加重，F(xiàn)oxM1、CDK6表達(dá)升高，分析原因是，高表達(dá)的FoxM1可破壞細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)完整性，促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞發(fā)生遷移、浸潤，進(jìn)而增強(qiáng)異位子宮內(nèi)膜的增殖能力，使得子宮內(nèi)膜細(xì)胞能夠在肌層種植及增殖，最終導(dǎo)致EMs的發(fā)生［22］；CDK6可能通過影響細(xì)胞增殖過程參與EMs的發(fā)生及演變。新近研究顯示，CDK6能夠穩(wěn)定并激活FoxM1，進(jìn)而維持G1~S期基因的正常表達(dá)，使活性氧維持低水平，從而對(duì)細(xì)胞衰老發(fā)揮抑制作用［23］。本研究發(fā)現(xiàn)，EMs患者異位病灶組織中FoxM1、CDK6表達(dá)呈正相關(guān)，提示FoxM1、CDK6可能共同損傷子宮內(nèi)膜基底層的防御功能，促使子宮內(nèi)膜細(xì)胞侵襲肌層，導(dǎo)致EMs發(fā)生，并參與病情的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，F(xiàn)oxM1、CDK6在EMs患者異位病灶組織中陽性表達(dá)率較高，兩者共同參與EMs的發(fā)生及病情演變，且具正相關(guān)關(guān)系，可能為EMs的臨床診治工作提供一定參考依據(jù)。本研究也存在一定局限性，未對(duì)FoxM1、CDK6影響EMs患者病情的具體機(jī)制進(jìn)行深入探究，且為小樣本研究，可能存在一定結(jié)果偏差，有待進(jìn)一步研究工作的開展。