劉莉莉，李 濤，劉柏林,段華安

(1.重慶市合川區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，重慶 401520；2.重慶市北碚區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，重慶 400715;3.重慶市合川區(qū)疾病預(yù)防控制中心辦公室，重慶 401520)

冠狀病毒是已知的廣泛存在自然界具有囊膜的單股正鏈基因組最大RNA病毒[1]。新型冠狀病毒隸屬冠狀病毒β屬，造成了嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。全球報(bào)告的病例超過5 780萬(wàn)例，死亡130萬(wàn)例[2]。新型冠狀病毒感染的患者和無(wú)癥狀感染者可通過飛沫、密切接觸、污染的物品、氣溶膠傳播給易感人群[3-4]，也有很多研究證明糞口也是傳播途徑之一[5]。按照國(guó)家新型冠狀病毒肺炎(后簡(jiǎn)稱新冠肺炎)最新防控要求，入境非“四類”人員的管理入境后核酸檢測(cè)并開展 14 d的集中隔離醫(yī)學(xué)觀察[6]。本研究通過對(duì)3例新冠肺炎無(wú)癥狀感染者居住過的隔離點(diǎn)環(huán)境和生活用品進(jìn)行監(jiān)測(cè)，評(píng)估環(huán)境污染情況，為隔離點(diǎn)預(yù)防新型冠狀病毒傳播起積極作用。

1 資料與方法

1.1一般資料

1.1.1監(jiān)測(cè)樣本選擇及病例基本信息 對(duì)重慶市某境外返渝人員集中隔離點(diǎn)隔離人員開展監(jiān)測(cè)，病例1，女，26歲；病例2，女，50歲；病例3，男，47歲。3例患者均為2020年11月4日從尼泊爾返渝，無(wú)發(fā)熱、干咳、乏力等癥狀，按照《新型冠狀病毒肺炎防控方案(第七版)》要求，入境人員在入境口岸接受海關(guān)核酸檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果是陰性，后專車接到重慶某隔離點(diǎn)集中隔離。此3例患者在入境時(shí)候先要接受海關(guān)核酸檢測(cè)，核酸檢測(cè)陰性才能入境，當(dāng)時(shí)檢測(cè)結(jié)果是陰性，有可能是3例患者處在病毒復(fù)制早期，病毒拷貝數(shù)低，所以核酸檢測(cè)試劑尚未檢測(cè)出，也有可能和樣本采集質(zhì)量、保存等多種因素有關(guān)。11月8日(集中隔離第5天)早晨對(duì)3個(gè)病例采集鼻咽拭子進(jìn)行新型冠狀病毒核酸檢測(cè)，采用中山達(dá)安試劑盒和江蘇碩世試劑盒對(duì)采集樣本開展檢測(cè)，確認(rèn)3個(gè)病例新型冠狀病毒核酸檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，后立刻用負(fù)壓運(yùn)送車送到重慶市第九人民醫(yī)院做相關(guān)CT和臨床檢測(cè)，由北碚區(qū)新冠肺炎防控醫(yī)療專家組判定為無(wú)癥狀感染者后送至重慶市公共衛(wèi)生中心進(jìn)行治療。

1.1.2環(huán)境監(jiān)測(cè)時(shí)間和內(nèi)容 11月8-10日每天對(duì)3例無(wú)癥狀感染者其居住環(huán)境進(jìn)行消毒前后采樣，其中1號(hào)病例住C1棟3011，2號(hào)病例住C1棟3015，3號(hào)病例住C5棟3056。消毒前后采集其居住房間地面、墻面、門及把手、馬桶、家具、電器、床墊和沐浴花灑等相關(guān)生活物品樣本進(jìn)行監(jiān)測(cè)，共采集樣本65份。

1.1.3采樣的個(gè)人防護(hù)和具體采集方法 按照《新型冠狀病毒肺炎防控方案(第七版)》附件8中《特定人群個(gè)人防護(hù)指南》中標(biāo)本采集人員防護(hù)要求防護(hù)；采集地面、墻壁、物品表面拭子等樣本時(shí)，使用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤(rùn)采樣拭子后，對(duì)擬采集的可能被污染概率較高的的地面、墻壁、物品表面重復(fù)涂抹擦拭。擦拭過的拭子放入含3 mL采樣液的采樣管中，棄去尾部。采樣布點(diǎn)針對(duì)采樣對(duì)象表面，進(jìn)行了多點(diǎn)分布式采樣。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑 核酸提取儀器：全自動(dòng)核酸提取儀[江蘇碩世生物科技股份有限公司(SSNP-2000A)；檢測(cè)設(shè)備：實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)儀AFD4800(杭州安杰思醫(yī)學(xué)科技有限公司)]。核酸提取試劑：病毒核酸提取試劑盒(磁珠法)核酸提取或純化試劑(中元科技股份有限公司，批號(hào)：H200919)；檢測(cè)試劑選用兩個(gè)不同廠家的試劑進(jìn)行比對(duì)，使用新型冠狀病毒核酸檢測(cè)試劑盒(熒光 PCR 法)(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司，批號(hào)：20200075)和新型冠狀病毒核酸檢測(cè)試劑盒(雙重?zé)晒釶CR法，江蘇碩世生物科技股份有限公司，批號(hào)：20200812)。

1.2.2檢測(cè)方法 按照《新型冠狀病毒肺炎防控方案(第七版)》中附件6《新型冠狀病毒肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南》[6]、《新型冠狀病毒 PCR 實(shí)驗(yàn)室生物安全要求(第二版)》[7]和選用試劑盒內(nèi)說(shuō)明書要求開展檢測(cè)工作和實(shí)驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量控制及判定。

2 結(jié) 果

2.13例無(wú)癥狀感染者核酸檢測(cè)結(jié)果 11月8日(集中隔離第5天)早上對(duì)3個(gè)病例采集鼻咽拭子進(jìn)行新冠核酸檢測(cè)，根據(jù)中山達(dá)安試劑盒和江蘇碩世試劑盒中對(duì)檢測(cè)結(jié)果判定，確認(rèn)3個(gè)病例新冠核酸檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，為無(wú)癥狀感染者。鼻咽拭子核酸檢測(cè)見表1。

表1 3例無(wú)癥狀感染者核酸檢測(cè)結(jié)果

2.23例無(wú)癥狀感染者環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果 對(duì)3例無(wú)癥狀感染者居住環(huán)境及其生活用具每天消毒，消毒前后共采集樣本65份，其中新型冠狀病毒核酸(ORF 1ab 靶標(biāo)和 N 靶 標(biāo))陽(yáng)性2件，新型冠狀病毒核酸(N 靶 標(biāo))陽(yáng)性2件，總陽(yáng)性率達(dá)6.2%(其中陽(yáng)性均來(lái)源病例3居家樣本，1次消毒后1件，2次消毒前2件，2次消毒后1件。第3次消毒后采集的15份所有環(huán)境和生活用具樣本新型冠狀病毒核酸均為陰性，表中沒有一一展現(xiàn)。見表2。

表2 新冠肺炎無(wú)癥狀感染者隔離點(diǎn)環(huán)境樣本核酸檢測(cè)結(jié)果

3 討 論

《新型冠狀病毒肺炎防控方案(第七版)》明確指出新型冠狀病毒潛伏期為1～14 d，多為3～7 d，3個(gè)病例從疫情蔓延國(guó)尼泊爾入渝，無(wú)發(fā)熱、干咳、乏力等癥狀，初次核酸檢測(cè)結(jié)果均為陰性，5 d后再次檢測(cè)均為陽(yáng)性。面對(duì)國(guó)外疫情的嚴(yán)重形式，我國(guó)針對(duì)入境非“四類”人員入境后核酸檢測(cè)并開展 14 d的集中隔離醫(yī)學(xué)觀察是非常有必要的。無(wú)癥狀感染者也可成為傳染源，國(guó)外有相關(guān)報(bào)道，德國(guó)慕尼黑1例無(wú)癥狀感染者導(dǎo)致 4 人發(fā)病[9]；國(guó)內(nèi)也有不少無(wú)癥狀感染者引起疫情爆發(fā)的報(bào)道[10]，所以要加強(qiáng)對(duì)有新冠肺炎病例持續(xù)傳播國(guó)家及地區(qū)居住史和旅行史人員的主動(dòng)檢測(cè)。無(wú)癥狀感染者的發(fā)現(xiàn)和管理也是當(dāng)前疫情防控不可忽視的重點(diǎn)。

有關(guān)研究證明，新型冠狀病毒比非典型肺炎冠狀病毒和中東呼吸綜合征冠狀病毒的感染率更高，傳染性更強(qiáng)[11]，病毒在病例體內(nèi)廣泛分布[12]，包括呼吸道和腸道等。病毒顆粒直徑約100 nm[13]，可以通過人的呼吸、說(shuō)話、咳嗽和打噴嚏等方式在環(huán)境中懸浮、擴(kuò)散,或沉降堆積在環(huán)境物體和人體表面。大量研究顯示,新型冠狀病毒無(wú)風(fēng)條件下飛沫沉降快、傳播距離通常在 2 m 以內(nèi),有風(fēng)條件下飛沫最遠(yuǎn)能傳播約6 m[14]，飛沫和攜帶病毒排泄物污染的環(huán)境會(huì)容易經(jīng)接觸途徑形成新的感染。DOREMALEN等[15]研究表明，新型冠狀病毒能在不銹鋼及塑料材質(zhì)物體表面存活長(zhǎng)達(dá)72 h，在紙質(zhì)材料上能存活4 h，在銅質(zhì)材料上能存活24 h.吉林大研究團(tuán)隊(duì)學(xué)和新加坡研究團(tuán)隊(duì)在新冠肺炎病例定點(diǎn)救治醫(yī)院環(huán)境中均檢出新冠病毒[16-17]。新冠肺炎無(wú)癥狀感染者居住的隔離點(diǎn)，被新型冠狀病毒污染的可能性極大，容易引隔離點(diǎn)感染。含氯消毒劑、75%乙醇消毒劑能夠?qū)Σ《镜慕Y(jié)構(gòu)產(chǎn)生破壞并能降低和消除其傳染性，但病毒核酸也可能在環(huán)境或物品上殘留，本監(jiān)測(cè)出現(xiàn)了一次消毒后和二次消毒前后均有物品上檢測(cè)出新型冠狀病毒核酸，這可能與消毒劑濃度和消毒劑作用時(shí)間有關(guān)。環(huán)境中病毒的載量不高，檢測(cè)結(jié)果還可能與采樣的部位和采樣時(shí)涂抹的面積有關(guān)。樣本的質(zhì)量不好會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確性，建議在做新型冠狀病毒的環(huán)境監(jiān)測(cè)時(shí)加大采樣面積以提高病毒檢出率。監(jiān)測(cè)中消毒前后出現(xiàn)核酸陽(yáng)性的電器表面、電視遙控器、電視柜臺(tái)面把手和花灑外表面都是不易消毒同時(shí)消毒時(shí)候也容易忽略的物品，所以在做新冠肺炎患者和感染者環(huán)境監(jiān)測(cè)的消毒的時(shí)候一定要重視患者或感染者接觸率較高的物品和一些不易消毒同時(shí)消毒時(shí)候也容易忽略的物品。

RT-PCR是檢測(cè)新型冠狀病毒主要方法[18]，其具有高靈敏度、強(qiáng)特異性的優(yōu)點(diǎn)，檢測(cè)中的 CT 值是半定量結(jié)果。病毒載量與靶標(biāo) CT 值 成反，CT 值越低，樣本中所含病毒載量就越高[19]，本監(jiān)測(cè)中出現(xiàn)的消毒前后有核酸檢出的均來(lái)3號(hào)病例，其ORF 1ab基因和N基因2種試劑檢出CT值都只有15左右，提示病例3呼吸道內(nèi)病毒載量高，傳播的風(fēng)險(xiǎn)也大，建議環(huán)境監(jiān)測(cè)時(shí)候消毒頻次還應(yīng)結(jié)合病例的核酸CT值。同時(shí)在監(jiān)測(cè)時(shí)還應(yīng)選擇靈敏度高的至少2個(gè)廠家生產(chǎn)的試劑盒，以提高核酸檢出率和保障檢測(cè)質(zhì)量，為新冠疫情防控提供科學(xué)準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。

綜上所述，建議嚴(yán)格落實(shí)對(duì)集中隔離的境外返渝人員、新冠肺炎無(wú)癥狀感染者、出院后又返陽(yáng)性等高風(fēng)險(xiǎn)人員相關(guān)管理措施和消毒措施，做好高風(fēng)險(xiǎn)人群和隔離點(diǎn)相關(guān)人員的個(gè)人防護(hù)，對(duì)居住環(huán)境和生活用具開展消毒，消毒頻次應(yīng)結(jié)合病例的核酸CT值，特別要關(guān)注不易消毒的生活用具和區(qū)域，并對(duì)消毒效果進(jìn)行實(shí)時(shí)評(píng)估，對(duì)有效預(yù)防新型冠狀病毒傳播起積極作用。