HIV是導致艾滋病的元兇,盡管高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)能有效地抑制病毒復制,延長患者的壽命,但因為HIV潛伏儲存庫的存在使得艾滋病無法治愈。HIV潛伏儲存庫隱藏在被感染細胞的基因組中,如果中斷抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療,HIV能夠恢復快速復制從而導致艾滋病進展。有復制能力的HIV悄悄潛伏在細胞內(nèi),逃脫免疫系統(tǒng)監(jiān)視,從而形成HIV潛伏儲存庫。如何準確檢測HIV潛伏儲存庫,可為今后艾滋病治愈提供思路。以下是HIV潛伏儲存庫的檢測方法特點的總結(jié)。
病毒生長試驗(viral OUtqrowth assav,VOA)
20世紀90年代首次采用VOA檢測HIV潛伏儲存庫,將靜息CD4+T細胞稀釋到每孔只有一個細胞后,激活細胞內(nèi)病毒基因表達并誘導HIV-1從潛伏感染細胞中釋放,得出有復制能力的潛伏感染細胞數(shù)。該方法價格昂貴、需要大量血液培養(yǎng)、需要在生物安全三級實驗室進行2~3周的培養(yǎng),且刺激一次不能激活所有的潛伏病毒,低估HIV潛伏儲存庫大小。
活化T細胞后檢測HIVRNA試驗
在T細胞激活情況下,通過qPCR檢測整個HIV-1生命周期不同形式的RNA,以RNA為基礎的檢測縮短了細胞培養(yǎng)時間。但一輪刺激并不能激活所有T細胞產(chǎn)生HIV RNA,會在一定程度上低估HIV潛伏儲存庫大小。
PCR測定法檢測HlVDNA潛伏儲存庫
基于PCR方法檢測HIV DNA成為更簡便檢測潛伏儲存庫的方法,并為VOA試驗提供補充。這種方法簡單快速。從qPCR檢測HIV-l DNA確定攜帶HIVDNA數(shù)量,到數(shù)字PCR檢測HIV-1 DNA進行HIV絕對定量,還有Alu-PCR檢測整合HIV-1 DNA數(shù)量去評價HIV潛伏儲存庫大小。
由于PCR方法檢測出的病毒97%存在缺陷,缺陷病毒不能產(chǎn)生具有傳染性的HIV,且受到細胞毒性T細胞的積極監(jiān)控。所以這種方法因為缺陷性病毒的擴增而被嚴重夸大。
治療中斷后反彈時間作為測量潛伏儲存庫的大小
中斷治療后病毒反彈時間反映了HIV潛伏儲存庫的大小,盡管觀察治療中斷后病毒反彈時間是確定患者是否治愈的唯一方法,但是該方法作為檢測潛伏儲存庫大小時,存在道德問題,如抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的中斷或重新治療會產(chǎn)生一定的耐藥性。
完整前病毒DNA檢測(nlact proviral DNA assay,IPDA)
PCR檢測HIV潛伏儲存庫時被缺陷病毒嚴重夸大后,隨后實驗研究發(fā)現(xiàn)90%缺陷病毒的缺陷發(fā)生在包裝信號()和env區(qū),通過數(shù)字PCR檢測和env區(qū)識別出完整病毒與缺陷病毒。