傅 強(qiáng)，徐彥花，張巨明，劉天增

（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)林學(xué)與風(fēng)景園林學(xué)院/ 廣東省草業(yè)工程技術(shù)研究中心，廣東廣州 510642）

隨著經(jīng)濟(jì)、社會(huì)的發(fā)展，草坪已廣泛融入人類生活，成為現(xiàn)代社會(huì)不可分割的一部分[1]。結(jié)縷草(Zoysia japonica)是一種優(yōu)良暖季型草坪草，具有抗旱、耐寒、耐貧瘠、耐踐踏等優(yōu)良特性，被廣泛應(yīng)用于高爾夫球場(chǎng)、運(yùn)動(dòng)場(chǎng)、綠化及水土保持等領(lǐng)域[2-4]。蘭引Ⅲ號(hào)結(jié)縷草是目前在我國南方地區(qū)運(yùn)動(dòng)場(chǎng)上廣泛應(yīng)用的結(jié)縷草品種，于1994 年正式通過全國牧草品種審定委員會(huì)審定登記。該品種具有擴(kuò)展性強(qiáng)、生長迅速、成坪快、耐高溫、耐修剪、耐踐踏、抗寒、青綠期長、觀賞性好、管理成本低等優(yōu)良特性[5-10]，被廣泛應(yīng)用于熱帶、亞熱帶地區(qū)的運(yùn)動(dòng)場(chǎng)草坪建植。但由于我國南方地區(qū)氣候濕熱，病害頻發(fā)，防治難度大，嚴(yán)重影響了運(yùn)動(dòng)場(chǎng)草地的功能使用性和景觀觀賞性[11]。因此，病害防治成為結(jié)縷草草坪養(yǎng)護(hù)管理過程中一個(gè)急需解決的問題[12-13]。

結(jié)縷草大斑病是夏季暖季型草坪質(zhì)量下降的一個(gè)重要因素，主要由立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)引發(fā)[14]。研究發(fā)現(xiàn)，大斑病是鈍葉草(Stenotaphrum helferi)、海濱雀稗(Seashore paspalum)和結(jié)縷草上發(fā)生的最嚴(yán)重的病害之一[15]。立枯絲核菌引起的大斑病能使與葉莖相連的葉鞘產(chǎn)生腐爛，造成宿主莖、葉和根死亡，形成大的圓形病斑，嚴(yán)重時(shí)甚至病斑直徑可達(dá)數(shù)米[16-17]。

近年來，國內(nèi)外對(duì)立枯絲核菌的研究尤其以防治措施的研究為熱點(diǎn)[18-19]。雖然草坪病害有多種防治方法，如化學(xué)防治、生物防治、農(nóng)業(yè)防治等[20-21]，但在生產(chǎn)實(shí)踐中仍然以化學(xué)防治為主，其他防治方法難以奏效[22]。草坪草大斑病的防治通常需要噴施殺菌劑進(jìn)行預(yù)防，以防止其造成持久性損害[15]。在化學(xué)防治過程中長期使用單一殺菌劑，會(huì)導(dǎo)致病原菌出現(xiàn)抗藥性，防治效率下降，用藥量增加，草坪病害防治成本上升。目前殺菌劑種類繁多，需要篩選出低毒、高效的殺菌劑，有針對(duì)性地解決草坪養(yǎng)護(hù)中急需解決的問題。

鑒于此，利用菌絲生長速率法判定殺菌劑對(duì)病原菌菌株的抑制效果，篩選對(duì)供試菌株抑制效果較好的殺菌劑，通過噴施殺菌劑對(duì)結(jié)縷草病害的影響，并結(jié)合在接菌后經(jīng)殺菌劑處理的結(jié)縷草植株的一系列生理響應(yīng)，以期探索出合理的化學(xué)防治方法，為結(jié)縷草大斑病的防治提供指導(dǎo)，為提高草坪觀賞價(jià)值和使用功能奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 立枯絲核菌對(duì)殺菌劑的敏感性測(cè)定

1.1.1 供試材料

供試菌株：立枯絲核菌R. solaniZS-1由本團(tuán)隊(duì)成員從感染大斑病的蘭引Ⅲ號(hào)結(jié)縷草上分離獲得，保存在華南農(nóng)業(yè)大學(xué)草坪實(shí)驗(yàn)室。立枯絲核菌R. solaniZW54是從海南省感染大斑病的細(xì)葉結(jié)縷草(Z. tenuifolia)上分離獲得，由嶺南師范學(xué)院提供。

供試藥劑：3種內(nèi)吸式殺菌劑‘扮綠’(156 g·L?1丙環(huán)唑)、‘繪綠’(50%嘧菌酯)、‘賽達(dá)’(0.31%嘧菌酯+0.75%丙環(huán)唑)以及一種觸殺式殺菌劑‘卉樂’(12%咯菌腈)均由先正達(dá)生物科技有限公司提供。

1.1.2 室內(nèi)毒力測(cè)定

將儲(chǔ)存于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)斜面培養(yǎng)基的立枯絲核菌R. solaniZS-1和ZW54移至PDA 平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，再進(jìn)行帶毒培養(yǎng)基的制備。將供試藥劑用無菌水和培養(yǎng)基稀釋至所需濃度，殺菌劑‘繪綠’的 濃度 梯度 為0.05、0.1、0.5、1、5、10、20、50 mg·L?1，殺菌劑‘扮綠’、‘卉樂’、‘賽達(dá)’的濃度梯度為0.5、1、5、10、20、50 mg·L?1。將菌餅分別接種到各個(gè)不同濃度的帶毒培養(yǎng)基上，每個(gè)培養(yǎng)基上接種1個(gè)菌餅，在30℃、光周期為12 h 的智能人工氣候箱中培養(yǎng)2 d，采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，求出抑菌率，并以藥劑濃度梯度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)，以抑菌率的機(jī)率值為縱坐標(biāo)，求出各藥劑對(duì)兩種病原菌的毒力回歸方程，再根據(jù)毒力回歸方程計(jì)算每種藥劑的抑制中濃度EC50值。

抑菌率=(對(duì)照菌落直徑?處理菌落直徑)/對(duì)照菌落直徑×100%。

1.2 盆栽防效測(cè)定

1.2.1 供試植株培養(yǎng)

將河沙、泥炭土(德國Hawita)和采自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)增城教學(xué)科研基地草坪草地的田間土壤以體積比1?1?1充分混勻，置于121℃高溫滅菌2 h 后分裝于8 cm×8 cm 的塑料花盆中，將采自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)增城教學(xué)科研基地的蘭引Ⅲ號(hào)結(jié)縷草的健康植株草莖移栽其中，將植物材料置于溫度30 ℃晝/25℃夜、光周期12 h、空氣濕度50%、光照強(qiáng)度320 μmol·(m2·s)?1的溫室中。每天澆無菌水50 mL以確保土壤濕潤，定期進(jìn)行施肥，每周修剪一次，保留植株高度約5 cm。

1.2.2 接種物培養(yǎng)

將20 g 小麥(Triticumaestivum)種子置于裝有無菌水的燒杯中浸泡24 h，取出浸泡后的小麥種子于121℃高溫高壓滅菌鍋中滅菌2 h，再置于超凈工作臺(tái)上晾干。再將小麥種子分別平鋪于已培養(yǎng)3 d 的立枯絲核菌菌株ZS-1和ZW54平板培養(yǎng)基上，置于智能人工氣候箱30℃培養(yǎng)7 d 后取出，置于研缽中研磨，得到病原菌接種物[23]。

1.2.3 接種與殺菌劑處理

根據(jù)室內(nèi)毒力測(cè)定的結(jié)果，選取抑菌效果較好的殺菌劑‘繪綠’和‘扮綠’進(jìn)行結(jié)縷草葉面噴施處理，每個(gè)處理4次重復(fù)，噴施等量無菌水作為對(duì)照。殺菌劑噴施濃度均為0.5 mg·L?1，處理2 d 后分別接種立枯絲核菌菌株ZS-1 和ZW54，先噴灑無菌水使葉片濕潤，再將病原菌接種物均勻?yàn)⒃诮Y(jié)縷草葉片表面，每盆0.2 g 病原菌接種物，套袋保濕繼續(xù)置于智能人工氣候箱30℃培養(yǎng)。分別在接菌后4、8、12 d取樣測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。

接菌后12 d，每盆隨機(jī)取50個(gè)葉片，統(tǒng)計(jì)各殺菌劑處理后結(jié)縷草發(fā)病葉片數(shù)，參照公式計(jì)算發(fā)病率，發(fā)病率= 病葉數(shù)/50×100%。每個(gè)處理的發(fā)病率為4個(gè)重復(fù)的平均值。再根據(jù)公式計(jì)算各藥劑相對(duì)防效，防效=(對(duì)照發(fā)病率?處理發(fā)病率)/對(duì)照發(fā)病率×100%。

1.2.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

葉片相對(duì)含水量、葉綠素含量、脯氨酸含量的測(cè)定參考王學(xué)奎[24]的測(cè)定方法；丙二醛含量的測(cè)定采用硫代巴比妥酸法[25]進(jìn)行測(cè)定；苯丙氨酸解氨酶活性的測(cè)定參考陳轉(zhuǎn)成[26]、褚洪龍[27]以及歐陽路平[28]的方法；幾丁質(zhì)酶活性及β-1,3-葡聚糖酶活性的測(cè)定參考蘇州科銘生物試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2016軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的基本處理，使用SPSS 17.0進(jìn)行毒力測(cè)定，求各殺菌劑對(duì)兩種病原菌的毒力回歸方程，并在置信區(qū)間為95%的條件下對(duì)盆栽試驗(yàn)的葉片相對(duì)含水量、葉綠素含量、脯氨酸含量、丙二醛含量、苯丙氨酸解氨酶活性、幾丁質(zhì)酶活性、β-1,3-葡聚糖酶活性、發(fā)病率進(jìn)行單因素方差分析，對(duì)防治效果進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)藥效試驗(yàn)

測(cè)試結(jié)果表明，4種殺菌劑對(duì)立枯絲核菌ZS-1和ZW54的菌落生長均有抑制作用?！L綠’對(duì)菌株ZS-1菌絲生長的抑制效果最好，‘繪綠’和‘扮綠’對(duì)菌株ZW54菌絲生長的抑制效果較好，其EC50值均小于1 mg·L?1，因此殺菌劑‘繪綠’和‘扮綠’是下一步盆栽和田間藥效試驗(yàn)的首選藥劑(表1)。其次，4種供試殺菌劑對(duì)菌株ZS-1的EC50值大于菌株ZW54的EC50值，說明菌株ZS-1對(duì)殺菌劑的耐受性強(qiáng)于菌株ZW54，在施用藥劑防治病害的過程中要注意病原菌的抗藥性問題。

表1 殺菌劑對(duì)立枯絲核菌菌株的毒力測(cè)定Table 1 Toxicity test of different fungicideson mycelial growth of Rhizoctonia solani

2.2 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草葉片相對(duì)含水量的影響

結(jié)縷草接種立枯絲核菌ZS-1和ZW54后，隨著接種時(shí)間的延長，發(fā)病率增加，葉片相對(duì)含水量呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)(圖1)。在接種病原菌后的第4天、第8天和第12天，經(jīng)殺菌劑處理的結(jié)縷草葉片相對(duì)含水量顯著高于未使用殺菌劑的對(duì)照(P<0.05)。殺菌劑處理后的葉片相對(duì)含水量下降緩慢，而對(duì)照的葉片相對(duì)含水量下降更快。殺菌劑‘繪綠’和‘扮綠’對(duì)立枯絲核菌均有較好的抑制效果，葉片相對(duì)含水量在二者處理間無顯著差異(P> 0.05)。

圖1 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草葉片相對(duì)含水量的影響Figure 1 Effect of fungicides on the relative water content of zoysiagrass

2.3 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草葉綠素含量的影響

結(jié)縷草接種立枯絲核菌ZS-1和ZW54后，隨著接種時(shí)間的延長，發(fā)病率增加，葉綠素含量呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)(圖2)。在接種病原菌后的第4天、第8天和第12天，經(jīng)殺菌劑處理的結(jié)縷草葉綠素含量顯著高于未使用殺菌劑的對(duì)照(P<0.05)。殺菌劑處理的葉綠素含量下降緩慢，而對(duì)照的葉綠素含量下降更快。殺菌劑‘繪綠’和‘扮綠’對(duì)立枯絲核菌均有較好的抑制效果，在接種病原菌ZS-1后的第4 天、第8天和第12天葉綠素含量在二者處理間無顯著差異(P>0.05)，在接種病原菌ZW54后的第4天、第8天葉綠素含量在二者處理間無顯著差異，在第12天經(jīng)殺菌劑‘繪綠’處理的結(jié)縷草葉綠素含量顯著高于‘扮綠’殺菌劑處理和對(duì)照。

圖2 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草葉綠素含量的影響Figure2 Effect of fungicideson the chlorophyll content of zoysiagrass

2.4 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草脯氨酸含量的影響

結(jié)縷草接種立枯絲核菌ZS-1和ZW54后，隨著接種時(shí)間的延長，發(fā)病率增加，脯氨酸含量呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)(圖3)。在接種病原菌后的第4天、第8天和第12天，經(jīng)殺菌劑處理的結(jié)縷草脯氨酸含量顯著低于未使用殺菌劑的對(duì)照(P<0.05)。殺菌劑處理的脯氨酸含量上升緩慢，而對(duì)照的脯氨酸含量上升更快。殺菌劑‘繪綠’和‘扮綠’對(duì)立枯絲核菌均有較好的抑制效果，脯氨酸含量在二者處理間無顯著差異(P>0.05)。

圖3 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草脯氨酸含量的影響Figure 3 Effect of fungicides on the proline content of zoysiagrass

2.5 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草丙二醛含量的影響

結(jié)縷草接種立枯絲核菌ZS-1和ZW54后，隨著接種時(shí)間的延長，發(fā)病率增加，對(duì)照的丙二醛含量呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢(shì)，而殺菌劑處理的丙二醛含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)(圖4)。在接種病原菌后的第4天、第8天和第12天，經(jīng)殺菌劑處理的結(jié)縷草丙二醛含量顯著低于未使用殺菌劑的對(duì)照(P<0.05)。殺菌劑‘繪綠’和‘扮綠’對(duì)立枯絲核菌均有較好的抑制效果，二者間無顯著差異(P> 0.05)。

圖4 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草丙二醛含量的影響Figure4 Effect of fungicideson themalondialdehyde content of zoysiagrass

2.6 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草苯丙氨酸解氨酶活性的影響

結(jié)縷草接種立枯絲核菌ZS-1和ZW54后，隨著接種時(shí)間的延長，發(fā)病率增加，對(duì)照的苯丙氨酸解氨酶活性呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，而殺菌劑處理的苯丙氨酸解氨酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)(圖5)。在接種病原菌后的第4天、第8天和第12天，經(jīng)殺菌劑處理的結(jié)縷草苯丙氨酸解氨酶活性顯著高于未使用殺菌劑的對(duì)照(P<0.05)。殺菌劑‘繪綠’和‘扮綠’對(duì)立枯絲核菌均有較好的抑制效果，經(jīng)殺菌劑‘繪綠’處理的結(jié)縷草苯丙氨酸解氨酶活性顯著高于殺菌劑‘扮綠’處理(P< 0.05)。

圖5 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草苯丙氨酸解氨酶活性的影響Figure 5 Effect of fungicides on the phenylalanine ammonia-lyase activity of zoysiagrass

2.7 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草幾丁質(zhì)酶活性的影響

結(jié)縷草接種立枯絲核菌ZS-1和ZW54后，隨著接種時(shí)間的延長，發(fā)病率增加，對(duì)照的幾丁質(zhì)酶活性呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，而殺菌劑處理的幾丁質(zhì)酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)(圖6)。在接種病原菌后的第4天、第8天和第12天，經(jīng)殺菌劑處理的結(jié)縷草幾丁質(zhì)酶活性顯著高于未使用殺菌劑的對(duì)照(P<0.05)。殺菌劑‘繪綠’和‘扮綠’對(duì)立枯絲核菌均有較好的抑制效果，經(jīng)殺菌劑‘繪綠’處理的結(jié)縷草幾丁質(zhì)酶活性顯著高于殺菌劑‘扮綠’處理(P< 0.05)。

圖6 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草幾丁質(zhì)酶活性的影響Figure 6 Effect of fungicides on the chitinase activity of zoysiagrass

2.8 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草β-1,3-葡聚糖酶活性的影響

結(jié)縷草接種立枯絲核菌ZS-1和ZW54后，隨著接種時(shí)間的延長，發(fā)病率增加，對(duì)照的β-1,3-葡聚糖酶活性呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢(shì)，而殺菌劑處理的β-1, 3-葡聚糖酶活性呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)(圖7)。在接種病原菌后的第4天、第8天和第12天，經(jīng)殺菌劑處理的結(jié)縷草β-1,3-葡聚糖酶活性顯著高于未使用殺菌劑的對(duì)照(P<0.05)。殺菌劑‘繪綠’和‘扮綠’對(duì)立枯絲核菌均有較好的抑制效果，經(jīng)殺菌劑‘繪綠’處理的結(jié)縷草β-1,3-葡聚糖酶活性顯著高于殺菌劑‘扮綠’處理(P< 0.05)。

圖7 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草β-1, 3-葡聚糖酶活性的影響Figure 7 Effect of fungicides on the β-1, 3-glucanase activity of zoysiagrass

2.9 殺菌劑處理后結(jié)縷草大斑病的發(fā)病率

立枯絲核菌菌株ZS-1和ZW54對(duì)結(jié)縷草均具有較強(qiáng)的致病性(圖8)。在接菌后12 d，染病植株葉片和葉鞘上出現(xiàn)水漬狀或褐色斑點(diǎn)，然后整個(gè)葉片迅速變黃死亡。經(jīng)殺菌劑處理的結(jié)縷草大斑病發(fā)病率顯著低于未使用殺菌劑的對(duì)照(P<0.05)。殺菌劑‘扮綠’處理的發(fā)病率較高，菌株ZS-1和ZW54的發(fā)病率分別為43.49%和41.18%。殺菌劑‘繪綠’處理的發(fā)病率顯著低于殺菌劑‘扮綠’處理(P<0.05)。在殺菌劑‘繪綠’、‘扮綠’處理下病原菌為ZS-1的病株發(fā)病率均高于病原菌為ZW54的病株的發(fā)病率。經(jīng)殺菌劑處理的結(jié)縷草死亡率顯著低于未使用殺菌劑的對(duì)照(P< 0.05)，殺菌劑‘繪綠’處理的死亡率最低。

圖8 殺菌劑處理后結(jié)縷草大斑病的發(fā)病率Figure 8 Effect of fungicides on the incidence rate of large patch

2.1 0殺菌劑對(duì)結(jié)縷草大斑病的防治效果

殺菌劑‘繪綠’、‘扮綠’處理對(duì)立枯絲核菌菌株ZS-1和ZW54引發(fā)的結(jié)縷草大斑病均具有一定的防治效果(圖9)。殺菌劑‘繪綠’處理對(duì)結(jié)縷草大斑病的防效顯著高于殺菌劑‘扮綠’處理(P<0.05)。殺菌劑‘繪綠’防效最優(yōu)，對(duì)菌株ZS-1和ZW54的防效分別為43.61%和49.58%。殺菌劑‘繪綠’、‘扮綠’處理對(duì)病原菌ZS-1的病株防效均低于對(duì)病原菌ZW54的病株的防效。

圖9 殺菌劑處理對(duì)結(jié)縷草大斑病的防效Figure 9 Effect of fungicides on control efficacy of large patch

3 討論與結(jié)論

本研究通過4種殺菌劑分別對(duì)結(jié)縷草大斑病菌株ZW54和大斑病菌株ZS-1的抑制效果的測(cè)定，結(jié)果表明，供試的4種殺菌劑對(duì)菌株ZS-1和ZW54均有抑制作用，且各殺菌劑處理間抑制效果差異顯著；殺菌劑‘繪綠’(50%嘧菌酯)對(duì)供試的兩株結(jié)縷草病原菌菌株的抑制作用最強(qiáng)。兩株菌株對(duì)各殺菌劑的耐受性也有差異，4種供試殺菌劑對(duì)菌株ZS-1的抑制作用均比ZW54的抑制作用弱，即菌株ZS-1對(duì)4種殺菌劑的耐受性比菌株ZW54高。其原因之一可能是菌株的來源和生境不同導(dǎo)致，菌株ZS-1是從深圳大運(yùn)中心體育場(chǎng)的蘭引Ⅲ號(hào)結(jié)縷草感病植株中分離出的，在日常的場(chǎng)地養(yǎng)護(hù)中經(jīng)常施用多種殺菌劑，因此菌株ZS-1 對(duì)殺菌劑具有一定的耐藥性，敏感性有所降低；而菌株ZW54從野生細(xì)葉結(jié)縷草的感病植株中分離獲得，在此前的生境中處于自然發(fā)病狀態(tài)，并未接觸任何殺菌劑，所以對(duì)殺菌劑較為敏感。另一種造成耐藥性的原因可能是觸殺式殺菌劑‘卉樂’不能在植物體內(nèi)傳導(dǎo)或移動(dòng)性差，只對(duì)植物直接接觸殺菌劑的部位起作用，發(fā)揮作用比較快，表現(xiàn)直觀；3種內(nèi)吸式殺菌劑‘扮綠’、‘繪綠’和‘賽達(dá)’可被植物根、莖、葉等部位吸收，并經(jīng)輸導(dǎo)組織從吸收部位傳導(dǎo)到其他部位發(fā)揮作用，藥效較慢。

有研究發(fā)現(xiàn)植物在受到病害脅迫時(shí)，葉片相對(duì)含水量和葉綠素含量會(huì)有所降低，而下降速度越慢，說明植物的生長代謝越好，更有利于抵御病害[26,28]。本研究在結(jié)縷草葉片相對(duì)含水量和葉綠素含量的變化中發(fā)現(xiàn)殺菌劑處理后的結(jié)縷草對(duì)菌株ZS-1和菌株ZW54的抵抗性有所提高。在受到病原菌侵染時(shí)，植物自身會(huì)產(chǎn)生脯氨酸，用來分解活性氧自由基，從而抵抗病原菌對(duì)自身細(xì)胞的影響[27]，植物組織細(xì)胞發(fā)揮正常生理功能的基礎(chǔ)是細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性和流動(dòng)性。植物組織受病害脅迫時(shí)，會(huì)使植物組織細(xì)胞膜受損，丙二醛含量積累[29-30]。也有研究表明丙二醛含量越高，說明植物細(xì)胞膜受到的危害越大[31-32]。本研究中，在接種菌株后經(jīng)殺菌劑處理的植株中丙二醛含量顯著低于對(duì)照，與上述研究結(jié)果類似。說明殺菌劑對(duì)病原菌均有抑制作用。

苯丙氨酸解氨酶、幾丁質(zhì)酶以及β-1,3-葡聚糖酶活性是研究植物抗病性的重要指標(biāo)[26]。在苯丙烷代謝途徑中苯丙氨酸解氨酶起關(guān)鍵作用，參與了多種激發(fā)子誘導(dǎo)的抗性，有效提高了植物抵抗病原侵染的能力[33]。本研究中，殺菌劑‘繪綠’處理的植株苯丙氨酸解氨酶活性在所有處理中最低，這說明殺菌劑‘繪綠’處理后，菌株ZS-1和菌株ZW54對(duì)植株的侵染受到抑制，與上述研究結(jié)果一致。幾丁質(zhì)酶通過降解侵染植株的真菌病原菌菌株的細(xì)胞壁，從而提高植物自身對(duì)病原的抗性[28]。殺菌劑處理的植株幾丁質(zhì)酶活性在感病后期均有所降低，說明藥劑處理可以有效抑制病原菌菌株的侵染。在植物的抗病防御體系中，植物對(duì)病原菌的抑制作用主要是通過幾丁質(zhì)酶和β-1,3-葡聚糖酶等協(xié)同作用來完成[34]。在接種菌株后，殺菌劑‘繪綠’處理的植株β-1,3-葡聚糖酶活性隨接菌天數(shù)的增加而呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。在感病初期殺菌劑‘繪綠’可能會(huì)提高植株的β-1,3-葡聚糖酶活性，從而減少菌株的侵害，在感病后期由于殺菌劑對(duì)病原菌的抑制和植物體內(nèi)的β-1,3-葡聚糖酶活性的提高對(duì)于病原菌的防御作用共同降低了植株受病原菌的侵害，說明殺菌劑對(duì)2株病原菌引起的病害均有防治作用。

殺菌劑防治病害是一個(gè)極其復(fù)雜的生理生化過程，涉及到多種物質(zhì)的相互作用[35]，所以僅從藥劑防治的效果不能非常全面地反映殺菌劑對(duì)病害的防治作用。本研究綜合相對(duì)含水量、葉綠素含量、脯氨酸含量、丙二醛含量、苯丙氨酸解氨酶活性、幾丁質(zhì)酶活性及β-1,3-葡聚糖酶活性各項(xiàng)生理指標(biāo)，探究了不同殺菌劑對(duì)病害的綜合影響，篩選出對(duì)結(jié)縷草大斑病病原菌抑制效果較強(qiáng)的兩種殺菌劑‘繪綠’和‘扮綠’。而殺菌劑‘繪綠’對(duì)兩株病原菌ZS-1和ZW54的抑制作用均為最優(yōu)，其防效分別為43.61%和49.58%。