陳念慈,王思瑩,柴鑫妍，3,趙 永，4,楊萬(wàn)蓮，,孫艷爭(zhēng)，,呂艷麗，*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100193；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院，北京 100193；3.北京寵頤生動(dòng)物醫(yī)院，北京 100021；4.北京世紀(jì)好未來科技教育有限公司，北京 100192)

犬細(xì)小病毒(canine parvovirus，CPV)是臨床上引起犬發(fā)病的重要病原體，最早于1977年從患出血性腸炎的犬糞便中分離得到[1]。大多數(shù)的犬科動(dòng)物均有可能感染CPV，6周齡至6月齡的犬發(fā)病率較高。大多數(shù)CPV患犬會(huì)出現(xiàn)胃腸道癥狀，表現(xiàn)為嘔吐、腹瀉、脫水和胃腸道出血等，少數(shù)病例會(huì)出現(xiàn)心肌炎癥狀[2]。除此之外，CPV會(huì)抑制骨髓，造成白細(xì)胞的減少。細(xì)小病毒病的治療通常包括抗病毒治療、對(duì)癥治療、防止繼發(fā)感染和支持療法。其中抗病毒治療除了使用干擾素、球蛋白等廣譜抗病毒藥物外，還包括針對(duì)CPV進(jìn)行特異性治療。國(guó)內(nèi)目前廣泛使用CPV單克隆抗體進(jìn)行特異性抗病毒治療，而關(guān)于CPV特異性免疫球蛋白的臨床應(yīng)用情況報(bào)道較少。本研究收集了中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院2016年1月—2019年11月接收的CPV病患犬病例治療信息，旨在探究CPV特異性免疫球蛋白在臨床的應(yīng)用效果。

1 材料與方法

1.1 病例選擇

選取2016年1月—2019年11月在中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院就診、經(jīng)安捷CPV抗原檢測(cè)試紙條(Anigen Rapid CPV Ag Test Kit?)檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性的患犬作為研究對(duì)象，跟蹤回訪其治療情況。研究對(duì)象不包含同時(shí)感染犬瘟熱致死的病例。

1.2 特異性抗病毒藥物

犬細(xì)小病毒特異性免疫球蛋白注射液來自于北京博萊得利生物技術(shù)有限責(zé)任公司。本品主要含有犬細(xì)小病毒特異性免疫球蛋白，純度≥96%，犬細(xì)小病毒中和抗體效價(jià)≥1∶640，HI效價(jià)≥1∶1 280。

犬細(xì)小病毒單克隆抗體注射液來自哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司。本品主要含有犬細(xì)小病毒單克隆抗體，HI效價(jià)≥1∶1 280。

1.3 方法

通過臨床跟診、病歷查閱和電話回訪等方式詳細(xì)記錄CPV患犬的基本信息、免疫史和病史，觀察和詢問動(dòng)物主人治療過程中病犬精神飲食情況、嘔吐情況、糞便性狀、體溫等臨床癥狀。以患犬首次出現(xiàn)食欲下降、精神不振或嘔吐、腹瀉等CPV相關(guān)臨床癥狀作為發(fā)病的首日，以嘔吐和腹瀉癥狀消失、精神食欲恢復(fù)正常作為痊愈判定標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算病程。以拜奧高犬三聯(lián)抗體檢測(cè)試劑盒(Canine VacciCheck?)檢測(cè)結(jié)果作為抗體HI效價(jià)檢測(cè)依據(jù)。

將收集的病例數(shù)據(jù)錄入Microsoft Excel軟件中整理，并采用SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1 總體治愈率比較

在收集的具有詳細(xì)病程及轉(zhuǎn)歸情況記錄的CPV病例中，使用CPV特異性免疫球蛋白治療的病例共97例，其中痊愈77例，死亡20例，治愈率為79.38%。在同一時(shí)期使用CPV單抗治療的病例共計(jì)143例，其中痊愈116例，死亡27例，治愈率為81.12%。數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，CPV特異性免疫球蛋白與CPV單抗的治愈率無顯著差異(P>0.05)。

2.2 不同初始抗體水平的治愈率比較

在完整記錄初始抗體水平的病例中，使用CPV特異性免疫球蛋白進(jìn)行治療的共69例，使用CPV單抗的共78例。按照初始CPV抗體效價(jià)0～1∶40、1∶80～1∶160、≥1∶320進(jìn)行劃分，各抗體水平的治愈率結(jié)果見表1。

表1 不同初始抗體水平CPV患犬的治愈率比較

初始抗體效價(jià)為0～1∶40時(shí)，CPV特異性免疫球蛋白治愈率為71.43%，CPV單抗治愈率為74.36%；初始抗體效價(jià)為1∶80～1∶160時(shí)，CPV特異性免疫球蛋白治愈率為91.30%，CPV單抗治愈率為88.00%；初始抗體效價(jià)≥1∶320時(shí)，CPV特異性免疫球蛋白治愈率為90.91%。CPV單抗治愈率為78.57%。數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS軟件卡方檢驗(yàn)，CPV特異性免疫球蛋白和CPV單抗在各初始抗體水平下的治愈率均無顯著性差異(P>0.05)。另外，約50%的CPV患犬的初始抗體水平小于1∶80，該組治愈率低于更高抗體水平組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.3 不同月齡的治愈率比較

按照0～3、4～6以及≥7月齡對(duì)病例進(jìn)行劃分。使用CPV特異性免疫球蛋白進(jìn)行治療的共97例，使用CPV單抗的共143例，各月齡段病例的治愈率結(jié)果見表2。

表2 不同月齡CPV患犬的治愈率比較

0～3月齡的病例中，CPV特異性免疫球蛋白治愈率為67.24%，CPV單抗治愈率為68.42%；4～6月齡 的病例中，CPV特異性免疫球蛋白治愈率為95.24%，CPV單抗治愈率為91.30%；，7月齡及以上的病例中，CPV特異性免疫球蛋白與CPV單抗的治愈率均為100.00%。數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS軟件卡方檢驗(yàn)，在相同月齡段下，CPV特異性免疫球蛋白和CPV單抗的治愈率均無顯著差異(P>0.05)。0～3月齡 患犬占總數(shù)的50%～60%，該月齡段的治愈率均顯著低于更高月齡段(P<0.05)。

2.4 痊愈病例的病程比較

CPV特異性免疫球蛋白與CPV單抗治療的痊愈病例病程分布見圖1。由圖可見CPV患犬的痊愈病程主要集中于4～9 d。使用CPV特異性免疫球蛋白后痊愈的病例共77例，其中病程為4～9 d的病例為65例，占84.42%。使用CPV單抗痊愈的病例116例，其中病程為4～9 d的病例為101例，占87.07%。經(jīng)SPSS軟件檢驗(yàn)，兩組病程數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布。使用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)方法分析，使用CPV特異性免球蛋白治療的病例痊愈時(shí)間為(6.00±2.01)d，使用CPV單抗治療的病例痊愈時(shí)間為(6.95±2.06)d，特異性球蛋白組的治愈時(shí)間顯著少于單抗組(P=0.02<0.05)。

圖1 不同藥物治療的CPV患犬的痊愈病程分布

3 討 論

犬細(xì)小病毒單克隆抗體是通過體外人工培養(yǎng)高效表達(dá)CPV特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞株而獲得的生物制品，其效價(jià)高且特異性強(qiáng)，在治療犬細(xì)小病毒病方面發(fā)揮了重要作用。犬細(xì)小病毒特異性免疫球蛋白是通過對(duì)健康犬進(jìn)行多次CPV免疫，從中篩選含有高效價(jià)CPV中和抗體的犬血清進(jìn)行免疫球蛋白的提取和純化而獲得的血液制品。多種疾病中，高免血清的治療效果已經(jīng)被證實(shí)[3-4]。CPV特異性免疫球蛋白制劑與普通高免血清相比具有更高的安全性，在臨床使用中未見明顯不良反應(yīng)。周靈等[5]使用與本研究相同的CPV特異性免疫球蛋白產(chǎn)品，結(jié)果顯示其病毒中和效果優(yōu)于CPV多克隆抗體，中和抗體效價(jià)達(dá)1∶873，HI效價(jià)達(dá)1∶211。姜旭等[6]、李六金等[7]證實(shí)了CPV免疫球蛋白對(duì)犬細(xì)小病毒病具有良好的治療效果。

在本研究中，CPV特異性免疫球蛋白與臨床較常使用的CPV單抗相比可以顯著縮短痊愈病例的病程，原因可能在于以下兩個(gè)方面。首先，CPV特異性免疫球蛋白來源于疫苗免疫的健康犬血清，經(jīng)過蛋白提純與滅活處理后，可以通過靜脈注射直接進(jìn)入血液循環(huán)，患犬吸收效率更高，起效更快。其次，與單克隆抗體比較，CPV特異性免疫球蛋白除了含有CPV特異性多克隆抗體外，還含有與生活環(huán)境和疫苗接種等相關(guān)的多種抗體和球蛋白，不僅可以中和病毒，還可以通過活化補(bǔ)體以及結(jié)合Fc受體產(chǎn)生抗體依賴性細(xì)胞毒性作用和調(diào)理吞噬作用，激活機(jī)體免疫細(xì)胞，清除細(xì)胞內(nèi)的病毒，縮短治療周期。

兩種藥物對(duì)相同月齡段患犬的治愈率并無差異，但0～3月齡病例的治愈率要顯著低于更高月齡，這可能與3月齡以下幼犬免疫功能不完全和處于免疫窗口期有關(guān)。初始抗體效價(jià)達(dá)到1∶80以上的病例治愈率較高，這與Gooding和Robinson[8]的研究結(jié)果相同。部分高抗體水平的病例仍然出現(xiàn)死亡，首先可能是因?yàn)閯?dòng)物存在基礎(chǔ)病或并發(fā)癥。其次，部分患犬發(fā)病后數(shù)日首次測(cè)得的抗體滴度并不能完全代表其感染CPV時(shí)機(jī)體實(shí)際的抗體水平。另外，毒株變異可能導(dǎo)致致病性增強(qiáng)或抗原性改變，多篇報(bào)道指出接受完全免疫的犬暴發(fā)新亞型病毒的感染[9-11]。但疫苗免疫效果受多種因素影響，更多學(xué)者普遍認(rèn)為目前CPV疫苗對(duì)各個(gè)亞型病毒均具有保護(hù)作用[12-14]。

犬細(xì)小病毒病作為寵物臨床中死亡率較高的傳染病，對(duì)養(yǎng)犬業(yè)帶來了巨大的損失。尋找犬細(xì)小病毒病的有效治療方法具有重要的臨床意義，但防治犬細(xì)小病毒病更重要的是對(duì)幼犬進(jìn)行免疫接種。世界小動(dòng)物獸醫(yī)協(xié)會(huì)(WSAVA)免疫小組研究指出，以正確程序接受核心疫苗的犬對(duì)疾病保護(hù)率達(dá)到98%以上[14]。在購(gòu)買寵物犬時(shí)，要從正規(guī)渠道購(gòu)買免疫完全的犬，盡可能保證動(dòng)物健康。

4 結(jié) 論

CPV特異性免疫球蛋白和CPV單克隆抗體的總治愈率、相同初始抗體水平治愈率、相同月齡段治愈率均無顯著差異(P>0.05)，但使用CPV特異性免疫球蛋白的病例痊愈時(shí)間顯著低于CPV單克隆抗體(P=0.02<0.05)，這說明CPV特異性免疫球蛋白具有良好的臨床應(yīng)用效果。