楊舒喬，王 迪，高彥祥*

（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，北京 100083）

交原蛋白或稱交原是一類重要的蛋白質(zhì)，是細(xì)胞外基質(zhì)的一種結(jié)構(gòu)蛋白。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有20余種不同類型的交原蛋白，包括I型、II型、III型、IV型和V型等[1]（表1）。其中，II型交原蛋白（collagen type II，CII）具有致密的纖維結(jié)構(gòu)，是軟骨基質(zhì)中最主要的有機(jī)成分，為軟骨組織的特征性蛋白質(zhì)，與多糖緊密結(jié)合，使軟骨具有柔韌性，可以吸收沖擊和承受負(fù)載。研究表明，保持完整三螺旋結(jié)構(gòu)的CII，即非變性CII（undenatured type II collagen，UC-II）具有良好的生物相容性和低抗原性，以適宜劑量的UC-II誘導(dǎo)人體免疫耐受，可預(yù)防或緩解骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病癥[2]。本文主要闡述UC-II的分布、功能及結(jié)構(gòu)特性，對(duì)UC-II的提取方法及應(yīng)用現(xiàn)狀進(jìn)行綜合論述，同時(shí)總結(jié)現(xiàn)有的UC-II表征方法，并對(duì)其應(yīng)用前景做出展望。

表1 不同類型膠原蛋白的肽鏈組成及組織分布[1,3]Table 1 Peptide chain composition and distribution of different types of collagen in animal tissues[1,3]

1 UC-II的特點(diǎn)

UC-II主要分布于軟骨、眼玻璃體、髓核、角膜和胚胎的上皮細(xì)胞中，具備良好的生物相容性、生物可降解性、低免疫原性等交原蛋白基本生物學(xué)功能，還可以維持軟骨組織的完整性，刺激軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)和再分化[3]。UC-II由3 條α1肽鏈組成，即[α1(II)]3。每一條多肽鏈的氨基酸排列中，存在甘氨酸-X-Y（G-X-Y）這樣的三肽重復(fù)序列，可用（G-X-Y）n表示[4-6]。同時(shí)X位通常由脯氨酸殘基占據(jù)（20%～30%），甘氨酰-脯氨酰-Y這類三肽的數(shù)量約占三肽數(shù)量總和的1/3，其結(jié)構(gòu)式如圖1所示。這種三肽重復(fù)序列對(duì)交原蛋白的結(jié)構(gòu)具有重要作用。每條肽鏈有1 000 個(gè)左右氨基酸殘基，分子質(zhì)量介于95 000～100 000 Da之間，所以每一個(gè)UC-II分子的分子質(zhì)量約為300 kDa。

圖1 UC-II的甘氨酰-脯氨酰-Y結(jié)構(gòu)[1]Fig.1 Gly-Pro-Y structure of undenatured type II collagen[1]

UC-II的二級(jí)結(jié)構(gòu)是由3 條肽鏈組成的三股螺旋[7-9]，各個(gè)鏈中的氨基酸通過(guò)肽鍵結(jié)合，而3 條肽鏈則通過(guò)氫鍵、偶極-偶極鍵、離子鍵和范德華相互作用維持三螺旋結(jié)構(gòu)。但UC-II的三螺旋結(jié)構(gòu)極易受內(nèi)因或外因的影響，如環(huán)境溫度升高可導(dǎo)致UC-II的三股肽鏈之間的氫鍵不斷減弱，肽鏈的螺旋度降低，逐漸伸直至解螺旋，整個(gè)蛋白的無(wú)序性增加，變性后的UC-II生物活性大大降低[10-13]，圖2為UC-II與變性CII的顯微結(jié)構(gòu)圖。

圖2 UC-II（A）和變性CII（B）的電子顯微結(jié)構(gòu)（×50 000）[14]Fig.2 Electron micrographs of undenatured (A) and denatured collagen II (B) (× 50 000)[14]

2 UC-II提取方法

對(duì)交原蛋白提取方法的研究大部分都集中在I型交原蛋白上，通常以雞、牛、羊、豬、魚(yú)等動(dòng)物的皮、骨、肌腱等為原料，采用堿法、酸法或酶法進(jìn)行提取[15-18]。堿法容易引起蛋白質(zhì)變性，甚至?xí)a(chǎn)生D-型、L-型氨基酸消旋混合物，且提取率較低，因此若想要提取完整結(jié)構(gòu)的交原蛋白則很少采用此法。酸法雖然可以較大程度地保持交原蛋白的三螺旋結(jié)構(gòu)，但是在濃酸條件下色氨酸、絲氨酸、酪氨酸等氨基酸會(huì)遭到一定程度的破壞，同時(shí)采用酸法提取需要準(zhǔn)確控制酸度、溫度、時(shí)間等條件，因此酸法很少單獨(dú)使用，通常與酶法配合。CII的結(jié)構(gòu)更為復(fù)雜，絲狀的交原蛋白纖維與彈性蛋白及多糖蛋白相互交織形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，同時(shí)還要保證在提取過(guò)程中三螺旋結(jié)構(gòu)不被破壞，提取難度較大。現(xiàn)有的提取方大多采用酶解法，選用特定的蛋白酶，切斷苯丙氨酸、亮氨酸或谷氨酸殘基側(cè)的肽鍵，去除CII末端的非螺旋區(qū)域，則螺旋區(qū)的交原蛋白可溶解在酸性溶液中，從而得到高純度的UC-II（圖3）。

圖3 原膠原蛋白分子結(jié)構(gòu)[19]Fig.3 Molecular structure of pro-collagen[19]

2.1 UC-II提取方法的國(guó)外研究現(xiàn)狀

Trentham等[2]在早在1977年就通過(guò)關(guān)節(jié)炎模擬實(shí)驗(yàn)研究UC-II的自身免疫現(xiàn)象，其在0.5 mol/L乙酸的酸性條件下用胃蛋白酶提取UC-II，但該方法酶解時(shí)間長(zhǎng)達(dá)3 d，且并未對(duì)酶解產(chǎn)物的純度及結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。Ho等[20]首次采用豬軟骨作為原料，提高胃蛋白酶使用量同時(shí)降低酶解溫度，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%胃蛋白酶在1 ℃下酶解16 h提取UC-II，該工藝縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)，提高了提取效率。為進(jìn)一步優(yōu)化提取工藝，Meng Dawei等[21]發(fā)現(xiàn)在用鱘魚(yú)脊索提取UC-II時(shí)，對(duì)脊索進(jìn)行堿性預(yù)處理不僅可以提高交原蛋白的提取速率，且不影響交原蛋白的熱穩(wěn)定性，使其仍保持三螺旋結(jié)構(gòu)。Cremer等[22]指出，在提取前用低離子強(qiáng)度緩沖液（如磷酸鉀緩沖液）去除蛋白多糖，有利于CII的溶出，提高提取效率。Sturrock等[23]提出一種UC-II的制備方法，主要包括預(yù)處理階段使用胃蛋白酶部分消化和除去大部分含有I型交原蛋白的軟骨膜，以及用胰蛋白酶去除與CII交聯(lián)的蛋白多糖，從而獲得純度較高的UC-II。Maity等[24]在2019年提出了一種經(jīng)濟(jì)有效的快速分離CII的方法，將山羊耳軟骨在37 ℃下采用0.04%胃蛋白酶消化72 h，用1.2 mol/L NaCl沉淀，可優(yōu)化CII的分離效果，提取率約為55%，并且在分離和純化過(guò)程中保留了天然分子間交聯(lián)，酰胺II帶（1 553 cm-1）的存在表明分離的蛋白質(zhì)保留了三螺旋結(jié)構(gòu)。

2.2 UC-II提取方法的國(guó)內(nèi)研究現(xiàn)狀

國(guó)內(nèi)對(duì)UC-II的研究起步較晚。王彥宏等[25]在2000年用含1 g/L胃蛋白酶的0.5 mol/L乙酸溶液酶解粉碎后的牛軟骨，并用離子交換色譜進(jìn)行純化，得到牛軟骨UC-II，但并未進(jìn)行定量測(cè)定。葉春婷等[26]在2001年對(duì)提取方法進(jìn)行改進(jìn)，選取豬透明軟骨作為原料，用二乙氨乙基纖維素（diethylaminoethyl cellulose，DAEA）柱對(duì)微量殘留的蛋白多糖進(jìn)行吸附，再經(jīng)胃蛋白酶酶解，整個(gè)提取、純化過(guò)程中多次采用了NaCl鹽析手段去除降解或變性的交原，得到了高純度的UC-II。陸雪琴[27]比較鹽析和鹽酸胍溶解2 種去雜質(zhì)方法對(duì)UC-II得率和純度的影響，結(jié)果表明無(wú)論是提取率還是純度，鹽酸胍處理都優(yōu)于NaCl鹽析。此后，大多數(shù)研究都使用鹽酸胍對(duì)原料進(jìn)行預(yù)處理。李賽娜等[28]將牛關(guān)節(jié)軟骨用NaCl和鹽酸胍進(jìn)行預(yù)處理，在酸性條件下用胃蛋白酶降解雜蛋白，經(jīng)鹽析、透析和冷凍干燥后獲得UC-II。劉媛[29]以羊軟骨為原料，用鹽酸胍抽提蛋白多糖，在酸性條件下用胃蛋白酶酶解，得到純度為93.12%的UC-II。曹慧[19]通過(guò)響應(yīng)面方法得到UC-II提取的最優(yōu)酶解條件為胃蛋白酶質(zhì)量濃度1 g/100 mL、酶解時(shí)間32 h、酶解溫度20 ℃，該條件下UC-II提取率43.49%。

除選用雞、牛、羊等陸地動(dòng)物軟骨作為提取原料外，海洋動(dòng)物軟骨也被逐漸利用。郭休玉等[30]在2016年采用魷魚(yú)軟骨作為原料，經(jīng)0.2%胃蛋白酶在4 ℃下水解48 h后，得到魷魚(yú)軟骨UC-II。車帥等[31]在2018年用人工養(yǎng)殖中華鱘軟骨提取UC-II，采用二次提取法，在含有0.1 g/100 mL胃蛋白酶的0.5 mol/L冰醋酸中重復(fù)酶解2 次，每次48 h，在真空度20 Pa下冷凍干燥得到中華鱘軟骨UC-II，也為海洋生物的綜合利用提供新思路。

通過(guò)上述研究可以發(fā)現(xiàn)，雖然軟骨來(lái)源不同，但提取方式基本相同。一般包括以下幾個(gè)步驟：原料的預(yù)處理、脫脂、去除雜蛋白、酶解、純化（表2）。大部分提取方法都存在處理量小、生產(chǎn)工藝繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)、實(shí)驗(yàn)試劑成本高等問(wèn)題，適合實(shí)驗(yàn)室制備樣品，并不利于規(guī)?；a(chǎn)。

表2 UC-II提取方法Table 2 Extraction methods for undenatured type II collagen

3 UC-II定性和定量檢測(cè)方法

UC-II的定性和定量檢測(cè)既是UC-II研究的重點(diǎn)也是難點(diǎn)。通常采用Woessner比色法及反相高效液相色譜法對(duì)UC-II進(jìn)行定量檢測(cè)，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝交電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）、氨基酸測(cè)定、紫外吸收光譜、傅里葉變換紅外光譜、差示掃描量熱法、圓二色光譜分析、等電點(diǎn)測(cè)定、掃描電子顯微鏡等方法也逐漸被應(yīng)用于UC-II的定性檢測(cè)[26-31]。近些年，已有研究將質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫吸附法用于UC-II的檢測(cè)[33-35]，為其定量檢測(cè)提供新的方向。

3.1 UC-II的定量檢測(cè)

3.1.1 Woessner比色法[36]

比色法又稱分光光度法，是對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量分析的常用方法。羥脯氨酸是一種非必需氨基酸，也是交原蛋白的特征氨基酸。Woessner比色法的基本原理是：含羥脯氨酸的樣品經(jīng)酸水解后，用氯胺T將羥脯氨酸氧化脫羧生成吡咯，再用對(duì)二甲氨基苯甲醛與吡咯反應(yīng)生成紅色復(fù)合物，根據(jù)可見(jiàn)光下該復(fù)合物的吸光度判斷溶液中的羥脯氨酸含量。交原蛋白中的羥脯氨酸含量穩(wěn)定，因此羥脯氨酸含量即可表示交原蛋白含量。該實(shí)驗(yàn)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求不高，但是操作步驟繁瑣，只能測(cè)定交原蛋白總量，并不能區(qū)分交原蛋白類型。

3.1.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法具有較高的靈敏性和精密度，已廣泛應(yīng)用于物質(zhì)的定量檢測(cè)。曹慧等[37]建立了高效液相色譜測(cè)定軟骨中CII的方法。采用ZORBAX 300SB C18色譜分離柱，流動(dòng)相A為體積分?jǐn)?shù)5%乙腈、0.05%三氟乙酸，流動(dòng)相B為體積分?jǐn)?shù)80%乙腈，線性梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm，柱溫35 ℃，通過(guò)精密度和回收率實(shí)驗(yàn)證明了該方法的準(zhǔn)確性。鄭婷等[38]采用分子排陰-高效液相色譜法測(cè)定UC-II含量，使用Sepax Nanofilm SEC-150色譜柱，流動(dòng)相為0.15 mol/L磷酸鉀鹽緩沖液，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，柱溫為25 ℃。結(jié)果表明，該方法線性關(guān)系、重復(fù)性、穩(wěn)定性良好。高效液相色譜法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、樣品使用量小，且易于自動(dòng)化，為UC-II的定量檢測(cè)提供了有效方法。

3.1.3 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法

近20 年免疫學(xué)檢測(cè)法因快速、有效、靈敏度高等特點(diǎn)受到越來(lái)越多的重視[39]。目前市面上可以購(gòu)買到的UC-II檢測(cè)試劑盒有兩種，一種是來(lái)自美國(guó)Chondrex公司生產(chǎn)的II型交原檢測(cè)試劑盒（#6018），另一種是中國(guó)江萊生物科技有限公司生產(chǎn)的UC-II ELISA檢測(cè)試劑盒。兩種試劑盒均采用酶聯(lián)免疫吸附法量化細(xì)胞或組織中的UC-II，可以準(zhǔn)確測(cè)定微克級(jí)交原蛋白含量，但價(jià)格相對(duì)較高。

3.2 UC-II的定性檢測(cè)

3.2.1 SDS-PAGE分析

SDS-PAGE分析是鑒別UC-II純度最常用的方法[40]，由于UC-II是由3 條相同的α-鏈構(gòu)成，所以在100～150 kDa附近有濃度較高的α1-鏈條帶，在200 kDa附近有一條濃度較低的β-鏈條帶，無(wú)其他雜蛋白帶，這是典型的UC-II SDS-PAGE圖譜。

3.2.2 氨基酸分析

目前普遍使用氨基酸分析儀來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)水解液中的氨基酸組成。UC-II氨基酸組成具有一定的特點(diǎn)[41-42]，其中甘氨酸含量最高，約占總氨基酸殘基數(shù)的1/3，脯氨酸和羥脯氨酸約占1/4，此外還含有較多的丙氨酸，少量的酪氨酸和組氨酸，不含色氨酸，這是典型的動(dòng)物CII的氨基酸組成（表3）。

表3 美國(guó)Sigma公司CII標(biāo)準(zhǔn)品的氨基酸組成[19]Table 3 Amino acid composition of type II collagen standard produced by Sigma Chemical Company, USA[19]

3.2.3 紫外吸收光譜分析

UC-II鏈中-CO-、-COOH、-NH-都是生色基團(tuán)，在200～240 nm波長(zhǎng)處的短波紫外吸收光區(qū)有特征吸收，此吸收峰與多肽鏈的氨基酸組成及螺旋程度有關(guān)，具有交原三螺旋結(jié)構(gòu)的典型紫外吸收?qǐng)D譜特點(diǎn)。研究表明，雞胸軟骨UC-II在220 nm波長(zhǎng)處出現(xiàn)最大吸收峰，魷魚(yú)軟骨UC-II在224.5 nm波長(zhǎng)處出現(xiàn)最大吸收峰[30]，中華鱘軟骨UC-II在229 nm波長(zhǎng)處出現(xiàn)最大吸收峰[31]，藍(lán)鯊軟骨UC-II在226 nm波長(zhǎng)處出現(xiàn)最大吸收峰[43]。

3.2.4 傅里葉變換紅外光譜分析

酰胺I、酰胺II與酰胺III帶和交原蛋白的分子序列及三螺旋結(jié)構(gòu)有關(guān)。根據(jù)Muyonga等[44]的報(bào)道，N-H伸縮振動(dòng)吸收峰出現(xiàn)在3 400～3 450 cm-1處，表明其N-H伸縮參與了分子中氫鍵的形成。1 651.3 cm-1附近為酰胺I帶的C＝O伸縮振動(dòng)峰，吸收峰最強(qiáng)，是蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)變化的敏感區(qū)域。1 557.29 cm-1處為酰胺II帶的吸收峰，由N-H彎曲振動(dòng)和C-N伸縮振動(dòng)產(chǎn)生，為β-折疊和無(wú)規(guī)卷曲疊加產(chǎn)生的吸收帶。1 200～1 400 cm-1的特征吸收帶是由N-H伸縮振動(dòng)和-COO-的對(duì)稱伸縮振動(dòng)引起的，這是其他蛋白質(zhì)所沒(méi)有的紅外光譜特征，這與交原蛋白中甘氨酸和特征氨基酸羥脯氨酸、脯氨酸含量高且形成獨(dú)特的（Gly-Pro-Hyp）n序列有關(guān)。1 200～1 360 cm-1譜帶歸屬酰胺III帶，由C-N伸縮和N-H彎曲引起。通過(guò)傅里葉變換紅外光譜可對(duì)UC-II進(jìn)行定性分析。

3.2.5 熱穩(wěn)定溫度分析

差示掃描量熱法是測(cè)定蛋白質(zhì)熱穩(wěn)定性常用的實(shí)驗(yàn)方法[45]。UC-II的變性溫度近似等于放熱曲線峰值所對(duì)應(yīng)的溫度[46]。研究表明，雞軟骨UC-II的變性溫度為44 ℃[19]，羊軟骨UC-II的變性溫度為39 ℃[26]，藍(lán)鯊UC-II的變性溫度為41 ℃[43]，中華鱘UC-II變性溫度為31.5 ℃[31]。

3.2.6 圓二色光譜分析

圓二色光譜是測(cè)定蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的常見(jiàn)方法，廣泛應(yīng)用于UC-II的結(jié)構(gòu)測(cè)定中。在198 nm波長(zhǎng)處附近出現(xiàn)的負(fù)吸收譜帶是UC-II分子構(gòu)象中無(wú)規(guī)卷曲結(jié)構(gòu)的典型特征；在220 nm波長(zhǎng)處附近出現(xiàn)的正吸收譜帶是左旋聚脯氨酸（P-II）構(gòu)型肽鏈圓二色光譜的典型特征，213 nm波長(zhǎng)處出現(xiàn)正負(fù)交叉點(diǎn)，這是交原蛋白三螺旋結(jié)構(gòu)的典型特征[47]。該方法可快速鑒定UC-II的三螺旋結(jié)構(gòu)是否被破壞，當(dāng)UC-II的三螺旋結(jié)構(gòu)被完全破壞時(shí)，正吸收峰完全消失，負(fù)吸收峰明顯紅移[48]。

4 UC-II的應(yīng)用現(xiàn)狀

UC-II是關(guān)節(jié)軟骨中不可或缺的交原蛋白成分，并且在軟骨細(xì)胞的發(fā)育和成熟過(guò)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。同時(shí)在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎的病理研究方面以及口服治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎方面已有臨床實(shí)驗(yàn)報(bào)道[49-56]。Gupta等[57]研究證明UC-II通過(guò)干擾局部免疫作用于關(guān)節(jié)炎癥，口服少量UC-II（10 mg）可抑制針對(duì)關(guān)節(jié)軟骨中CII的免疫反應(yīng)，這種機(jī)制被稱為口服耐受。UC-II的作用機(jī)理是口服后到達(dá)小腸Peyer’s淋巴結(jié)，經(jīng)腸道內(nèi)抗原呈遞細(xì)胞（antigen-presenting cells，APC）在細(xì)胞內(nèi)將外源性抗原UC-II進(jìn)行加工、處理，并形成主要組織相容性復(fù)合體-抗原肽復(fù)合體，然后激活調(diào)節(jié)性T細(xì)胞產(chǎn)生抗炎癥因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）、白細(xì)胞介素（interleukin，IL）4、IL-10，下調(diào)T細(xì)胞攻擊關(guān)節(jié)內(nèi)交原活性，從而減輕疼痛和炎癥[58]（圖4）。UC-II的作用在不同的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中均已得到證實(shí)。研究表明，UC-II可顯著減輕犬類在骨關(guān)節(jié)炎期間的炎癥反應(yīng)和疼痛程度[59-62]。Gupta等[63]以馬為實(shí)驗(yàn)對(duì)象評(píng)估UC-II對(duì)關(guān)節(jié)炎的作用，相比對(duì)照組，每天接受80、120、160 mL UC-II的馬各項(xiàng)指標(biāo)均表明關(guān)節(jié)炎得到了明顯改善。雖然貓對(duì)非甾體抗炎藥的敏感性與狗相比是有限的，但Blair等[64]的研究表明，一種包含10 mg UC-II的新型補(bǔ)充劑可以通過(guò)口服耐受減輕貓骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的癥狀。同時(shí)關(guān)于UC-II的安全性也備受關(guān)注，Marone等[65]通過(guò)長(zhǎng)達(dá)90 d的家兔急性經(jīng)口毒性、急性皮膚毒性、原發(fā)性皮膚刺激性和原發(fā)性眼部刺激性毒性等多種毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)評(píng)估UC-II的廣譜安全性，尸檢后未觀察到體質(zhì)量變化或不良反應(yīng)。葉春婷等[66]通過(guò)小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)、新西蘭白兔刺激性實(shí)驗(yàn)、豚鼠過(guò)敏性實(shí)驗(yàn)及白兔溶血性實(shí)驗(yàn)等再次證實(shí)UC-II無(wú)毒副作用，并具有良好的細(xì)胞相容性，對(duì)細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用。

圖4 UC-II在骨關(guān)節(jié)中作用機(jī)制的模擬示意圖[14]Fig.4 Schematic diagram of the proposed mode of action of type II collagen (UC-II) in joints[14]

美國(guó)Interhealth公司生產(chǎn)的UC-II經(jīng)過(guò)美國(guó)食品藥物管理局售前通知的批準(zhǔn)，獲得GRAS（Generally Recognized as Safe）認(rèn)證[67]，并且在鈣爾奇、Move Free等產(chǎn)品中（如鈣爾奇UC2速效骨交原、Move Free舒鈣骨交原）得到應(yīng)用。在日本，UC-II作為具有關(guān)節(jié)支撐作用的功能性食品已得到了批準(zhǔn)[68]，日本Bell Corporation公司推出UC-II+交囊，包含UC-II、甲基硫?；淄椤被咸烟堑榷喾N成分，成為解決腰痛、關(guān)節(jié)痛的速效配方。在中國(guó)，2016年國(guó)家衛(wèi)計(jì)委批準(zhǔn)UC-II（又更名為含UC-II軟骨粉）可作為普通食品生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)。該產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)按照企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，衛(wèi)生安全指標(biāo)按照GB 2762—2017《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中污染物限量》、GB 29921—2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中致病菌限量》執(zhí)行。國(guó)內(nèi)市售的CII肽一般三股螺旋分子結(jié)構(gòu)已被破壞。2017年北京盛美諾生物技術(shù)有限公司獲得生產(chǎn)許可，已能夠規(guī)?；a(chǎn)含UC-II軟骨粉[69]。

5 結(jié) 語(yǔ)

UC-II因其特定的致密纖維結(jié)構(gòu)而不易提取，研究進(jìn)展緩慢，目前大多數(shù)研究?jī)H適用于實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模的制備，存在處理量小、生產(chǎn)工藝繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)、實(shí)驗(yàn)試劑成本高等問(wèn)題，因此開(kāi)發(fā)適合工廠大量生產(chǎn)、純度高、綠色環(huán)保且成本低廉的提取工藝，在不破壞交原蛋白三螺旋結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，將天然組織轉(zhuǎn)化為純度較高的商品是UC-II研發(fā)的創(chuàng)新方向。UC-II在國(guó)外已有較大的市場(chǎng)，但在國(guó)內(nèi)對(duì)其認(rèn)知還不夠深入，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)基本處于起步階段，雖然已有一些預(yù)防和治療關(guān)節(jié)疾病的UC-II保健品，配方基本是UC-II、氨糖和硫酸軟骨素等，但普遍因口感不好而制作成交囊或片劑吞服食用，其他類型食品鮮見(jiàn)報(bào)道；因此，拓寬UC-II在食品領(lǐng)域的應(yīng)用范圍也是未來(lái)的一個(gè)發(fā)展方向。UC-II作為治療關(guān)節(jié)炎的重要食品性原料，必將有廣闊的發(fā)展前景。