戴 翔 李 冰 云洪巖 張 雄 陳鳳蘭 裴德恩

廣東省佛山市禪城區(qū)中心醫(yī)院病理科，廣東佛山 528031

乳腺癌是臨床常見(jiàn)的一類女性惡性腫瘤，具有高度異質(zhì)性，三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）是指孕激素受體、雌激素受體與人表皮生長(zhǎng)因子受體均呈陰性表達(dá)的疾病，占所有乳腺癌類型的10%～20%[1-2]。TNBC 多發(fā)于絕經(jīng)前女性，具有強(qiáng)侵襲性、轉(zhuǎn)移性，常用靶向藥物、抑制雌孕激素的內(nèi)分泌治療均難以起到較好的效果，而全身化療雖然能起到一定效果，但治療過(guò)程中容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，因此TNBC 患者預(yù)后通常較差，研究其分子生物學(xué)特征對(duì)于其治療方案的選擇、預(yù)后的改善具有重要意義[3-5]。本研究回顧性分析TNBC 患者的臨床病理資料，分析表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體（vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR）的表達(dá)情況，并分析其與TNBC 臨床病理特征的關(guān)系，有助于評(píng)估TNBC 患者的病情及預(yù)后情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性選取2018年3月—2020年3月在佛山市禪城區(qū)中心醫(yī)院行手術(shù)治療的200 例乳腺癌患者作為研究對(duì)象，所有患者均已經(jīng)孕激素受體、雌激素受體與人表皮生長(zhǎng)因子受體檢查，其中TNBC 患者100例，非TNBC 患者100 例，患者均為女性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)手術(shù)治療并經(jīng)病理確診為乳腺癌[6]；②術(shù)前均未進(jìn)行放化療及免疫治療；③均留存有手術(shù)切除腫瘤組織的石蠟標(biāo)本；④臨床病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位原發(fā)腫瘤者；②患有心、肝、腎等重要器質(zhì)性疾病者。本研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。TNBC 組中，年齡32～78 歲，平均（58.04±19.95）歲；病程3～5年，平均（3.26±1.12）年。非TNBC 組中，年齡31～75 歲，平均（57.75±16.34）歲；病程3～5年，平均（2.94±1.36）年。兩組患者的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

收集所有患者的臨床病理資料，包括年齡（＜50歲和≥50 歲）、絕經(jīng)狀況（是否絕經(jīng)）、腫物直徑（≤2 cm和＞2 cm）、臨床分期（Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅵ期）、病理分型（浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌和非浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌）、組織學(xué)分級(jí)（Ⅰ～Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）等，收集術(shù)后病理組織檢測(cè)EGFR 與VEGFR 表達(dá)情況，分析其表達(dá)差異及其與TNBC 臨床病理特征之間的關(guān)系。

1.3 檢測(cè)方法

采用免疫組化法檢測(cè)EGFR 與VEGFR 在TNBC患者中的表達(dá)，試劑盒購(gòu)自丹麥Dako 公司，按照試劑盒說(shuō)明書操作。免疫組化法步驟：①對(duì)所有患者乳腺癌組織分別進(jìn)行標(biāo)示、編號(hào)；②將乳腺癌組織蠟樣塊進(jìn)行連續(xù)切片處理，切片厚度4 μm；③應(yīng)用二甲苯浸泡3 次進(jìn)行脫蠟處理，浸泡完畢后，再分別用95%、85%和65%的酒精沖洗二甲苯；④應(yīng)用高壓鍋緩慢加熱加壓，修復(fù)組織抗原，冷卻后，應(yīng)用PBS 溶液沖洗3 次，每次3 min；⑤應(yīng)用3%過(guò)氧化氫溶液滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶并洗脫后，再于切片上加入B7-H6分子兔抗人單克隆抗體，洗脫，進(jìn)行DAB 染色；⑥蒸餾水洗脫后，應(yīng)用蘇木素進(jìn)行復(fù)染；⑦無(wú)水酒精脫水，晾干后封片處理，鏡檢。EGFR 以細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，VEGFR 以細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，每張切片由兩名高年資病理科醫(yī)生采用雙盲法觀察，按陽(yáng)性細(xì)胞占比劃分蛋白表達(dá)強(qiáng)度，0%～10%為“-”，11%～25%為“+”，26%～50%為“++”，＞50%為“+++”[7]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)進(jìn)行關(guān)系分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TNBC 患者的臨床病理情況

年齡：＜50 歲69 例（69.00%），≥50 歲31 例（31.00%）；絕經(jīng)狀況：是38 例（38.00%），否62 例（62.00%）；腫物直徑：≤2 cm 37 例（37.00%），＞2 cm 63 例（63.00%）；臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期58 例（58.00%），Ⅲ～Ⅵ期42 例（42.00%）；病理分型：浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌71 例（71.00%），非浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌29 例（29.00%）；組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ～Ⅱ級(jí)43 例（43.00%），Ⅲ級(jí)57 例（57.00%）；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：有64 例（64.00%），無(wú)36 例（36.00%）。

2.2 TNBC 組與非TNBC 組患者EGFR 及VEGFR的表達(dá)情況

TNBC 組患者EGFR、VEGFR 陽(yáng)性表達(dá)率均高于非TNBC 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。TNBC患者中，EGFR 免疫組化染色結(jié)果中發(fā)現(xiàn)EGFR 陽(yáng)性細(xì)胞的細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒（圖1，封四），VEGFR陽(yáng)性細(xì)胞以細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒。

表1 TNBC 組與非TNBC 組患者EGFR 及VEGFR 陽(yáng)性表達(dá)率的比較[n（%）]

圖1 TNBC患者中EGFR免疫組化染色結(jié)果（100×）

2.3 TNBC 患者EGFR 及VEGFR 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

TNBC 患者EGFR 的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P＜0.05），與年齡、絕經(jīng)狀況、腫物直徑、臨床分期、病理分型、組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)（P＞0.05）；VEGFR 的表達(dá)與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均相關(guān)（P＜0.05），與年齡、絕經(jīng)狀況、腫物直徑、病理分型無(wú)關(guān)（P＞0.05）（表2）。

表2 TNBC 患者EGFR 及VEGFR 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[n（%）]

2.4 TNBC 患者EGFR 與VEGFR 表達(dá)的關(guān)系

Spearman相關(guān)性分析顯示：TNBC 患者EGFR與VEGFR 的表達(dá)之間存在正相關(guān)關(guān)系（r=0.306，P＜0.05）。

3 討論

近年來(lái)關(guān)于TNBC 的分子治療靶點(diǎn)成為了研究熱點(diǎn)。EGFR、VEGFR 均為近年被廣泛研究的腫瘤相關(guān)調(diào)控分子。EGFR 是EGFR 家族的成員之一，廣泛分布在上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等細(xì)胞表面，可以激活下游的信號(hào)傳導(dǎo)通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖分化與腫瘤形成[8]。VEGFR 是一種典型的跨膜蛋白，可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖與遷移，調(diào)控血管、淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的新生，對(duì)于胚胎發(fā)育、腫瘤細(xì)胞增殖遷移起著重要調(diào)節(jié)作用[9]。多項(xiàng)研究提示，EGFR、VEGFR 在TNBC 進(jìn)展中也發(fā)揮了一定作用[10-11]。

本研究分別對(duì)100 例TNBC 與100 例非TNBC患者進(jìn)行EGFR 與VEGFR 蛋白表達(dá)檢測(cè)，結(jié)果顯示，TNBC 較非TNBC 患者表現(xiàn)出EGFR 與VEGFR 的高表達(dá)。既往研究[12-13]表明，TNBC 癌細(xì)胞過(guò)表達(dá)EGFR，為51.0%～53.7%，而非TNBC 中EGFR 表達(dá)為10%～31%。本研究中TNBC 患者EGFR 陽(yáng)性表達(dá)率為52.00%，而非TNBC 患者為21.00%，與上述研究的表達(dá)趨勢(shì)基本一致。有研究指出，VEGFR 在TNBC 中的表達(dá)率為80%，而在非TNBC 患者中為51%[7]。而本研究中TNBC 患者VEGFR 陽(yáng)性表達(dá)率為71.00%，非TNBC 中VEGFR 陽(yáng)性率表達(dá)為56.00%，基本與該研究報(bào)道接近。

本研究進(jìn)一步分析TNBC 患者EGFR 與VEGFR表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示，TNBC 患者EGFR 的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而VEGFR 的表達(dá)與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均相關(guān)（P＜0.05）。既往研究表明，EGFR 在癌癥進(jìn)展中發(fā)揮促進(jìn)血管生成、促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增強(qiáng)癌細(xì)胞黏附功能與抑制凋亡等作用[14]。其在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中呈現(xiàn)更高表達(dá)，表明其與癌細(xì)胞的遷移存在密切聯(lián)系。居紅格等[15]的研究通過(guò)比較TNBC 和非TNBC 各30 例患者的臨床病理資料，發(fā)現(xiàn)EGFR 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移存在顯著的相關(guān)性。胡波等[16]采用免疫組化檢測(cè)了57 例浸潤(rùn)性導(dǎo)管腺癌患者中相關(guān)分子表達(dá)，發(fā)現(xiàn)EGFR 在TNBC 患者中表達(dá)明顯上調(diào)，與這類型腫瘤的高侵襲性一致。VEGFR 廣泛表達(dá)于早期胚胎血管內(nèi)皮細(xì)胞上，但在胚胎發(fā)育后期與正常成體中僅特異性地在淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，此外也少量表達(dá)于正常乳腺組織的毛細(xì)血管、內(nèi)分泌器官中，在同其配體VEGF-C 與VEGF-D 特異性結(jié)合后，能促進(jìn)癌細(xì)胞的淋巴管遷移[17-18]。本研究結(jié)果還顯示，TNBC 患者EGFR與VEGFR 的表達(dá)之間存在正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05），表明其表達(dá)具有協(xié)同性，共同在TNBC 的進(jìn)展中發(fā)揮調(diào)控作用。EGFR 在TNBC 中的報(bào)道較多，而目前VEGFR 的相關(guān)報(bào)道多見(jiàn)于肺腺癌中，在乳腺癌中仍較少見(jiàn)[19-20]。

綜上所述，TNBC 患者EGFR 及VEGFR 存在高表達(dá)，且其表達(dá)與病理特征之間存在相關(guān)，對(duì)于評(píng)價(jià)TNBC 的病情及預(yù)后有一定的意義。由于本研究時(shí)間較短，未對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行隨訪，因此EGFR、VEGFR的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系還未探討，日后將可能在臨床實(shí)驗(yàn)中增加隨訪內(nèi)容進(jìn)行深入探討。