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        外周血特異性腫瘤標(biāo)志物mRNA表達(dá)在非小細(xì)胞肺癌微轉(zhuǎn)移中的意義

        2021-09-26 10:49:26農(nóng)雪萍
        中國當(dāng)代醫(yī)藥 2021年23期
        關(guān)鍵詞:外周血標(biāo)志物分化

        農(nóng)雪萍

        江西省胸科醫(yī)院病理科,江西南昌 330006

        肺癌是臨床常見的惡性腫瘤,具有較高的病發(fā)率與病死率,發(fā)病機(jī)制主要與患者吸煙、工作環(huán)境及遺傳等因素有關(guān),常表現(xiàn)為胸部疼痛、痰血、咳嗽、低熱與呼吸困難等,而非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)約占80%,術(shù)后5年生存率較低,即使是Ⅰ期患者接受腫瘤完全切除術(shù)治療后,仍有部分患者會(huì)在術(shù)后復(fù)發(fā),而微轉(zhuǎn)移是造成患者易反復(fù)與轉(zhuǎn)移的預(yù)后指征,但該情況很難用臨床常規(guī)病理學(xué)檢測(cè)確診,常隱匿在原病灶之外的組織中[1]。逆轉(zhuǎn)錄聚合鏈反應(yīng)(reverse transcription polymer chain reaction,RTPCR)技術(shù)對(duì)腫瘤細(xì)胞有較高的靈敏度,可在10 個(gè)單個(gè)核細(xì)胞中準(zhǔn)確檢測(cè)出腫瘤細(xì)胞,是臨床實(shí)體瘤完整性中微轉(zhuǎn)移的常用措施[2-3]。本研究以RT-PCR 技術(shù)檢測(cè)外周血細(xì)胞角蛋白(cytokeratin,CK19)、肺特異性X基因(lung-specific X gene,LUNX)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)mRNA 表達(dá)情況,探究其對(duì)NSCLC 患者早期轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選取江西省胸科醫(yī)院病理科2019年1月—2020年11月收治的52 例NSCLC 患者,術(shù)前均進(jìn)行抗腫瘤治療,排除患有其他惡性腫瘤或其他腫瘤肺部轉(zhuǎn)移者,均經(jīng)臨床病理學(xué)組織確診。其中男28 例,女24例;年齡32~75 歲,平均(52.31±3.22)歲;經(jīng)胸片、胸部CT掃描、B 超等檢查進(jìn)行臨床分期判定:Ⅰ期17 例,Ⅱ期21 例,Ⅲ期14 例。以同時(shí)期入院體檢的30 例正常體檢者作為參照組,其中男16 例,女14 例;年齡30~68歲,平均(52.66±3.56)歲。兩組的一般資料比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。參與者均知情并簽署同意書,且本研究已經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

        1.2 方法

        于治療前抽取肺癌患者與正常體檢者的靜脈血5 mL,以淋巴細(xì)胞分離液(天津?yàn)笊镏破房萍加邢挢?zé)任公司)將有核細(xì)胞分離,清洗后,離心(離心半徑為10 cm,離心轉(zhuǎn)速為3000 r/min,離心時(shí)間為15 min)取上清液;保存在1.5 mL 無菌Ep 管中,然后加入1000 μL Trizol(Invitrogen 公司)消化,經(jīng)氯仿抽提,異丙醇沉淀總RNA,經(jīng)75%乙醇漂洗,氣干后加入15 μL 無菌DEPC 水將其溶解,行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(嚴(yán)格遵循說明書操作)。

        1.3 觀察指標(biāo)

        記錄兩組外周血CK19、LUNX、CEA mRNA 表達(dá)陽性率,具體測(cè)量方法:將10 μL PCR 產(chǎn)物與β-actin PCR 產(chǎn)物、1.7 μL 澳酚上樣緩沖液混勻,將其加入1.5%瓊脂糖凝膠上,以100 bp Ladder Marker 加樣,然后將其作為分子量標(biāo)志;保持恒壓80 V,電泳40 min,行EB 染色,于UVB 凝膠成像系統(tǒng)下攝片,測(cè)量各條帶熒光強(qiáng)度。并分析細(xì)胞分化程度、TNM 分期與NSCLC患者各項(xiàng)外周血腫瘤標(biāo)志物mRNA 表達(dá)的關(guān)系。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn),以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)數(shù)資料采用率表示,多組間率的整體比較采用χ2檢驗(yàn),多組間率的兩兩比較采用Bonferroni 方法矯正,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=原α水平/比較次數(shù),即0.05/3=0.0167。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組外周血CK19、LUNX、CEA mRNA 表達(dá)陽性率的比較

        NSCLC 組外周血CK19、LUNX、CEA mRNA 表達(dá)陽性率均高于參照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

        表1 兩組外周血CK19、LUNX、CEA mRNA 表達(dá)陽性率的比較[n(%)]

        2.2 細(xì)胞分化程度與NSCLC 患者各項(xiàng)外周血腫瘤標(biāo)志物mRNA 表達(dá)的關(guān)系

        三種分化程度的CK19 mRNA 陽性率、CEAmRNA 陽性率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);高分化程度的LUNX mRNA 陽性率低于中、低分化程度,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0167);而中、低分化程度的LUNX mRNA 陽性率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.0167)(表2)。

        表2 細(xì)胞分化程度與NSCLC 患者各項(xiàng)外周血腫瘤標(biāo)志物mRNA表達(dá)的關(guān)系[n(%)]

        2.3 TNM 分期與NSCLC 患者各項(xiàng)外周血腫瘤標(biāo)志物mRNA 表達(dá)的關(guān)系

        三種TNM 分期的CK19 mRNA 陽性率、CEA mRNA 陽性率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);Ⅲ期的LUNX mRNA 陽性率高于Ⅰ期、Ⅱ期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0167);而Ⅰ期、Ⅱ期的LUNX mRNA 陽性率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.0167)(表3)。

        表3 TNM 分期與NSCLC 患者各項(xiàng)外周血腫瘤標(biāo)志物mRNA 表達(dá)的關(guān)系[n(%)]

        3 討論

        肺癌是目前臨床常見的惡性腫瘤,具有較高的發(fā)病率,且大部分患者為NSCLC。近年來隨著臨床醫(yī)療技術(shù)與腫瘤疾病的深入研究,于早期與中期實(shí)施肺癌手術(shù)切除,可有效改善患者病情,且成功率較高,但患者5年的生存率總徘徊在20%左右[4-5]。有數(shù)據(jù)表明,NSCLC 患者預(yù)后的改善,與其腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系[6-7]。而腫瘤轉(zhuǎn)移需多個(gè)步驟,主要是經(jīng)血液循環(huán)與淋巴循環(huán)進(jìn)行轉(zhuǎn)移,屬于惡性腫瘤的發(fā)展過程,可播散并存在患者的血液、淋巴、骨髓與各組織器官中,且尚未形成的轉(zhuǎn)移性結(jié)節(jié)無明顯臨床特征,經(jīng)常規(guī)的病理學(xué)與影像學(xué)等方法檢測(cè)很難發(fā)現(xiàn)[8-9]。目前臨床針對(duì)肺癌轉(zhuǎn)移情況主要以影像學(xué)檢查與病理學(xué)檢查為主,但效果并不理想。因癌細(xì)胞可能是患者術(shù)后腫瘤全身轉(zhuǎn)移的根源,其外周血中的癌細(xì)胞則預(yù)示腫瘤具有轉(zhuǎn)移傾向,是表明患者腫瘤轉(zhuǎn)移與復(fù)發(fā)的重要表現(xiàn)[10-11]。目前臨床實(shí)施的外周血特異性腫瘤標(biāo)志物mRNA 表達(dá)檢測(cè)NSCIC 微轉(zhuǎn)移情況,具有較高的敏感性與特異性,其標(biāo)志物主要為CK19、CEA、LUNX 等[12-13]。

        本研究以52 例NSCLC 患者為研究對(duì)象,以上述外周血特異性腫瘤標(biāo)志物mRNA 表達(dá)為指標(biāo)實(shí)施檢測(cè),其中NSCLC 患者CK19、LUNX、CEA mRNA 的陽性率分別為38.46%、57.69%、44.23%,與參照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示若在患者外周血檢測(cè)到CK19、LUNX、CEA mRNA 表達(dá),則表明患者體內(nèi)有完整的癌細(xì)胞存活。同時(shí)對(duì)不同分化程度的NSCLC 患者腫瘤標(biāo)志物mRNA 表達(dá)陽性率進(jìn)行比較,結(jié)果顯示,LUNX mRNA 陽性率隨分化程度升高而降低,高分化程度患者低于中、低分化患者(P<0.0167),而三種分化程度的CK19 mRNA 陽性率、CEAmRNA 陽性率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),表明LUNX mRNA 診斷效能優(yōu)于CK19、CEA mRNA。對(duì)不同分期的NSCLC 患者腫瘤標(biāo)志物mRNA 陽性率進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)LUNX mRNA 陽性表達(dá)率隨著臨床分期的加重而增高,Ⅲ期的LUNX mRNA 陽性率高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.0167),表明NSCLC 患者的分期愈晚,肺癌細(xì)胞脫落至血循環(huán)的危險(xiǎn)性愈大。本研究結(jié)果證實(shí),以LUNX mRNA 表達(dá)作為NSCLC 患者的微轉(zhuǎn)移提示指標(biāo),可發(fā)揮顯著的敏感性與特異性。而肺癌患者外周血中LUNX mRNA 表達(dá)可能來自轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞,可準(zhǔn)確提示腫瘤的轉(zhuǎn)移傾向,解釋了臨床部分患者早期無任何轉(zhuǎn)移征象腫瘤,經(jīng)手術(shù)完整切除后仍會(huì)在短時(shí)間內(nèi)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。故LUNX mRNA 可作為NSCLC微轉(zhuǎn)移檢測(cè)的分子標(biāo)志物[14-15]。雖然微轉(zhuǎn)移是形成遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的必要條件,但有少量的腫瘤細(xì)胞檢出,并不代表最終會(huì)形成顯性轉(zhuǎn)移,其中腫瘤細(xì)胞自身生物學(xué)特性、局部微循環(huán)與機(jī)體免疫等情況均是重要的影響原因,若檢測(cè)出腫瘤細(xì)胞,則預(yù)示著患者有發(fā)生轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)性。隨著臨床生命科學(xué)研究的不斷深入,分子生物學(xué)技術(shù)日益完善,再加上其他新興技術(shù)的推廣,必將會(huì)為腫瘤的深入研究提供可靠條件,因此在日后需深入探究NSCLC 外周血特異性腫瘤標(biāo)志物mRNA表達(dá)與微轉(zhuǎn)移的關(guān)系,對(duì)患者病程進(jìn)展、預(yù)后評(píng)估與臨床指導(dǎo)治療有重要意義。

        綜上所述,肺癌患者微轉(zhuǎn)移的臨床意義需更深層次的論證,后期需對(duì)肺癌患者進(jìn)行密切隨訪,從而深入明確mRNA 陽性表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移、預(yù)后的關(guān)系。當(dāng)然臨床一次的檢測(cè)結(jié)果為陰性,并不代表患者無腫瘤微轉(zhuǎn)移情況,因腫瘤細(xì)胞可間斷的脫落進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng),且在短時(shí)間內(nèi)會(huì)被機(jī)體的免疫系統(tǒng)破壞,故針對(duì)患者腫瘤細(xì)胞微轉(zhuǎn)移情況仍需多次反復(fù)檢測(cè),從而提高診斷的準(zhǔn)確性與特異性。

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