林寧寧,張路方,楊正生,楊會君,宋鐵軍,王麗兵

(秦皇島市第一醫(yī)院 皮膚科,河北 秦皇島066000)

皮膚淺部真菌疾病的重要輔助檢查手段為真菌直接鏡檢，其中常見的真菌鏡檢方法為濃度為10%的KOH濕片法[1]，雖然該診斷方法流程簡易，然而其診斷準(zhǔn)確率低，尤其是對甲癬的臨床檢出率更低，容易引起誤診或者漏診[2-3]。近年來，真菌熒光染色法被廣泛地用于皮膚淺部真菌檢測之中。本研究通過對比10%的KOH濕片法與真菌熒光染色法檢測皮膚淺部真菌的效果，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2017年7月至2020年7月皮膚科就診的皮膚淺部真菌感染的114例患者作為觀察組，其中男63例，女51例；年齡最小4歲，最大71歲，平均年齡(35.35±6.35)歲；類型：手足癬、體股癬、花斑糠疹及甲癬例數(shù)分別為42例、29例、20例及23例，所有標(biāo)本一式兩份。另外選擇同期接受體檢的健康者108例作為對照組，其中男59例、女49例；年齡最小6歲，最大69歲，平均(37.05±6.42)歲。

1.2 方法

1.2.1試劑及相關(guān)器材 (1)KOH溶液：選自于本院檢驗科配制的濃度為10%的KOH溶液；(2)熒光染液：主要包括KOH、伊文思藍(lán)、熒光增白劑以及純水等成分，均購自于北京索萊寶科技有限公司；(3)顯微鏡：選擇上海寰熙醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的XT-X-4B型顯微鏡(批準(zhǔn)文號：蘇食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2013第2221196號)，增加熒光模塊。

1.2.2取材 使用蘸有濃度為75%乙醇的無菌棉簽浸潤及消毒皮損處，皮屑標(biāo)本選擇活動性皮損邊緣位置的皮屑；甲屑標(biāo)本選擇增厚混黃伴鱗屑、空變病甲碎屑；毛發(fā)選擇皮損內(nèi)病發(fā)與毛根鱗屑。上述標(biāo)本均一式兩份，分別實施KOH濕片法與熒光染色法進行檢測。

1.2.3KOH濕片法 向標(biāo)本上滴加一定量的KOH溶液，并將蓋玻片蓋上，使用酒精燈進行加熱，于顯微鏡(×200)下對視野進行觀察。

1.2.4熒光染色法 于標(biāo)本上滴加一定量的熒光染色液，將蓋玻片蓋上，染色3-5 s，將多余熒光染色溶液吸干凈，于顯微鏡(×200)熒光模塊下進行觀察。

1.3 相關(guān)指標(biāo)檢測方法首先抽取2組入選對象清晨空腹?fàn)顟B(tài)下肘靜脈血5.0 mL，3 000 rpm轉(zhuǎn)速下離心5 min，分離血清，置于-80℃冰箱中，待測。采用酶聯(lián)免疫吸附法對血清白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)進行測定，采用流式細(xì)胞學(xué)檢測方法對T淋巴細(xì)胞亞群相關(guān)指標(biāo)(CD3+、CD4+、CD8+)進行測定。

2 結(jié)果

2.1 2種檢測方法檢測效果對比2種檢測方法檢測效果分別見圖1、2。KOH濕片法背景昏暗且雜亂，反差較小，真菌結(jié)構(gòu)與雜質(zhì)之間無法清晰鑒別；熒光染色法鏡下能夠清晰地觀察到真菌輪廓，呈亮藍(lán)色，菌絲也可明顯觀察到，菌絲與周圍背景之間容易辨別。

圖1 熒光染色法鏡下真菌形態(tài)(×200) 圖2 10%KOH 染色法鏡下真菌形態(tài)(×200)

2.2 2種方法檢測結(jié)果對比熒光染色法對手足癬、體股癬、花斑糠疹、甲癬檢出率及總檢出率分別為80.95%、96.55%、85.00%、91.30%及87.72%，均顯著高于KOH濕片法(分別為45.24%、75.86%、45.00%、60.87%及56.14%)(P均<0.05)，見表1。

表1 2種方法檢測結(jié)果比較[n(%)]

2.3 對照組與觀察組外周血T淋巴細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)水平對比觀察組外周血T淋巴細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)水平均顯著低于對照組(P均<0.05)，見表2。

表2 兩組外周血T淋巴細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)水平比較

2.4 對照組與觀察組血清相關(guān)炎性因子水平對比觀察組血清IL-2水平顯著低于對照組(P均<0.05)，觀察組血清IL-4及IL-10水平顯著高于對照組(P均<0.05)，見表3。

表3 兩組血清相關(guān)炎性因子水平比較

3 討論

皮膚淺部真菌感染性皮膚病是臨床上較常見的一種皮膚病，目前常見的真菌檢測方法包括：熒光染色法與KOH濕片法等[4-5]。本研究結(jié)果顯示熒光染色法對手足癬、體股癬、花斑糠疹、甲癬檢出率及總檢出率均分別顯著高于KOH濕片法(P均<0.05)。杜鵬等[6]研究結(jié)果顯示：熒光染色法對真菌陽性檢測率為90.6%，顯著高于10%KOH濕片法(67.4%)(P<0.05)；徐艷等[7]研究結(jié)果顯示：熒光染色法對真菌陽性檢測率為80.95%，顯著高于10%KOH濕片法(55.23%)(P<0.05)。此外，在實際檢測過程中，發(fā)現(xiàn)熒光染色法還能夠?qū)ιw玻片及標(biāo)本中可能存在微量的植物纖維素進行標(biāo)記，并與真菌進行有效地區(qū)分及鑒別[8]。

細(xì)胞免疫通過對T淋巴細(xì)胞亞群各相關(guān)指標(biāo)水平進行調(diào)節(jié)，促使機體保持穩(wěn)定的免疫環(huán)境，本研究結(jié)果顯示觀察組外周血T淋巴細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)(CD3+、CD4+、CD8+)水平均顯著低于對照組(P均<0.05)，表明當(dāng)機體發(fā)生皮膚淺部真菌感染時，患者免疫水平顯著下降。有研究顯示[9-10]，機體細(xì)胞因子與T淋巴細(xì)胞功能之間存在緊密的關(guān)聯(lián)性，當(dāng)機體受到真菌等感染時，Th1/Th2淋巴細(xì)胞免疫會發(fā)生失衡，進而使促進免疫殺傷性細(xì)胞因子和免疫保護作用的細(xì)胞因子發(fā)生變化，本研究結(jié)果顯示IL-2表達(dá)水平降低，而IL-4及IL-10表達(dá)水平升高，提示當(dāng)機體發(fā)生淺部皮膚真菌感染時，Th1/Th2淋巴細(xì)胞免疫失衡。

綜上所述，與10%KOH濕片法相比，真菌熒光染色法在皮膚淺部真菌檢測中的應(yīng)用效果更佳；且皮膚淺部真菌感染與T淋巴細(xì)胞及相關(guān)炎性因子表達(dá)之間存在緊密的關(guān)系。