王棋棋

（中紡檢測（福建）有限公司，福建泉州 362200）

食品中防腐劑和甜味劑的存在，對食品品質、口味有直接的影響，也是食品安全管理至關重要的內容。測定食品中防腐劑和甜味劑的含量及類型，是食品安全管理的依據(jù)。反相高效液相色譜法測定食品中防腐劑和甜味劑，該方法具有準確性好、樣品前處理簡單、精密度高的優(yōu)良特點。根據(jù)食品中防腐劑和甜味劑的測定要求，探究反相高效液相色譜法的應用非常必要。

1 材料與方法

1.1 試劑與設備

在測定前，準備食品添加劑標準品，主要為糖精鈉、阿斯巴甜、山梨酸、安賽蜜等。同時準備92 g/L亞鐵氰化鉀溶液、183 g/L乙酸鋅溶液、0.02 mol/L的乙酸銨溶液[1]。

日本島津帶He脫氣裝置的高效液相色譜儀；國產(chǎn)電動離心沉淀劑；帶二極管陣列的檢測器；感量為0.001 g的電子分析天平；轉速大于8 000 r/min的離心機；渦旋振蕩器；超聲波清洗儀[2]。

1.2 實驗方法

1.2.1 測定條件

流動相溶劑A為0.02 mol乙酸銨溶液，由超聲后二水乙酸220 g與500 mL水加入30.0 mL冰乙酸后定容至1 000 mL配制；流動相溶劑B為甲醇，色譜純[3]。梯度洗脫程序為：5.0%甲醇，1.0～0.8 mL/min，0～5 min；設定初始濃度為5.0%溶劑B和95.0%溶劑B，糖精鈉、脫氫乙酸出峰時間相同，色譜峰單獨積分計算難度大，可以調整為10%溶劑B+90%溶劑A，流速為0.8～1.0 mL/min，洗脫時間為5～20 min。由于阿斯巴甜在5.0%溶劑B和95.0%溶劑B洗脫時，出峰時間延后，影響了分析效率，在20.0 min后，可以調整流動相比例為38%溶劑B+62%溶劑A，流動速度為1.0 mL/min，洗脫時間為20～40 min。山梨酸在洗脫比例為5.0%溶劑B和95.0%溶劑B，且流動速度為1.0 mL/min時，與樣品中其他干擾雜峰分離，可以在洗脫時調整洗脫時間范圍為40～48 min。

設定在230 nm波長下進行安賽蜜、山梨酸測定，在210nm波長下進行阿斯巴甜、糖精鈉測定，在293 nm波長下進行脫氫乙酸測定。同時設定檢測器柱溫為37.0～39.0 ℃，進樣量為10 μL，靈敏度為 0.08 aufs[4]。

1.2.2 樣品處理

對于醬油等液體樣品，直接取樣并加水稀釋20倍，以50%氨水調節(jié)酸堿值至中性偏弱堿性。調節(jié)酸堿值后進行超速離心，取上清液備用。

含二氧化碳、酒精的軟飲料，需要取10.00 g加熱后去除二氧化碳、酒精，放入50 mL比色管內用水定容并經(jīng)濾膜過濾，濾膜孔徑為0.45 μm。

對于醬菜、果脯等固體樣品，切碎后混合均勻加入8.0 mL水，超聲30 min時后用水定容到10.0 mL，定容后經(jīng)0.45 μm濾膜過濾處理。餅干等基質成分復雜的樣品，需要在利用石油醚脫脂處理的基礎上，粉碎并均勻混合，加入等量的2份水以及1份200 g/L硫酸鋅溶液和20.0 g/L氫氧化鈉溶液，超聲0.5 h后，用水定容到25.0 mL經(jīng)0.45 μm濾膜過濾待測定[5]。

酸奶等固液混合樣，需將其混合均勻后加入100 g/L硫酸銨溶液以及等量的兩份水，超聲30 min后，用水定容到10.0 mL經(jīng)0.45 μm濾膜過濾處理備用。

2 結果與分析

2.1 定量測定結果

依據(jù)前述測定條件，對前期處理完畢的樣品進行測定，得出結果為：可樂含安賽蜜12.5 mg/kg；酸奶中糖精鈉含量為155.2 mg/kg，山梨酸含量為112.3 mg/kg，阿斯巴甜含量為936.5 mg/kg、安賽蜜含量為35.1 mg/kg；餅干含阿斯巴甜61.3 mg/kg；醬菜含安賽蜜32.6 mg/kg；果脯含阿斯巴甜32.6 mg/kg，安賽蜜含量為469.5 mg/kg；醬油含脫氫乙酸123.5 mg/kg。重復測定6次后，得出測定結果的相對標準偏差在3.5%～8.5%，準確度較高。

2.2 線性范圍與相關系數(shù)

對反相高效液相色譜法進行方法學考察驗證，其中山梨酸標準線性范圍在2.0～20.0 μg/mL時達到最佳線性關系，相關系數(shù)為0.999 85，糖精鈉標準線性范圍為0.0～100.0 μg/mL，相關系數(shù)為0.999 98，脫氫乙酸在1.0～100.0 μg/mL時達到最佳線性關系，相關系數(shù)為0.999 97，阿斯巴甜的標準線性范圍在0.0～100.0 μg/mL，相關系數(shù)為0.999 78；安賽蜜的標準線性范圍在2.0～50.0 μg/mL，相關系數(shù)為0.999 45。

2.3 加標回收率

利用電子天平稱取5.0 g醬菜、果脯、酸奶、餅干（油炸）、可樂、醬油各6分，添加糖精鈉、脫氫乙酸、山梨酸、安賽蜜、阿斯巴甜標準物，添加量分別為 50.0 μ g、150.0 μg、200.0 μg、500 μg，得到的最大回收率以及對應的添加量、變異系數(shù)如表1所示。利用該方法對食品中山梨酸、脫氫乙酸等防腐劑以及糖精鈉、安賽蜜、阿斯巴甜等甜味劑進行檢測，可以獲得準確性較好的結果，滿足大批量食品防腐劑、甜味劑檢測要求。

表1 加標回收率表

3 結論

反相高效液相色譜法是一種準確度高、分離度佳、精密度好和耗時短的定量分析方法，可以滿足食品中多種防腐劑和甜味劑的測定要求。在食品中防腐劑與甜味劑測定中，相關人員可以選擇反相高效液相色譜法，配合C18柱梯度洗脫，在200～293 nm波長范圍內進行檢測，可壓縮樣品檢測時間，提高樣品檢測效率。