張欣，李強 ，陳媛媛，那松巴乙拉，寶山

(1 包頭市食品藥品檢驗檢測中心，內(nèi)蒙古 包頭；2 內(nèi)蒙古自治區(qū)國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特)

0 引言

查干湯是由土木香、苦參、接骨木、山柰（4 ∶4 ∶2 ∶1）四味藥組成的蒙藥制劑。臨床功效為促使熱病及疫熱成熟，平赫依、血相訌。主治未成熟熱，疫熱，空虛熱，寶日巴達(dá)干，赫依、血不調(diào)，血刺痛，感冒等,是蒙醫(yī)常用的藥品之一。本研究采用高效液相色譜法以異土木香內(nèi)酯作為測定指標(biāo)對藥品中的土木香建立了含量測定方法。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（日本島津），LC-10ATVP 泵，SPD-10AVP 檢測器，SCL-10AVP 色譜工作站，Sartorius ME5型電子天平，Mettler AE-100 電子分析天平，JD200-2 型電子天平,AS 5150A 超聲清洗儀。

甲醇為分析純和色譜純；其他試劑均為分析純。水為：離子交換高純水；對照品為中國藥品生物制品檢定所提供（批號：0761-9501）。

試藥查干湯（批 號：20200313、20200314、20200315）由內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院提供；陰性樣品為自制，土木香等蒙藥材由內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

采用DimonsiolC18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-0.04%的磷酸溶液（50 ∶50）為流動相進(jìn)行流動相條件摸索，流速1.0 ml/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量10μl。異土木香內(nèi)酯峰的理論塔板數(shù)均大于4000，與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5[1]。

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液的配制

對照品溶液的制備：取異土木香內(nèi)酯對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml 含50μg 的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取分析樣品約（過4 號篩）0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，放置過夜，超聲處理（功率500W，頻率 40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 采集波長的確定

二極管陣列檢測器顯示異土木香內(nèi)酯對照品溶液在210 nm 的波長處有最大吸收，故選擇210 nm 作為其含量測定的檢測波長，后續(xù)方法學(xué)考察結(jié)果也表明在該波長下測定數(shù)據(jù)穩(wěn)定、可靠，陰性對照無干擾[2,3]。典型色譜圖見圖1-圖3。

圖1 異土木香內(nèi)酯對照品色譜圖

圖2 供試品溶液色譜圖

圖3 陰性對照溶液色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取異土木香內(nèi)酯對照品約3mg，精密稱定，定容在100ml 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5μl、10μl、15μl、20μl、25μl、30μl 進(jìn)樣，按上述色譜條件分別測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程為：y=3.75687e-007x+0.0110287，R2=0.99998。結(jié)果表明，異土木香內(nèi)酯在0.15365μg/ml-0.9219μg/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 重復(fù)性試驗

稱取同一供試品(批號：20200313)6 份，按供試品溶液制備方法處理并測定異土木香內(nèi)酯含量，6 份供試品異土木香內(nèi)酯平均含量為4.892mg/g，RSD 為0.67%，表明方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性考察

取同一份供試品溶液(批號：20200313)，過濾后室溫放置，分別在0h、2h、4h、8h、12h、24h 后進(jìn)行色譜測定，記錄峰面積，不同時間測定的峰面積RSD 為0.54%（n=6），試驗結(jié)果表明供試品溶液中異土木香內(nèi)酯含量在24h 內(nèi)基本穩(wěn)定不變[4]。

2.7 回收率實驗

分別取供試品（批號：20200313 含量：4.894mg/g）6份，每份約0.15g，精密稱定，分別置100ml 錐形瓶中，依次精密加入甲醇24ml；稱取異土木香內(nèi)酯對照品8.15mg，置10ml 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻[5]。精密量取1ml對照品溶液，置同一錐形瓶中，搖勻，分別按上述供試液制備方法和色譜條件測定每份含量，結(jié)果見表1。平均回收率(n=6)為100.34%，RSD=0.80%，表明該方法準(zhǔn)確可靠。

表1 加樣回收試驗結(jié)果

3 樣品含量測定

取3 批樣品，分別按上述方法制備供試品溶液，并測定異土木香內(nèi)酯含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品中異土木香內(nèi)酯的含量測定結(jié)果

4 討論

4.1 流動相的選擇

根據(jù)文獻(xiàn)流動相為乙腈-水（50 ∶50）進(jìn)行條件摸索，結(jié)果拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重，所以參照文獻(xiàn)[6]報導(dǎo)，流動相為乙腈-0.04%的磷酸溶液（50 ∶50），樣品分離效果較好，無拖尾現(xiàn)象，且陰性對照無干擾。結(jié)果：選用流動相為乙腈-0.04%的磷酸溶液（50 ∶50）。

4.2 提取溶劑的選擇

文獻(xiàn)[7]記載異土木香內(nèi)酯不溶于水，溶于甲醇、乙醇、乙醚、苯和氯仿，微溶于石油醚。為排除過多雜質(zhì)的干擾，并參照文獻(xiàn)[8]烏努日圖-3 項下土木香的含量測定方法，選擇甲醇作為提取溶劑。