麥五久代·吐爾遜，曹少宇，朱嬌嬌，陳沙沙，王璽涵，呂蕊花，賀太平，史琳娜

(陜西中醫(yī)藥大學，陜西 咸陽 712046)

0 引言

脫發(fā)為皮膚科常見病，現(xiàn)代醫(yī)學認為脫發(fā)與遺傳、免疫、病源微生物感染、內(nèi)分泌紊亂、營養(yǎng)不良、血管機能障礙等因素有關[1]。現(xiàn)有治療藥物存在不同程度的副作用，如非那雄胺和米諾地爾是美國FDA批準的治療用藥，臨床療效顯著，但易造成性功能受損及皮膚過敏癥狀等不良反應[2]。我國中草藥資源豐富，許多中藥材具有養(yǎng)發(fā)、生發(fā)的作用，且有安全高、無毒副作用等優(yōu)點[3-4]。本實驗選用維吾爾族民間傳統(tǒng)的養(yǎng)眉、生眉草藥烏斯瑪草，配伍何首烏、生姜、側柏葉和女貞子，組合成中藥復方合劑，通過實驗觀察其對小鼠毛發(fā)生長的影響，為進一步研發(fā)生發(fā)藥劑提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗用品

(1)藥品：烏斯瑪草，購自新疆·伊犁州烏斯瑪草種植園。中藥材何首烏、生姜、側柏葉和女貞子，均購自陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院。(2)實驗動物：昆明小鼠20只，雄性，6～8周齡，體重(20±10)g，由成都達碩實驗動物有限公司提供。(3)試劑與儀器：石蠟、甲醛、無水乙醇、二甲苯、伊紅染液、蘇木精染液均購自博泰化玻儀器公司，薇婷絲滑泌香脫毛膏(利潔時家化有限公司)。Leica RM 2235切片機(德國徠卡公司)，ZEISS顯微鏡(德國蔡司公司)，數(shù)顯游標卡尺(霍特電子有限公司)。

1.2 實驗方法

1.2.1 中草藥有效成分提取及配比

水提法分別制備側伯葉、女貞子、何首烏水提物。生姜和烏斯瑪草搗成汁液，將過濾后的汁液與側伯葉、女貞子、何首烏水提物混合制備成中藥復方合劑，每毫升混合液含側柏葉0.4mg、女貞子0.2mg、何首烏0.4mg、生姜1mg、烏斯瑪草6mg，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 小鼠脫毛模型構建

昆明小鼠20只，背部先用剃毛刀剃除毛發(fā)，去毛面積約2cm×2cm，再用脫毛膏去除殘留毛發(fā)，確保局部皮膚毛發(fā)完全脫掉而呈粉紅色。

1.2.3 分組及給藥

脫毛次日，選取脫毛區(qū)光滑且無損傷的小鼠隨機分為對照組和中藥組，每組10只。中藥組小鼠以棉簽直接蘸取中藥復方合劑涂抹脫毛區(qū)，每天1次，每次1 mL，連續(xù)28d。對照組涂抹蒸餾水。

1.2.4 小鼠毛發(fā)生長情況觀察

分別于造模后第7、14、21、28d，對小鼠背部脫毛區(qū)進行拍照，并從小鼠原脫毛部位用鑷子拔取5根毛發(fā)，用數(shù)顯游標卡尺測量毛發(fā)長度，用光學顯微鏡測微尺測量毛發(fā)粗細。

1.2.5 小鼠皮膚組織形態(tài)學觀察

涂藥第28d時，頸椎脫臼法處死小鼠后切取小鼠原脫毛區(qū)皮膚組織，采用10%甲醛溶液固定，脫水，石蠟包埋后切片，HE染色，纖維鏡下觀察小鼠皮膚組織形態(tài)學變化。觀察指標包括：①一般組織學檢查：觀察皮膚完整性，有無充血、水腫、炎細胞浸潤等；②皮膚毛囊計數(shù)。

1.2.6 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用(±s)表示，比較采用t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 實驗結果

2.1 小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)生長情況肉眼觀察結果

由圖1可見，與對照組相比，中藥組小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)生長速度顯著增快。涂藥第14d，中藥組小鼠脫毛區(qū)皮膚已基本被毛發(fā)覆蓋，而對照組小鼠脫毛區(qū)皮膚尚可觀察到粉紅色皮膚底層。涂藥第21d，中藥組小鼠脫毛區(qū)已全部長滿毛發(fā)，對照組小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)才開始覆蓋粉紅色皮膚底層。

圖1 不同時間點小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)生長情況觀察

2.2 小鼠脫毛區(qū)新生毛發(fā)長度和粗度測定

中藥復方合劑可顯著促進小鼠脫毛區(qū)新生毛發(fā)長度的增長，用藥第7、14、21、28d，中藥組小鼠毛發(fā)長度均顯著大于對照組(見表1)。此外，中藥復方合劑也可顯著促進小鼠脫毛區(qū)新生毛發(fā)粗度的增長，用藥第7和28d，中藥組小鼠毛發(fā)粗度顯著大于對照組，尤其在毛發(fā)生長速度最快的前7天，促生長效果最顯著(見表2)。

表1 小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)長度測量結果(±s，mm)

表1 小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)長度測量結果(±s，mm)

注：*P＜0.05表示有顯著性；**P＜0.01表示有極顯著性。

用藥天數(shù) 毛發(fā)長度對照組 中藥組7d 3.917±0.371 4.291±0.750*14d 4.776±0.295 5.639±0.165**21d 5.110±0.392 6.536±0.207**28d 5.536±0.207 6.700±0.231**

表2 小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)粗細測量結果(±s，μm)

表2 小鼠脫毛區(qū)毛發(fā)粗細測量結果(±s，μm)

注：*P＜0.05表有顯著性；**P＜0.01表示有極顯著性。

用藥天數(shù) 毛發(fā)粗細對照組 中藥組7d 3.715±0.928 4.686±0.236**14d 4.609±0.155 4.729±0.306 21d 4.771±0.426 4.971±0.271 28d 5.143±0.237 5.383±0.176*

2.3 小鼠脫毛區(qū)皮膚組織形態(tài)學觀察結果

脫毛區(qū)皮膚組織形態(tài)學觀察結果顯示，兩組小鼠皮膚結構均完整，真皮內(nèi)無血管擴張充血和炎細胞浸潤。中藥組小鼠毛囊分布稠密、毛乳頭較大、毛根鞘較厚，對照組小鼠毛囊分布稀疏、毛乳頭較小、毛根鞘較薄(圖2)。毛囊計數(shù)結果顯示，中藥組小鼠皮膚組織內(nèi)毛囊數(shù)顯著大于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)(見表3)。

圖2 小鼠脫毛區(qū)皮膚組織HE染色結果(HE10×10)

表3 小鼠脫毛區(qū)皮膚毛囊計數(shù)結果

3 討論

中醫(yī)認為毛發(fā)與五臟皆有關系，發(fā)為腎精之外候，脾主運化充養(yǎng)皮毛，肺主宣發(fā)同時助心行血，肝主疏泄，血生氣，氣生精，氣血充沛則毛發(fā)生長旺盛[5]。側柏葉性味苦、澀，寒，歸肺、肝、脾經(jīng)，涼血止血，生發(fā)烏發(fā)。現(xiàn)代研究證實側柏葉具有促進毛發(fā)生長、止血、抗菌、抗氧化、抗腫瘤等作用[6]。側柏葉的揮發(fā)油可誘導了小鼠毛囊細胞中的β-catenin蛋白的表達，進而促進了毛囊的再生[7]。何首烏具有補肝腎、益精血、烏須發(fā)、強筋骨、化濁降脂之功效[8]。實驗證實何首烏提取物能誘導C57BL/6J小鼠毛發(fā)由休止期進入生長期，從而促進毛發(fā)生長[9]。中醫(yī)認為女貞子性味甘、苦、涼，歸肝、腎經(jīng)，具有滋補肝腎，明目烏發(fā)之功效。研究發(fā)現(xiàn)女貞子提取物可促進人黑素細胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成[10]。生姜味辛，具有解表發(fā)散、行氣活血作用，外涂有助于舒張血管，改善受損皮膚的局部血液循環(huán)，促使毛發(fā)更生，對治療肝腎不足型斑禿有顯著效果[11]。烏斯瑪草為中國新疆特有的一種菘藍，是維吾爾族民間傳統(tǒng)的養(yǎng)眉、生眉藥草。現(xiàn)代研究證實烏斯瑪草可顯著促進雄激素性脫發(fā)模型小鼠毛發(fā)的生長[12]。本實驗以烏斯瑪草配伍4味具有生發(fā)功效中草藥制備成中藥復方合劑，觀察其對小鼠毛發(fā)生長的影響，實驗結果顯示中藥組小鼠毛發(fā)生長速度、長度、粗度、皮膚毛囊數(shù)目均顯著大于對照組，表明中藥復方合劑具有顯著促進毛發(fā)生長和毛囊再生的作用，具有臨床應用價值，也可進一步開發(fā)為生發(fā)養(yǎng)發(fā)保健產(chǎn)品。