高天生，范小玲，吳惠惠

（梧州市紅十字會醫(yī)院放療三區(qū)，梧州 543002）

EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是1964年由Epstein和Bar發(fā)現(xiàn)的，屬于皰疹病毒科γ組，能感染人類及靈長類動物的B淋巴細胞［1］。EBV基因組的全部核苷酸序列測定結(jié)果表明，EBV基因組為雙鏈DNA分子，序列長170～175kb［2］。經(jīng)證實，EBV-DNA在鼻咽癌的診斷、預(yù)后、療效評估等方面均具有重要意義［3-4］，但目前尚缺乏大量的臨床數(shù)據(jù)及長期隨訪的研究。本研究中檢測了早期鼻咽癌患者血漿中的EBV-DNA表達情況，并分析了其在鼻咽癌診斷和預(yù)后判斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象按照方便抽樣原則，收集2014年5月～2016年1月期間本院收治的65例鼻咽癌患者的臨床資料，設(shè)為病例組，其中男50例，女15例；年齡33～73歲，中位年齡45歲；臨床分期I～II期。

納入標準：經(jīng)鼻咽部活檢確診為低分化鱗狀細胞癌；臨床分期為I～II期；隨訪截止至2019年2月，隨訪資料顯示生存期≥3年；治療期間均接受強調(diào)放療聯(lián)合同期化療。

排除標準：合并其他惡性腫瘤疾??；合并嚴重內(nèi)科疾病。

剔除標準：不符合納入標準；由于臨床資料不全而影響最終分析結(jié)果的受試者。

選取同期在門診體檢的65名健康志愿者，設(shè)為健康對照組，其中男50例，女15例；年齡33～73歲，中位年齡44歲。健康對照組、病例組受試者的性別、年齡無統(tǒng)計學(xué)差異，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 質(zhì)量控制前期充分查閱相關(guān)文獻，保證選題和科研設(shè)計有充分的理論基礎(chǔ)及臨床價值；咨詢相關(guān)醫(yī)務(wù)人員，保證研究的可操作性；對參與本研究的人員進行資料收集、數(shù)據(jù)分析等方面的培訓(xùn)。數(shù)據(jù)錄入前，檢查錄入內(nèi)容的完整性和準確性，核查無誤后進行分析。

1.3 治療方法病例組鼻咽癌患者均接受強調(diào)放療聯(lián)合同期化療。化療方案：順鉑80 mg/m2靜脈滴注，放療開始后d1，d22，d43進行。強調(diào)放療方案：采用6 MV直線加速器進行強調(diào)放療，鼻咽癌計劃靶體積為 70.06 Gy/31次，淋巴結(jié)計劃靶體積為66.03 Gy/31。5次/周。

1.4 EBV-DNA檢測采集健康對照組、病例組（治療前、治療1個月后）受試者靜脈血3 mL，2000 r/min離心后分離血漿，采用EBV熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)，按照檢測試劑盒（購于美國eBscience公司）說明書進行血漿中EBV-DNA的定量檢測。將EBV-DNA＞1×102copy/mL定義為EBV-DNA檢測陽性。

1.5 觀察指標及評價方法

1.5.1 EBV-DNA陽性檢出率統(tǒng)計并比較健康對照組、病例組治療前的EBV-DNA陽性檢出率。

1.5.2 EBV-DNA檢測對鼻咽癌的診斷效能以鼻咽部活檢診斷結(jié)果為金標準，進行治療前的EBV-DNA檢測結(jié)果對鼻咽癌的診斷效能分析，繪制受試者工作特征（ROC）曲線，統(tǒng)計曲線下方面積和所對應(yīng)的準確度、敏感度、特異度。

1.5.3 EBV-DNA與鼻咽癌近期療效、遠期療效的關(guān)系病例組的65例鼻咽癌患者均于治療1個月后進行EBV-DNA檢測（根據(jù)檢測結(jié)果分為陰性組、陽性組）并評價臨床療效。臨床療效參考文獻［5］中的標準進行評價，分為完全緩解（CR）、部分緩解（PR）、病情穩(wěn)定（SD）、疾病進展（PD）。比較陰性組、陽性組治療1個月后的臨床療效。根據(jù)隨訪資料統(tǒng)計病例組65例鼻咽癌患者治療后的1年、3年復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況，比較陰性組、陽性組的遠期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移情況。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理本研究中的數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計及分析，計數(shù)資料用例數(shù)表示；四格表資料采用卡方檢驗；等級資料采用非參數(shù)檢驗。用受試者工作特征曲線（ROC曲線）分析EBV-DNA檢測結(jié)果對鼻咽癌的診斷價值，曲線下面積采用Z檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組EBV-DNA陽性檢出率比較健康對照組的65例受試者中，血漿EBV-DNA陽性例數(shù)為6例，EBV-DNA陽性檢出率為9.23%（6/65）。治療前，病例組的65例受試者中，血漿EBV-DNA陽性例數(shù)為61例，EBV-DNA陽性檢出率為93.85%（61/65）。經(jīng)統(tǒng)計，病例組血漿EBV-DNA陽性檢出率明顯高于健康對照組（χ2=93.165；P＜0.001）。

2.2 EBV-DNA檢測對鼻咽癌的診斷效能分析ROC曲線分析結(jié)果顯示，EBV-DNA陽性在鼻咽癌診斷中的ROC曲線下方面積為0.923（標準錯誤=0.027，P值＜0.001，95%CI=0.870～0.976），見圖1。其所對應(yīng)的準確度、敏感度、特異度分別為0.923、0.938、0.908。

圖1 EBV-DNA檢測陽性診斷鼻咽癌的ROC曲線

2.3 EBV-DNA與鼻咽癌近期療效、遠期療效的關(guān)系病例組的65例鼻咽癌患者均于治療1個月后評價近期療效，并進行EBV-DNA檢測。近期臨床療效評價結(jié)果顯示，CR為57例，PR為5例，SD為2例，PD為1例。EBV-DNA檢測結(jié)果顯示，治療1個月后，65例鼻咽癌患者中EBV-DNA陽性例數(shù)為10例，EBV-DNA陽性檢出率為15.38%（10/65）。

非參數(shù)檢驗結(jié)果顯示，EBV-DNA表達為陰性的鼻咽癌患者的近期療效與EBV-DNA表達為陽性的鼻咽癌患者之間比較，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 EBV-DNA與鼻咽癌近期療效的關(guān)系［n（%）］

EBV-DNA表達為陰性的鼻咽癌患者的1年復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率、3年復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率均明顯低于EBV-DNA表達為陽性的鼻咽癌患者（P＜0.05）。見表2。

表2 EBV-DNA與鼻咽癌遠期療效的關(guān)系［n（%）］

3 討論

3.1 鼻咽癌概述鼻咽癌是頭頸部腫瘤中發(fā)病率居高的惡性腫瘤，在歐美國家的發(fā)病率較低，約為0.5～2.0/10萬人，但在東南亞和華南地區(qū)的發(fā)病率較高（高達25/10萬人）［6-7］。研究表明，遺傳易感性因素、EBV感染、環(huán)境因素等都是影響鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的獨立影響因素［8-9］。鼻咽部的解剖學(xué)位置具有一定的特殊性，因此鼻咽癌的發(fā)病具有一定的隱匿性，早期臨床癥狀并不典型?；颊咄ǔＪ浅霈F(xiàn)了顯著的臨床癥狀（如淋巴結(jié)腫大、回吸涕血等）時才就診，但此時通常已發(fā)展到局部晚期。伴隨臨床影像學(xué)診斷、放化療技術(shù)、多學(xué)科綜合治療技術(shù)的發(fā)展，鼻咽癌的遠期預(yù)后情況有了明顯的改善，據(jù)統(tǒng)計，早期鼻咽癌的5年生存率已達90%以上［10］。體格檢查、纖維鼻咽鏡、計算機斷層掃描、核磁共振等是臨床常用的鼻咽癌診斷技術(shù)，但由于費用昂貴因此普適性較差。探尋敏感度和特異度均較高的血液學(xué)檢測指標是近年來鼻咽癌診斷及預(yù)后評估相關(guān)研究的主要方向，同時考慮到EBV在鼻咽癌致病中的特殊地位，外周血中游離EBV-DNA與鼻咽癌的關(guān)系研究是學(xué)者們近年來研究的熱點［11］，本研究進一步分析了血漿EBV-DNA檢測在鼻咽癌診斷和預(yù)后判斷中的應(yīng)用價值。

3.2 EBV-DNA與鼻咽癌診斷血漿EBV-DNA在鼻咽癌的臨床診斷中是否可以作為獨立的參考指標是目前研究的熱點。Hui等［12］人在報道中稱，鼻咽癌患者中血漿EBV-DNA的陽性率為96%，而正常健康人群中血漿EBV-DNA的陽性率均為7%。為了探討EBV-DNA檢測在鼻咽癌早期篩查中的應(yīng)用價值，本研究僅納入早期（I～II期）鼻咽癌患者為研究對象，本研究數(shù)據(jù)顯示，鼻咽癌患者和健康人群的血漿EBV-DNA陽性檢出率分別為93.85%和9.23%，進一步的診斷效能分析結(jié)果顯示，EBV-DNA陽性在鼻咽癌診斷中的ROC曲線下方面積為0.923，準確度、敏感度、特異度分別為0.923、0.938、0.908。以上均提示外周血EBV-DNA檢測結(jié)果在臨床鼻咽癌的早期篩查中具有顯著的應(yīng)用價值。

3.3 EBV-DNA與鼻咽癌近期、遠期療效Altekin等［13］將EBV-DNA應(yīng)用于鼻咽癌誘導(dǎo)化療療效的評估中，并以1周為觀察時間間隔，分析鼻咽癌患者EBVDNA的檢測結(jié)果，結(jié)果顯示，治療后EBV-DNA檢測陽性率顯著降低。筆者在前期的研究中也得出了相似的結(jié)論，本研究更進一步分析了放化療1個月后的近期臨床療效與EBV-DNA檢測結(jié)果之間的關(guān)系。統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，EBV-DNA表達陽性的鼻咽癌患者中，PR、SD、PD患者所占比例較高，而CR患者所占比例較低。EBV-DNA表達陰性的鼻咽癌患者中，CR患者所占比例較高，而PR、SD、PD患者所占比例較低。提示治療后EBV-DNA水平的下降是臨床完全緩解的征象；反之，治療后EBV-DNA的高水平預(yù)示著腫瘤緩解困難，應(yīng)采取調(diào)整治療方案等方式改善臨床療效。本研究還通過對治療后1年、3年的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率的統(tǒng)計，分析了EBV-DNA表達與鼻咽癌遠期療效的關(guān)系，研究數(shù)據(jù)顯示，EBV-DNA表達為陰性的鼻咽癌患者的1年復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率、3年復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率均明顯低于EBV-DNA表達為陽性的鼻咽癌患者。但由于入組樣本例數(shù)有限，本研究僅分析了治療后EBV-DNA表達情況與近期、遠期療效之間的關(guān)系。在后續(xù)的研究中，將進一步分析鼻咽癌患者治療前EBV-DNA濃度與預(yù)后結(jié)局之間的關(guān)系，為EBV-DNA在鼻咽癌早期篩查中的相關(guān)研究提供參考。本研究結(jié)果提示血漿EBV-DNA檢測可作為臨床鼻咽癌早期診斷和預(yù)后判斷的參考指標。以往的研究多證實了血中EBV-DNA檢測在晚期鼻咽癌患者輔助診斷中的應(yīng)用價值，本研究對象以I～II期鼻咽癌患者為研究對象，填補了該項研究的空白，具有一定的創(chuàng)新性。在后續(xù)的研究中，將進一步增加樣本例數(shù)并延長隨訪時間，進一步探討EBV-DNA的動態(tài)水平與鼻咽癌發(fā)展、預(yù)后之間的關(guān)系。