羅秋平，朱東發(fā)，劉川，唐茂林，潘莉

（貴州中醫(yī)藥大學，貴州 貴陽 550025）

0 引言

痛經是指與經期相關的小腹疼痛、墜脹及伴有腰酸的婦科癥狀，分為原發(fā)性痛經和繼發(fā)性痛經[1]。原發(fā)性痛經（primary dysmenorrhea, PD）的臨床檢查生殖系統無器質性病變，前列腺素（prostaglandin,PG）水平升高是主要異常改變[2]。PD的發(fā)病率高，占痛經的90%[1]，其周期發(fā)作的特點給患者帶來了巨大的精神壓力及生活負擔。艾條灸可有效緩解原發(fā)性痛經癥狀，主要通過熱效應發(fā)揮溫通止痛的療效，操作簡便，價格低廉[3]。雷火灸作為灸法中的一種，與普通艾條灸相比，同等條件下的平均熱力比普通艾條灸高出10℃以上[4]，同時雷火灸可產生紅外效應可以更好地起到溫經通絡止痛的目的[5]。因此，本研究將專門針對原發(fā)性痛經人群，建立實驗性痛經動物模型，觀察普通艾條灸與雷火灸對原發(fā)性痛經大鼠動物模型扭體反應及血清PGF2α含量影響的療效差異，為臨床使用雷火灸治療原發(fā)性痛經提供參考和依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

本實驗采用清潔級SD雌性大鼠，性成熟、未交配體，體質量約為（240±20）g，購自斯貝福（北京）生物技術有限公司，合格證號：SCXK（京）2018-0012。飼養(yǎng)在溫度為（23±1）℃，相對濕度為（45±5）%環(huán)境中，期間日光燈光照，12h/12h晝夜交替，普通清潔級大鼠飼料，自由飲水。整個實驗過程嚴格有關動物使用以及倫理學規(guī)定進行操作。大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，通過陰道涂片美藍染色，確定大鼠的動情周期階段。將處于動情間期的32只大鼠隨機分為正常組、模型組、艾灸組、雷火灸組，每組8只。

1.2 實驗材料與儀器

艾條（貴州安迪藥械有限公司），雷火灸條（湖北博康醫(yī)藥科技有限公司），己烯雌酚注射劑（天津金耀藥業(yè)有限公司），縮宮素注射液（馬鞍山豐原制藥有限公司），PGF2α酶聯免疫吸附測定試劑盒（伊萊瑞特生物科技有限公司）；離心機(Thermo Fisher Scientific，美國)；多功能酶標儀 (Molecular Devices，美國 )；低溫冰箱（DW-86L386，青島 Haier集團）。

1.3 造模方法

按參考文獻[6-8]方法進行大鼠痛經模型制備。除正常組外，其余各組采用己烯雌酚結合注射縮宮素法制備原發(fā)性痛經大鼠模型。即皮下注射己烯雌酚，第1天及第10天每日注射0.5mg/只，第2天至第9天每日注射0.2mg/只，正常組皮下注射等量0.9%氯化鈉溶液。模型組及艾灸組、雷火灸組于末次治療1h后，腹腔注射縮宮素2U/只，正常組腹腔注射等體積生理鹽水。

1.4 治療方法

艾灸組采用普通清艾條灸、雷火灸組使用雷火灸條，進行灸法治療，每日1次、每次15min，連續(xù)10天。大鼠穴位定位依據余曙光、徐斌《實驗針灸學》[9]大鼠取穴標準，關元：臍下約25mm處腹中線上，仰臥取位；三陰交：后肢內踝尖直上10mm；太沖：后肢足背第1第2跖骨間凹陷處。參考文獻[10]艾灸方法：先將大鼠關元、三陰交、太沖處毛去除，艾灸組點燃艾條放置在離大鼠皮膚2-3cm處，每穴灸15min，雷火灸組點燃雷火灸條放置在離大鼠皮膚2-3cm處，每穴灸15min。正常組、模型組同樣抓取但不做治療。

1.5 觀察指標及檢測方法

扭體反應觀察[11]：最后一次治療后1h，除空白組外，其余各組大鼠腹腔注射縮宮素2U/只，注射縮宮素后立即開始計時，記錄 30 min 內每只大鼠的扭體次數。

血清中PGF2α含量檢測：扭體反應觀察后的大鼠，注射2%戊巴比妥鈉進行麻醉，于腹主動脈取血6-8mL，將取到的血液靜止2h，3500r/min離心10min，取血清，放于-80℃冰箱，待檢。用酶聯免疫吸附法檢測各組大鼠血清中的PGF2α水平表達情況。嚴格按試劑盒說明書步驟進行操作。

1.6 統計方法

2 結果

2.1 對原發(fā)性痛經大鼠扭體反應的影響

除正常組外，30min內其余各組均有扭體反應；與正常組相比，模型組大鼠扭體次數明顯增多（P<0.01）；與模型組相比，艾灸組和雷火灸組大鼠扭體次數明顯減少（P<0.01）；雷火灸組大鼠扭體次數少于艾灸組。見表1。

表1 各組大鼠30min內扭體次數比較（±s）

表1 各組大鼠30min內扭體次數比較（±s）

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，P<0.01。

組別 數量（n） 30min內扭體次數正常組 8 -模型組 8 17.88±1.69**艾灸組 8 9.88±1.11##雷火灸組 8 8.38±1.73##

2.2 各組大鼠血清PGF2α含量變化比較

與正常組相比，模型組大鼠血清PGF2α含量顯著升高（P<0.01）；與模型組相比，艾灸組和雷火灸組大鼠血清PGF2α含量顯著降低（P<0.01）；雷火灸組大鼠血清PGF2α含量少于艾灸組。見表2。

表2 各組大鼠血清中PGF2α含量比較（pg/mL，±s）

表2 各組大鼠血清中PGF2α含量比較（pg/mL，±s）

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01。

組別 例數n 前列腺素PGF2α(pg/mL)正常組 8 106.25±5.36模型組 8 201.25±7.19**艾灸組 8 157.50±6.50##雷火灸組 8 148.63±7.12##

3 討論

原發(fā)性痛經在中醫(yī)屬“經行腹痛”，痛證的發(fā)作病因分為“不通”及“不榮”?！安煌ā闭邔?，胞宮氣血運行不暢，與氣滯、血瘀、寒凝等有關；“不榮”者虛，沖任胞宮失于濡養(yǎng)，與氣血不足等有關，大多數患者的痛經發(fā)作與“不通”關系密切，其中辨證為寒凝證占大多數[12]?；诮浗j腧穴理論，本研究中選取的關元、三陰交及太沖為原發(fā)性痛經的高頻用穴[13]，關元為任脈與足三陰經交會穴，屬近部取穴，有培元固本，溫通胞脈的療效，現代研究中，關元穴與子宮的傳入神經纖維有密切的神經基礎聯系[14]。三陰交是足肝脾腎三陰經的交會穴，可同時三經氣。月經以血為基礎，氣為血之帥，血為氣之母，調經則需氣血通調，太沖為肝經的原穴，有理氣活血的作用。

扭體反應主要指觀察大鼠腹部收縮向內陷，軀干與后肢呈伸展狀態(tài)，臀部與單側肢體內旋情況，可用于代表痛經大鼠的疼痛癥狀[7]，是本研究成功制備痛經模型的依據，同時可反映治療后疼痛的改善情況，作為行為學指標。本研究中，模型組、艾灸組、雷火灸組的每分鐘扭體反應客觀地反映了模型制備成功，而治療后與模型組比較，艾灸組、雷火灸組的扭體反應次數明顯減少；且雷火灸組扭體次數少于艾灸組，這表明雷火灸與傳統艾條灸均可有效改善原發(fā)性痛經的疼痛癥狀，而雷火灸的療效更優(yōu)。

目前認為原發(fā)性痛經發(fā)生的主要原因是前列腺素增多，前列腺素主要包括PGE2和PGF2α。PGF2α的受體位于螺旋小動脈壁上，高濃度的PGF2α在經期時使子宮平滑肌收縮痙攣，減少子宮血流，子宮因此而缺血，盆腔神經末梢受到化學、物理刺激，痛閾降低出現痛經[2]。因此子宮血流情況是痛經發(fā)作的關鍵環(huán)節(jié)。有研究證實，灸法可降低原發(fā)性痛經患者的血清PGF2α含量從而改善痛經癥狀[15]，主要通過對穴位進行溫熱刺激達到改善子宮微循環(huán)的作用[16]，同時灸法的溫度越高，鎮(zhèn)痛效應越好[17]。本實驗研究結果示，艾條灸和雷火灸均可有效減少大鼠血清中PGF2α水平，而雷火灸的減少情況更優(yōu)。這說明雷火灸在艾絨的基礎上多加了沉香、木香、干姜等藥物，豐富的藥力因子使雷火地發(fā)揮了高溫及紅外照射的優(yōu)勢，通過減少大鼠血清PGF2α水平，抑制子宮平滑肌收縮痙攣，改善子宮微循環(huán)，從而達到更好的止痛效果。

綜上，傳統艾灸及雷火灸均能緩解原發(fā)性痛經的癥狀與發(fā)病，但雷火灸藥物產生的熱輻射及紅外照射的溫熱作用能較明顯減少大鼠血清中前列腺素PGF2α水平，表現出較強的鎮(zhèn)痛療效?？蛇M一步開展雷火灸對于治療原發(fā)性痛經的其他證型及改善原發(fā)性痛經其他相關客觀指標的研究，從而進一步增加雷火灸法治療原發(fā)性痛經的科學依據。