呂佳樂，朱云娜，王雅，梁路，李寧

山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院病理科，山西太原030001

癌癥是全球主要的公共衛(wèi)生問題，也一直是世界范圍內(nèi)的主要死亡原因[1]。隨著醫(yī)療水平的不斷進(jìn)步，癌癥的診斷和治療方式也取得了很大的進(jìn)展，但是癌癥患者的預(yù)后狀況及5年生存率仍不盡如人意。因此，需要繼續(xù)尋找新的腫瘤標(biāo)記物，對預(yù)后可能較差的患者積極治療，以期提高患者的生存質(zhì)量及5年生存率。

線粒體是一種高度動態(tài)的細(xì)胞器，通過不斷的分裂、融合進(jìn)而參與調(diào)控細(xì)胞的多種功能，包括細(xì)胞代謝、分化、生長、存活和細(xì)胞程序性死亡[2]。動力相關(guān)蛋白1(dynamin related protein 1，DRP1)是調(diào)控線粒體分裂的關(guān)鍵蛋白，由DNM1L基因編碼，是一種GTP酶大分子，主要存在于細(xì)胞漿。近年來研究發(fā)現(xiàn)，DRP1在肺癌[3]、乳腺癌[4]、肝細(xì)胞癌[5]等多種腫瘤中過表達(dá)，并且參與了腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。但是DRP1的表達(dá)與腫瘤患者預(yù)后以及臨床病理特征之間的關(guān)系尚未有統(tǒng)一的報(bào)道。因此，本文對納入的研究進(jìn)行Meta分析，探究DRP1表達(dá)情況與腫瘤患者預(yù)后之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 文獻(xiàn)資料由兩名研究者系統(tǒng)檢索PubMed、EMBASE、Web of Science、CNKI及萬方等數(shù)據(jù)庫，英文檢索詞：drp1、dnm1l、dynamin related protein 1、neoplasm、cancer、tumor等，中文檢索詞：動力相關(guān)蛋白1、drp1、dnm1l、腫瘤、癌癥。文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)研究類型：前瞻性或回顧性隊(duì)列研究；(2)研究對象：通過病理學(xué)診斷確診的腫瘤患者，并檢測腫瘤組織中DRP1的表達(dá)；(3)結(jié)局指標(biāo)：總生存期(overall survival，OS)，且文中能夠提供OS的風(fēng)險(xiǎn)比(hazard ratio，HR)和95%CI，或有足夠數(shù)據(jù)可以通過計(jì)算得出。文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)綜述、會議摘要；(2)動物實(shí)驗(yàn)或細(xì)胞實(shí)驗(yàn)；(3)非腫瘤性疾病。

1.2 資料提取由兩名研究者獨(dú)立進(jìn)行檢索，根據(jù)文獻(xiàn)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)篩選文獻(xiàn)，并對篩選出的文獻(xiàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)提取。提取的數(shù)據(jù)包括：第一作者、發(fā)表年份、腫瘤類型、研究病例數(shù)、結(jié)局指標(biāo)、HR及95%CI、相關(guān)臨床病理特征等。若文章中未提供HR及95%CI，只提供了Kaplan-Meier曲線，則通過Engauge Digitizer4.1軟件對生存曲線進(jìn)行數(shù)據(jù)提取。若有不同意見，則通過2名研究者討論或第3名研究者確定。

1.3 文獻(xiàn)質(zhì)量評估文獻(xiàn)質(zhì)量評估通過紐卡斯?fàn)?渥太華量表(Newcastle-Ottawa，NOS)進(jìn)行。NOS評分系統(tǒng)包括研究對象選擇、組間可比性、結(jié)果測量等3個(gè)方面，共8個(gè)項(xiàng)目，研究對象選擇和結(jié)果測量中每個(gè)項(xiàng)目最高給1分，組間可比性中每個(gè)項(xiàng)目最高給2分。NOS評分范圍為0～9分，分?jǐn)?shù)越高，納入文獻(xiàn)質(zhì)量越高，分?jǐn)?shù)≥6分表示文獻(xiàn)質(zhì)量較好。以上過程由兩名研究者獨(dú)立進(jìn)行，若有分歧，則通過兩名研究者討論或第3名研究者確定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本研究采用Review Maneger5.3軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料效應(yīng)量選擇HR及95%CI。異質(zhì)性檢驗(yàn)通過CochranQ檢驗(yàn)和Higgins I2檢驗(yàn)進(jìn)行，當(dāng)P＜0.05，I2≥50%時(shí)，異質(zhì)性較大，采用隨機(jī)效應(yīng)模型；當(dāng)P＞0.05，I2＜50%時(shí)，異質(zhì)性較小，采用固定效應(yīng)模型。通過Begg's漏斗圖對納入文獻(xiàn)進(jìn)行偏倚評估，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，存在發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 納入文獻(xiàn)通過檢索共得到1 281篇文獻(xiàn)，篩出重復(fù)文獻(xiàn)后剩余510篇，根據(jù)文獻(xiàn)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，最終獲得10篇研究[3，5-13]，共1 138例患者，文獻(xiàn)篩選流程見圖1。

圖1 文獻(xiàn)篩選及流程

2.2 納入文獻(xiàn)基本情況納入文獻(xiàn)均為英文文獻(xiàn)，發(fā)表年份2009——2020年，研究人群來自中國、日本，腫瘤類型包括胰腺癌[6]、卵巢癌[7]、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤[8]、胃癌[9]、三陰性乳腺癌[10]、肝癌[5，11]、食管鱗狀細(xì)胞癌[12]、肺癌[3，13]。所納入的研究均采用免疫組化的方法進(jìn)行檢測，有2篇[7-8]可從文中直接獲得HR及95%CI，6篇[5-6，9-11，13]通過生存曲線獲得。對納入的文獻(xiàn)進(jìn)行NOS評分，均為高質(zhì)量文獻(xiàn)。所有納入特征見表1。

表1 納入文獻(xiàn)的基本情況及NOS評分

2.3 Meta分析結(jié)果

2.3.1 DRP1表達(dá)情況與腫瘤患者OS之間的關(guān)系有8篇研究[5-11,13]報(bào)道了DRP1表達(dá)情況與腫瘤患者總生存期(overall survival，OS)的關(guān)系，共992例患者。各研究間異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=3%，P=0.40，故采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，DRP1高表達(dá)組腫瘤患者OS更短(HR=1.46，95%CI為1.11～1.92，P=0.006，見圖2)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖2 DRP1表達(dá)與腫瘤患者OS關(guān)系的Meta分析

2.3.2 DRP1表達(dá)情況與消化系統(tǒng)腫瘤患者OS之間的關(guān)系對納入的文獻(xiàn)進(jìn)行亞組分析，關(guān)于消化系統(tǒng)腫瘤的研究共4篇[5-6，9，11]，共466例患者。各研究間異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=0%，P=0.54，故采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行分析。Meta分析結(jié)果如下：HR=1.61，95%CI為1.12～2.31，P=0.01，研究結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，DRP1高表達(dá)的消化系統(tǒng)腫瘤患者OS更短，見圖3。

圖3 DRP1表達(dá)情況與消化系統(tǒng)腫瘤患者OS的Meta分析

2.3.3 DRP1表達(dá)情況與腫瘤患者臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系分別從患者年齡、腫瘤大小、分化程度等方面分析其與DRP1表達(dá)情況之間的關(guān)系，研究結(jié)果如下：DRP1表達(dá)與患者年齡(I2=0%，OR=0.87，95%CI為0.51～1.47，P=0.60，見圖4)、腫瘤大小(I2=22%，OR=1.53，95%CI為0.84～2.74，P=0.17，見圖5)、分化程度(I2=0%，OR=0.83，95%CI為0.49～1.39，P=0.47，見圖6)之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在DRP1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究中，共納入3篇文獻(xiàn)[9，12-13]，且各研究組間異質(zhì)性較小(I2=0%，P=0.49)。結(jié)果顯示：OR=3.24，95%CI為1.85～5.67，P＜0.000 1(見圖7)，因此可以認(rèn)為過表達(dá)DRP1的腫瘤患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率更高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖4 DRP1表達(dá)與腫瘤患者年齡關(guān)系的Meta分析

圖5 DRP1表達(dá)與腫瘤大小關(guān)系的Meta分析

圖6 DRP1表達(dá)與腫瘤分化程度之間關(guān)系的Meta分析

圖7 DRP1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間關(guān)系的Meta分析

2.4 敏感性分析及發(fā)表偏倚在DRP1與腫瘤患者OS關(guān)系的研究中，OS合并結(jié)果異質(zhì)性較小，I2=3%，對納入的文獻(xiàn)進(jìn)行敏感性分析，依次剔除一篇研究，發(fā)現(xiàn)異質(zhì)性主要來源于LIANG等[6]、CHENG等[8]、XU等[9]及CHIANG等[13]的研究，除4篇研究后，合并HR，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=0。剔除其余文獻(xiàn)，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果相差不大，Meta分析結(jié)果可靠。對納入的文獻(xiàn)進(jìn)行漏斗圖分析，結(jié)果如圖8所示，圖形未見明顯不對稱，所納入的研究發(fā)表偏倚較小。關(guān)于DRP1表達(dá)情況與消化系統(tǒng)腫瘤患者OS之間的關(guān)系，合并OS后，異質(zhì)性為I2=0，故未對其進(jìn)行敏感性分析。對納入的文獻(xiàn)進(jìn)行發(fā)表偏倚分析，結(jié)果如圖9所示，圖形不對稱，存在發(fā)表偏倚。在DRP1表達(dá)情況與患者年齡、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間關(guān)系的研究中，異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果I2=0，故未對其進(jìn)行敏感性分析。關(guān)于DRP1表達(dá)情況與腫瘤大小之間關(guān)系的研究，納入文獻(xiàn)較少，故未對其進(jìn)行敏感性分析。發(fā)表偏倚分析如圖10～13所示，在與腫瘤患者年齡關(guān)系的分析中，圖形存在不對稱，存在發(fā)表偏倚。其余圖形未見明顯不對稱，無明顯發(fā)表偏倚。

圖8 DRP1表達(dá)與腫瘤患者OS關(guān)系meta分析的漏斗圖

圖9 DRP1表達(dá)與消化系統(tǒng)腫瘤患者OS關(guān)系meta分析的漏斗圖

圖10 DRP1表達(dá)與腫瘤患者年齡關(guān)系的漏斗圖

圖11 DRP1表達(dá)與腫瘤大小關(guān)系的漏斗圖

圖12 DRP1表達(dá)與腫瘤分化程度關(guān)系的漏斗圖

圖13 DRP1表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的漏斗圖

3 討論

線粒體在細(xì)胞能量代謝、鈣穩(wěn)態(tài)、活性氧調(diào)節(jié)等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[14]，并通過不斷的分裂與融合來維持自身的形態(tài)與功能，這一過程稱為線粒體動力學(xué)。近年來，關(guān)于線粒體動力學(xué)的研究引起了廣泛關(guān)注。線粒體通過MFN1(mitofusins 1)、MFN2(mitofusins 2)、OPA1(optic atrophy 1)三種蛋白控制自身的融合，DRP1、Fis1則是控制線粒體分裂的蛋白[15]。DRP1最早發(fā)現(xiàn)于人肝癌HepG2細(xì)胞[16]，是一種可溶性蛋白。作為線粒體分裂的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，DRP1也被證明在細(xì)胞分化、代謝、增殖和死亡在內(nèi)的各種級聯(lián)信號中發(fā)揮核心作用，其缺失或過表達(dá)都會導(dǎo)致機(jī)體疾病。如在阿爾茲海默癥[17]、帕金森癥[18]、亨廷頓舞蹈病[19]等神經(jīng)系統(tǒng)疾病中，均發(fā)現(xiàn)了DRP1過表達(dá)導(dǎo)致的線粒體過度分裂。

線粒體動力學(xué)的紊亂也在多種癌癥中被觀察到，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)了DRP1表達(dá)情況的改變。由于多種細(xì)胞信號機(jī)制失調(diào)而導(dǎo)致的細(xì)胞過度增殖和對凋亡的抵抗是癌細(xì)胞的共同特征[20]。在肺癌[21]、肝細(xì)胞肝癌[11]、胰腺癌[6]和腦膠質(zhì)瘤[8]等腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)DRP1的過表達(dá)會促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。另一方面YAMAUCHI等[22]的研究表明，DRP1參與了結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT116和SW480的凋亡過程。此外，腫瘤的轉(zhuǎn)移開始于癌細(xì)胞向周圍組織和淋巴管的遷移和侵襲，之后再轉(zhuǎn)移至靶器官，這往往也是腫瘤患者死亡的主要原因。LIANG等[6]研究也發(fā)現(xiàn)，DRP1的過表達(dá)增強(qiáng)了胰腺腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲的能力。這些結(jié)果都證明了DRP1的過表達(dá)參與了這些腫瘤形成與發(fā)展的過程。本研究的結(jié)果也表明，DRP1過表達(dá)腫瘤患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率更高，且預(yù)后更差，OS相對于低表達(dá)患者更短。這些結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了DRP1在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用，也為腫瘤患者的治療提供了新的思路與方法。

與這些結(jié)果不同的是，ZHAI等[12]的研究表明，DRP1在食管鱗癌組織中呈低表達(dá)，并且與浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。KIM等[23]的研究也發(fā)現(xiàn)相比于正常組織，在肺癌和結(jié)直腸癌中DRP1表達(dá)減少。因此，后續(xù)還需納入更多的研究對其進(jìn)行分析。

本研究也存在不足之處。第一，納入的研究數(shù)量較少，在進(jìn)行亞組分析時(shí)，各分組文獻(xiàn)數(shù)量較少，可能對研究結(jié)果有影響，今后還需繼續(xù)納入更多的研究進(jìn)行分析；第二，部分研究的OS和95%CI未直接給出，需從KM曲線中提取，可能與真實(shí)數(shù)值有差異；第三，雖然所納入的研究均采用免疫組化的方法，但是抗體的廠家、染色過程、染色結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)很難達(dá)到一致，因此對本研究的結(jié)果也可能會產(chǎn)生影響，還需要納入更多的研究進(jìn)一步分析。

綜上所述，本研究結(jié)果為DRP1過表達(dá)與腫瘤患者預(yù)后之間的關(guān)系提供了依據(jù)，此結(jié)果說明DRP1將可能作為腫瘤患者尤其是消化系統(tǒng)腫瘤患者臨床預(yù)后的指標(biāo)，為腫瘤患者的診斷和治療提供依據(jù)。