鄭艷燕，蘇華斌，王曉敏，唐咸艷，黃開勇，楊 莉△

（1.廣西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院職業(yè)衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學(xué)系，530021 南寧；2.廣西壯族自治區(qū)江濱醫(yī)院預(yù)防保健科，530021 南寧；3.廣西醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與生物統(tǒng)計(jì)學(xué)系，530021 南寧）

近年來，廣西機(jī)動(dòng)車數(shù)量呈不斷上升趨勢，至2020年已經(jīng)超過了900萬輛。據(jù)報(bào)道城市道路事故導(dǎo)致的死亡居各類傷害死亡之首[1]。其中駕駛員自身因素導(dǎo)致的交通事故居首要地位，占事故總數(shù)44.0%～84.7%[2]。研究證實(shí)駕駛員的生理、心理、行為等因素與道路交通傷害發(fā)生有密切關(guān)系[3]，學(xué)者認(rèn)為駕駛員中存在一種長期且穩(wěn)定的人格特征表現(xiàn)，即事故傾向性，其傷害逃避行為維度與5-HTTLPR基因的功能多態(tài)性有密切關(guān)聯(lián)[4]。本研究采用病例對照研究，抽取南寧市公交公司、運(yùn)輸公司A 型機(jī)動(dòng)車駕駛員為研究對象，選取5-HT2A受體基因編碼區(qū)（T102C）(The polymorphism of the serotonin-2A receptor T102C) 位點(diǎn)和5-HT1B受體基因調(diào)控區(qū)（A-161T）(The polymorphism of the serotonin 1B receptor A-161T)位點(diǎn)作為候選基因，探討基因多態(tài)性與事故傾向性的關(guān)系，旨在為駕駛員的篩查和心理干預(yù)提供新的方法與途徑[5]。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集2008 年1 月至2012 年12 月廣西南寧市公交公司、運(yùn)輸公司在5年期間，發(fā)生責(zé)任事故3次及以上并有廣西南寧市交通警察總隊(duì)記錄在案，身體狀況良好，未患重大疾病并愿意參加研究的300 名駕駛員作為事故組人員。同時(shí)，采用病例對照研究方法，按1∶1 配對抽取廣西南寧市公交公司同期未發(fā)生交通事故，且與事故組駕駛員同性別、同車型、同路況，年齡和駕齡相差不到2年的300名駕駛員，作為對照組。

1.2 問卷調(diào)查及量表測評

本次調(diào)查共發(fā)放調(diào)查問卷650 份，收回有效問卷600 份，有效率為92.3%。問卷內(nèi)容包括3 個(gè)部分：（1）自行設(shè)計(jì)的駕駛員的一般情況問卷：包括性別、年齡、民族、駕齡、婚姻狀況、文化程度、疾病史等內(nèi)容；（2）艾森克個(gè)性特征量表（EPQ）；（3）癥狀自評量表（SCL-90）測評。本研究用艾森克人格—成人版量表首先測驗(yàn)出內(nèi)外向（E）、情緒性（N）、精神質(zhì)（P）和掩飾傾向（L）4 個(gè)維度分量表的粗總分，然后換算出相應(yīng)的量表分，最后用量表分測量調(diào)查對象的人格特征，即內(nèi)外向度、精神質(zhì)和神經(jīng)質(zhì)。其目的是對調(diào)查對象的個(gè)性特征以及心理癥狀進(jìn)行調(diào)查，了解個(gè)性類型及心理癥狀嚴(yán)重程度，探討事故傾向性相關(guān)危險(xiǎn)因素。采用SCL-90 癥狀自評量表測評包括軀體化、人際關(guān)系敏感型、強(qiáng)迫癥狀、郁抑、敵對、焦慮、偏執(zhí)、恐怖、精神病性等9 個(gè)癥狀因子，以調(diào)查對象的心理癥狀嚴(yán)重程度。各因子的評分分為無、輕度、中度、相當(dāng)重及嚴(yán)重等5 級。本研究先測算出各調(diào)查對象的9 個(gè)因子總分，再換算出相應(yīng)因子得分，得分越高則表明調(diào)查對象的心理癥狀越嚴(yán)重。

1.3 血樣采集及DNA提取

用EDTA 抗凝管采集外周靜脈血2 mL。向血樣中加入3%明膠溶液提取白細(xì)胞，隨后利用TES緩沖液裂解白細(xì)胞，接著加入Tris 平衡酚溶液和氯仿—異戊醇溶液提取DNA，最后加入70%乙醇溶液和TE緩沖液析出DNA，并置于-80 ℃超低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 基因檢測[6-7]

首先進(jìn)行PCR-RFLP 技術(shù)基因擴(kuò)增。（1）引物：5-HT2A受體基因T102C 位點(diǎn)和5-HT1B受體基因A-161T位點(diǎn)的上下游引物序列分別為5’-TCT GCTACA AGT TCT GGC TT-3’和5’-CTG CAG CTT TTT CTC TAG GG-3’以及5’-CAG CGC TGC TCC TAG ACT TCA CC-3’和5’-GTT CCT CCA TGG CTC TCC TCG-3’。（2）采用25 μL PCR反應(yīng)體系：模板DNA 5 μL，上下游引物各1 μL，10×PCR Buffer 5 μL(含MgCl22 mmol/L)。其中，5-HT2A受體基因dNTP 4 μL，Taq 聚合酶0.25 μL，雙蒸水（ddH2O）8.75 μL。5-HT1B受體基因dNTP 3 μL，Taq 聚合酶0.3 μL，雙蒸水（ddH2O）10.7 μL。（3）PCR 反應(yīng)條件：5-HT2A受體基因PCR 反應(yīng)條件是95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min。5-HT1B受體基因是95 ℃預(yù)變性5 min，95 ℃變性60 s，60 ℃退火40 s，72 ℃延伸1 min。兩者均是反應(yīng)30 個(gè)循環(huán)，出循環(huán)后72 ℃延伸10 min，并4 ℃保存。隨后使用3%瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)檢測目的基因是否擴(kuò)增成功，接著將PCR產(chǎn)物置37 ℃水浴在NIaⅢ限制性內(nèi)切酶作用下反應(yīng)12 h，并將酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳，最后通過Marker標(biāo)準(zhǔn)參照檢測基因分型情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 16.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，用卡方檢驗(yàn)分別對Hardy-Weinberg遺傳平衡性和5-HT2A與5-HT1B受體基因多態(tài)基因型及等位基因頻率進(jìn)行吻合度檢驗(yàn)及比較分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率和構(gòu)成比（%）表示，組間比較采用配對χ2檢驗(yàn)。采用多元方差分析探索5-HT2A與5-HT1B受體基因的交互作用。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg平衡定律吻合度

檢測總體樣本中T102C 位點(diǎn)和A-161T 位點(diǎn)的基因型頻率分布，符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡定律（χ2=5.140，P=0.081；χ2=0.032，P=0.980）。

2.2 5-HT2A和5-HT1B受體基因基因型及等位基因頻率

事故組與對照組5-HT1B受體基因A-161T 位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 兩組駕駛員5-HT2A、1B受體基因型及等位基因頻率的比較n(%)

2.3 結(jié)合量表進(jìn)行5-HT2A受體基因事故傾向性分析

5-HT2A受體基因（T102C）中事故組的偏執(zhí)因子、對照組的人際關(guān)系因子的TT 基因型亞組的各因子得分與TC+CC基因型亞組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＜0.05)，見表2。

表2 事故組和對照組5-HT2A受體基因不同基因型分組中因子得分的比較

表2 事故組和對照組5-HT2A受體基因不同基因型分組中因子得分的比較

與組內(nèi)TT基因型比較，#P＜0.05。

2.4 兩組5-HT1B受體基因（A-161T）中AA 基因型亞組的各因子得分情況

事故組5-HT1B受體基因（A-161T）中AA基因型亞組的各因子得分與AT+TT基因型亞組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)。對照組5-HT1B受體基因（A-161T）中AA 基因型亞組的各因子得分與AT+TT 基因型亞組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)，見表3。

表3 事故組和對照組5-HT1B受體基因（A-161T）不同基因型分組中因子得分的比較

表3 事故組和對照組5-HT1B受體基因（A-161T）不同基因型分組中因子得分的比較

2.5 5-HT2A與5-HT1B受體基因交互作用分析

將事故組5-HT2A受體基因（TT和TC+CC）與5-HT1B受體基因（AA 和AT+TT）基因結(jié)合，分別對偏執(zhí)、人際關(guān)系因子進(jìn)行交互作用分析，結(jié)果顯示5-HT2A基因和5-HT1B基因不存在交互作用（均P＞0.05)，見圖1。

圖1 5-HT2A與5-HT1B受體基因多態(tài)性交互效應(yīng)圖

3 討論

目前，有關(guān)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)受體基因與事故傾向性的關(guān)系研究報(bào)道較少。5-HT 作為人類最為豐富的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，在人體的生理機(jī)能和心理功能上發(fā)揮多方面的作用。Hansen 等[8]認(rèn)為，人群易發(fā)生自殺、情感障礙、暴力及攻擊性等行為與中樞神經(jīng)系統(tǒng)中5-HT 表達(dá)水平較低有關(guān)。而中樞系統(tǒng)中5-HT表達(dá)功能降低可能與編碼5-HT的受體基因發(fā)生遺傳變異有關(guān)。其中，5-HT2A受體基因T102C位點(diǎn)更是被認(rèn)為是強(qiáng)迫行為、抑郁情緒、注意缺陷、情感性障礙的易感遺傳因子[9-10]，而且5-HT2A受體基因T102C位點(diǎn)突變發(fā)生率最高。為此，我們對該基因位點(diǎn)的多態(tài)性與事故傾向性開展研究。但本研究發(fā)現(xiàn)，事故組和對照組中5-HT2A受體基因T102C位點(diǎn)的基因型及等位基因頻率分布無差異,說明T102C 位點(diǎn)多態(tài)性與事故傾向性無關(guān)聯(lián)，國內(nèi)學(xué)者研究也表明，T102C 位點(diǎn)多態(tài)性與情感障礙無關(guān)聯(lián)[6,11]。

既往研究顯示，5-HT受體基因多態(tài)性可能與物質(zhì)依賴以及心理行為障礙相關(guān)。Hsiao 等[12]對5-HT1B受體基因A-161T 位點(diǎn)多態(tài)性與酒精依賴進(jìn)行相關(guān)性研究，認(rèn)為A-161T位點(diǎn)多態(tài)性可能是發(fā)生酒精依賴的危險(xiǎn)因素，結(jié)果證明5-HT1B受體基因在精神疾病及藥物依賴方面起著重要作用。本研究結(jié)果顯示，事故組與對照組中5-HT1B受體基因A-161T位點(diǎn)的基因型及等位基因頻率分布有差異，這說明5-HT1B受體基因A-161T 位點(diǎn)多態(tài)性與事故傾向性可能存在關(guān)聯(lián)。然而，事故組和對照組5-HT1B受體基因中AA 基因型組的各因子得分與AT+TT 基因型組比較無差異。這提示5-HT1B受體基因A-161T位點(diǎn)多態(tài)性與駕駛員的心理癥狀不存在關(guān)聯(lián)，說明5-HT1B受體基因多態(tài)性及駕駛員心理癥狀與事故傾向性之間可能不存在交互作用。

Bjork 等[13]研究發(fā)現(xiàn)，CC 基因型個(gè)體的沖動(dòng)評分顯著高于TT和TC基因型。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)，事故組駕駛員中5-HT2A受體基因中的TC+CC基因型組的偏執(zhí)因子得分高于TT 基因型組，對照組中TC+CC基因型組的人際關(guān)系因子得分高于TT基因型組。進(jìn)一步證實(shí)了5-HT2A受體基因T102C 位點(diǎn)多態(tài)性與駕駛員的心理癥狀存在關(guān)聯(lián)[7]，說明5-HT2A受體基因多態(tài)性在駕駛員的心理癥狀與事故傾向性發(fā)生關(guān)系中可能起到一定調(diào)節(jié)作用。

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，5-HT轉(zhuǎn)運(yùn)體受體基因與DRD4基因多態(tài)性不存在相互協(xié)同作用[7]。因此，為探索5-HT2A和5-HT1B受體基因多態(tài)性與事故傾向性是否存在關(guān)聯(lián)，本研究將事故組中5-HT2A受體基因中TT和TC+CC兩組基因型與5-HT1B受體基因中AA 和AT+TT 兩組基因型結(jié)合,分別對癥狀自評量表中偏執(zhí)、人際關(guān)系因子進(jìn)行交互作用分析，結(jié)果尚不能認(rèn)為5-HT2A受體基因與5-HT1B受體基因多態(tài)性存在交互作用。在5-HT2A受體基因型的TT 基因亞組和TC+CC基因亞組中，AA基因亞組的偏執(zhí)和人際關(guān)系因子得分與AT+TT 基因亞組的癥狀自評量表中偏執(zhí)和人際關(guān)系因子的得分比較，結(jié)果均未見差異。

綜上，本研究從駕駛員5-HT2A和5-HT1B受體基因多態(tài)性方面對事故傾向性影響因素進(jìn)行初步探討，由于造成道路交通傷害影響的因素繁多，作用機(jī)制比較復(fù)雜，至今沒有一個(gè)研究能夠全面系統(tǒng)地闡述。因此，有關(guān)事故傾向性影響因素的研究，將有待今后進(jìn)一步研究探索。