廖志剛 柴將紅 余良鐘 潘燕婷

摘要 目的：利用HPLC法測定尿素維E乳膏中的尿素含量。方法：色譜柱為Sepax HP-Silica（4.6×250mm， 5μm），流動相為乙腈-0.1%甲酸水（97.5：2.5），采用等度洗脫，流速為1ml/min，檢測波長為195nm，柱溫為30℃，進樣體積為10μl。結果：尿素在0.099064mg/ml～0.792512mg/ml濃度范圍內(nèi)，呈良好的線性關系（R2 =0.9999）。尿素回收率為100.03%～100.97%。結論：該方法專屬性好，靈敏度高，定量準確，可用于尿素維E乳膏中尿素含量測定。

【中圖分類號】R453 【文獻標識碼】A 【文章編號】2026-5328（2021）05-105-02

Abstract Objective： To determine the urea content of Urea vitamin E Cream? by HPLC. Methods：The determination was performed on Sepax HP-Silica column （4.6×250mm， 5μm） with mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% formic acid water （97.5：2.5）. The flow rate was 1 mL /min. The detection wavelength was set at 195nm. Results： Urea showed a good linear relationship in the concentration range of 0.099064mg/ mL ～0.792512mg/ mL （R2 =0.9999）. The urea recovery was 100.03%-100.97%.Conclusions：The method has good specificity， high sensitivity and accurate quantification， and can be used for the determination of urea content in Urea Vitamin E Cream.

尿素維E乳膏是皮膚外用制劑，臨床用于手、足皸裂，對角化型手足癬引起的皸裂也有效[1]。在八十年代初進入市場以來，尿素維E乳膏因具有起效迅速、療效確切等優(yōu)點，長期使用無毒副作用，安全可靠，深受廣大患者的青睞，已成為廣泛使用的皮膚科藥品之一。尿素維E乳膏是一種復方制劑，其有效成分為尿素（15%）和維生素E（1%）。在《中國藥典》2020年版二部[2]方法測定中有關尿素含量的測定方法有薄層色譜法和紫外分光光度法，文獻中也多是紫外分光光度法的測定尿素含量[3-5]，但紫外分光光度法準確度不高，測定結果重現(xiàn)性差，因此本方法參照USP42尿素、膠囊、口服液等標準，結合產(chǎn)品本身特點而建立專屬性強、靈敏度高、重復性好、操作簡便的高效液相色譜（HPLC）法。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Ultimate U3000型高效液相色譜儀，包括自動進樣器、紫外分光廣度檢測器、Chromeleon6.8軟件（美國Thermo Fisher公司）;KQ3200型超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2試藥

尿素維E乳膏（廣東華潤順峰藥業(yè)有限公司，批號：20190002、20190003、20190004，規(guī)格：25克：尿素3.75克與維生素E 0.25克）;尿素對照品（批號：100288-201302，純度：100.0%），購自中國食品藥品檢定研究院;甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱是Sepax HP-Silica柱（4.6×250mm， 5μm），流動相為乙腈-0.1%甲酸水（97.5：2.5），以乙腈-水（9：1）為溶劑，采用等度洗脫，流速為1ml/min，檢測波長為195nm，柱溫為30℃，進樣體積為10μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液

取尿素對照品25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加溶劑適量超聲使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。

2.2.2 供試品溶液

取本品適量（約相當于尿素25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加溶劑適量，置60-70℃水浴中加熱振搖，使尿素溶解，放冷至室溫，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻30min以上，取出迅速濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液放至室溫即得。

2.2.3陰性樣品溶液

稱取尿素維E乳膏不含尿素的陰性樣品0.25g，精密稱定，置50ml量瓶中，加溶劑適量，置60-70℃水浴中加熱振搖，使尿素溶解，放冷至室溫，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻30min以上，取出迅速濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液放至室溫即得。

2.3系統(tǒng)適應性試驗

精密量取“2.2”項下對照品溶液，連續(xù)進樣6次，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，主峰峰面積的RSD為0.18%，拖尾因子約為0.91，理論板數(shù)按尿素峰計算大于4000，系統(tǒng)適應性良好。

2.4 線性關系考察

取尿素對照品約500mg，精密稱定，置于100ml容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。分別精密量取對照品儲備液各1ml、2ml、3ml、5ml、6ml、8ml，置50ml容量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，分別作為待測溶液。取待測溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為X軸，峰面積為Y軸，作線性回歸。尿素的線性方程為：y = 52.233x + 0.1558，r=0.9999，線性考察范圍為：99.064～792.512μg/ml。

2.5 精密度試驗

2.5.1 重復性試驗

取本品適量（約相當于尿素25mg），平行稱取6份，按尿素含量測定方法操作，測得含量為100.8%，RSD為0.31%，說明方法重復性良好。

2.5.2 中間精密度

與重復性試驗同法操作，在不同時間，用不同儀器測定，兩個實驗人員測定的含量平均值為101.1%，RSD為0.56%，說明方法中間精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液和對照品溶液于室溫下放置0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20h后，各精密量取10μl，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。供試品溶液和對照品溶液峰面積的RSD分別為0.45%和0.72%，溶液穩(wěn)定性良好。

2.7 回收率試驗

按照處方稱取陰性樣品9份，置50ml容量瓶中，分別精密量取尿素對照品儲備液（約5mg/ml）各4ml、5ml、6ml，加溶劑適量，在60-70℃水浴加熱使尿素溶解，放冷，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻30min以上，取出迅速濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液放至室溫即得高、中、低三個濃度各三份溶液，分別按樣品含量測定方法操作，計算回收率，結果尿素的平均回收率為100.6%（RSD為0.26%）。

2.8樣品含量測定

對3批工藝驗證批樣品進行尿素含量檢測，結果見表1。

3 討論（主要講下方法摸索點）

以往常用的尿素檢測方法或操作步驟煩瑣，或?qū)傩圆?，結果往往不夠理想。隨著液相色譜技術的發(fā)展和先進儀器設備的引入，以及近年來先進色譜理論指導，本實驗嘗試采用色譜柱為Sepax HP-Silica（4.6×250mm， 5μm），流動相為乙腈-0.1%甲酸水（97.5：2.5），采用等度洗脫，對尿素進行檢測分析。經(jīng)驗證，本方法靈敏度高、定量準確、專屬性強，可用于尿素維e乳膏中尿素含量的測定。

參考文獻

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局編.《中國醫(yī)院制劑規(guī)范》西藥制劑第二版[M]，中國醫(yī)藥科技出版社，140-141.

[2]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典（ 二部） [M].北京：化學工業(yè)出版社，2020： 652.

[3]劉煒，孫穎，曾蔚欣，紫外分光光度法測定尿素乳膏中尿素的含量[J]，天津藥學，2011，23（ 6）：20-21.

[4]徐鳳梅，紫外分光光度法測定尿素乳膏含量[J].天津藥學.2002（02）

[5]鄧昌國，童麗健等，維生素E乳膏劑質(zhì)量標準的研制[J]，中國現(xiàn)代應用藥學，2008，25（8）：709-710.

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