熊曉珊 黎承平

摘要：目的：本文的研究成果旨在深入探討腦脊液 （cerebrospinalfluid，CSF）流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，F(xiàn)CM）對中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血?。╟entralnervoussystem leukemia，CNSL）的預(yù)測診斷價(jià)值。方法：本課題研究工作人員采用多色流式細(xì)胞術(shù)CD45/SSC設(shè)門法，對294例急性白血病患者CSF細(xì)胞免疫表型檢測情況數(shù)據(jù)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，同時(shí)進(jìn)行腦脊液細(xì)胞形態(tài)學(xué)（Cytomorphology of cerebrospinal fluid，CC）檢測，比較兩種檢測方法的臨床應(yīng)用優(yōu)勢。結(jié)果：所統(tǒng)計(jì)294例患者中，116例為急性淋巴細(xì)胞白血病 （acutelymphomaleukemia，ALL）患者 ，F(xiàn)CM 檢測有22例發(fā)現(xiàn)異常表型細(xì)胞，陽性率為18.97%，而CC檢測，僅1例發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞，陽性率為0.86% ，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;178例為急性非淋巴細(xì)胞白血?。╝cute nonlymphocyticleukemia，ANLL）患者，F(xiàn)CM檢測有13例發(fā)現(xiàn)異常表型細(xì)胞，陽性率為7.30%，而CC檢測，僅1例發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞，陽性率為0.56%，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。結(jié)論：腦脊液FCM檢測的敏感性明顯優(yōu)于腦脊液CC檢測，急性白血病患者行FCM分析更有助于CNSL的預(yù)測診斷。

關(guān)鍵詞：腦脊液流式細(xì)胞術(shù);細(xì)胞形態(tài)學(xué);中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病

【中圖分類號】R322.8 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2026-5328（2021）05-018-03

中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血?。–NSL）是急性白血病的一種嚴(yán)重臨床并發(fā)癥，為更好地預(yù)防及治療CNSL，早期診斷也就顯得尤為關(guān)鍵。目前評價(jià)中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累的金標(biāo)準(zhǔn)是腰椎穿刺后腦脊液中白血病細(xì)胞的檢測，即腦脊液CC檢測，但是該方法敏感性有限，而FCM敏感性高，而且可以很好地達(dá)到危險(xiǎn)分層的目的，F(xiàn)CM已經(jīng)初步在臨床上開展應(yīng)用，但尚未納入常規(guī)檢查，仍需要大數(shù)據(jù)的分析支持[1]。Maria Ilaria Del Principe等回顧性地評估了240名新診斷為急性淋巴細(xì)胞白血病的成人患者隱匿性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生率及其對預(yù)后的影響，證明流式細(xì)胞術(shù)可以檢測隱匿性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的靈敏度較高[2]。本研究對昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的294例白血病患者行腦脊液FCM檢測和腦脊液CC檢測的陽性率做了分析比較，從而對FCM在CNSL中的預(yù)測診斷價(jià)值進(jìn)行評估，現(xiàn)報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1研究對象

選取昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科2019年4月至2020年6月住院的294例急性白血病患者，116例為ALL，患者資料見表1;178例為ANLL，患者資料見表2。所選患者診斷均符合標(biāo)準(zhǔn)，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[3] 嚴(yán)格執(zhí)行。

1.2 CNSL診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照文獻(xiàn)[3]標(biāo)準(zhǔn)，①有中樞神經(jīng)系統(tǒng)的癥狀和體征，CNSL患者多數(shù)可能會出現(xiàn)顱內(nèi)壓過高的表現(xiàn)，比如：頭痛、嘔吐、抽搐等，部分患者可出現(xiàn)視網(wǎng)膜出血、眼瞼下垂、視物模糊、視乳頭水腫以及口角歪斜等;②實(shí)驗(yàn)室檢查顯示顱內(nèi)壓增高（>0.02kPa）、腦脊液白細(xì)胞計(jì)數(shù)>5×106/L、腦脊液細(xì)胞學(xué)涂片可見確切白血病細(xì)胞;蛋白質(zhì)>450mg/L或潘氏試驗(yàn)陽等;③排除了由于顱內(nèi)大量出血或顱內(nèi)占位等其他原因所造成的中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和體征及所引起的腦脊液相似改變。

1.3方法

1.3.1 腦脊液常規(guī)及生化檢查

觀察腦脊液的顏色和形態(tài)，然后將其滴在計(jì)數(shù)池內(nèi)，并進(jìn)行細(xì)胞測定，分別進(jìn)行腦脊液內(nèi)白細(xì)胞和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。然后使用全自動生化分析儀對患者腦脊液中含糖、蛋白質(zhì)、氯離子等指標(biāo)進(jìn)行分析。

1.3.2 腦脊液CC檢查

取新鮮腦脊液標(biāo)本0.1ml，吹打均勻后滴入離心管內(nèi)，將其與濾紙、撥片一起緊密固定在離心涂片機(jī)中制作腦脊液細(xì)胞涂片，干燥后開始行瑞-吉姆薩染色，然后使用顯微鏡仔細(xì)觀察細(xì)胞涂片中細(xì)胞的形態(tài)。若明確發(fā)現(xiàn)幼稚原始的白血病細(xì)胞，則為陽性結(jié)果;反之，則為陰性結(jié)果。

1.3.3 腦脊液FCM檢查

檢驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^流式細(xì)胞儀法對急性白血病/淋巴瘤患者腦脊液異常細(xì)胞群進(jìn)行定性及定量分析。檢驗(yàn)原理：腦脊液流式細(xì)胞學(xué)檢測是基于白血病/淋巴瘤細(xì)胞免疫表型特點(diǎn)區(qū)分正常細(xì)胞及異常細(xì)胞，從而判斷急性白血病/淋巴瘤是否有中樞侵犯。

檢驗(yàn)方法：（1）制備樣本：①準(zhǔn)備流式專用管，標(biāo)記姓名并編號;②將2ml腦脊液標(biāo)本混勻，1000rp/m離心5分鐘，棄上清;③向每個(gè)試管中分別加入提前準(zhǔn)備的預(yù)混多色抗體約40ul;④放置于適合的室溫（18-25°C），避光，孵育15-30分鐘;⑤裂解紅細(xì)胞：加入2ml 1X Lysing Solution，室溫避光10分鐘，1000rp/m離心5分鐘，棄上清;加入3ml PBS（含0.5%BSA），混勻，1000rp/m離心5分鐘，棄上清;加入500ul PBS懸浮細(xì)胞，待測。（2）上機(jī)檢測。（3）結(jié)果分析：采用國際通用CD45/SSC設(shè)門法，分析目的細(xì)胞群的各個(gè)抗原表達(dá)情況，對白血病/淋巴瘤分型和亞型進(jìn)行判定。（4）報(bào)告生成：使用CD45/SSC設(shè)門法，區(qū)分正常細(xì)胞群和異常細(xì)胞群;根據(jù)正常細(xì)胞群作為內(nèi)對照，判定異常細(xì)胞表達(dá)抗原的陰陽性及強(qiáng)度變化;對異常細(xì)胞群進(jìn)行免疫表型分析，最后得出結(jié)論。質(zhì)量控制：取100ul IMMUNOTROL進(jìn)行抗體標(biāo)記，與常規(guī)樣品相同步驟上機(jī)檢測，參考正常值范圍，判斷質(zhì)控結(jié)果[4，5，6]。FCM陽性：腰穿一次成功無明顯組織損傷，腦脊液無混血，可檢測到白血病細(xì)胞免疫表型;若腦脊液混血或是血性腦脊液，F(xiàn)CM白血病細(xì)胞免疫表型高于外周血幼稚細(xì)胞比例。FCM陰性：腰穿一次成功無損傷，腦脊液FCM未發(fā)現(xiàn)異常白血病細(xì)胞免疫表型;腦脊液混血但腦脊液FCM異常免疫表型低于外周血幼稚細(xì)胞比例。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用百分率表示，并采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.01為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 FCM以及CC共同檢測116例ALL患者

FCM檢測有22例發(fā)現(xiàn)異常表型細(xì)胞，陽性率為18.97%。經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析，僅1例發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞，其陽性率為0.86%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.642，P<0.01），見表3。

2.2 FCM以及CC共同檢測178例ANLL患者

FCM檢測有13例發(fā)現(xiàn)異常表型細(xì)胞，陽性率為7.30%。經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析，僅1例發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞，其陽性率為0.56%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.353，P<0.01），見表4。

3.討論

中樞神經(jīng)系統(tǒng)是白血病細(xì)胞的一個(gè)避護(hù)所，白血病潛藏其中可以逃避系統(tǒng)化療藥物，在引入有效預(yù)防性中樞神經(jīng)系統(tǒng)治療之前，高達(dá)60%的急性淋巴細(xì)胞白血病患者已經(jīng)并發(fā)了首次中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病。因此，準(zhǔn)確檢測和鑒定腦脊液中的白血病細(xì)胞對于深入了解白血病的發(fā)病機(jī)制和開發(fā)更好、更特異的中樞神經(jīng)系統(tǒng)導(dǎo)向療法至關(guān)重要[7]。而腦脊液流式細(xì)胞術(shù)的檢測對于急性白血病合并中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病的預(yù)防和診斷價(jià)值也逐漸得到凸顯。

本研究結(jié)果和國內(nèi)的一些進(jìn)行回顧性研究和前瞻性研究都說明了FCM在CNSL中已經(jīng)具有著重要的應(yīng)用和臨床意義，是腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查的一個(gè)重要補(bǔ)充方法[8，9，10，11]。FCM聯(lián)合腦脊液常規(guī)、生化及CC檢測可以提高CNSL診斷的陽性率[12]。腦脊液FCM檢測陽性的患者建議按CNSL處理，并提出盡早進(jìn)行異基因造血干細(xì)胞移植治療[13]。

國外相關(guān)研究均顯示腦脊液流式細(xì)胞術(shù)相比細(xì)胞形態(tài)學(xué)更具優(yōu)勢，可作為重要補(bǔ)充檢測[14]。且FCM在發(fā)現(xiàn)早期無明顯癥狀的中樞神經(jīng)運(yùn)動系統(tǒng)浸潤中，具有著更強(qiáng)的早期臨床診斷優(yōu)越性。報(bào)告結(jié)果表明[15]，在高度懷疑或是考慮診斷早期中樞神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)浸潤的急性白血病患者中，與腦脊液CC檢查相比，F(xiàn)CM的陽性檢出率可以較其增高至少2-3倍。已有多項(xiàng)研究報(bào)告和臨床證明[2]，在診斷成人急性淋巴細(xì)胞白血病患者中，流式細(xì)胞術(shù)可以高靈敏度地檢測隱匿性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病（FCM陽性和CC陰性的狀態(tài)），并且隱匿性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的陽性狀態(tài)與不良結(jié)果相關(guān)。FCM可以在診斷時(shí)更精確地識別和量化中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累患者的數(shù)量，這對疾病的臨床病程和預(yù)后有顯著影響，從而進(jìn)一步細(xì)化當(dāng)前的診斷風(fēng)險(xiǎn)分層過程。這種精細(xì)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)評估應(yīng)該成為所有患者就診時(shí)檢查的常規(guī)工具。

綜上所述，流式細(xì)胞術(shù)是一種對惡性血液系統(tǒng)疾病研究高度敏感的技術(shù)，腦脊液FCM在急性白血病并發(fā)CNSL中具備重要的臨床預(yù)測診斷價(jià)值。

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