劉曉燕

摘 要：建立高效液相色譜法檢測食品中甜蜜素的分析方法。利用甜蜜素在強酸環(huán)境下經(jīng)過衍生、萃取等工藝處理，采用高效液相色譜分離。結(jié)果表明，在1.0～10.0 mg/L范圍內(nèi)，甜蜜素標準溶液線性回歸方程y=3 896.1x+1 668.3，相關(guān)系數(shù)為0.999 3。樣品添加回收率為84.3%～105.0%，測定結(jié)果的相對標準偏差（n=6）1.66%～1.81%，檢出限為0.5 mg/kg。該方法快速、簡便，在食品檢驗中具有實際應用價值。

關(guān)鍵詞：甜蜜素;衍生;液相色譜

甜蜜素，化學名為環(huán)己基氨基磺酸鈉，是一種應用廣泛的食品添加劑[1]。我國國家標準《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》（GB 2760—2014）[2]中對甜蜜素的添加種類、添加量做了規(guī)定，但市場上超量、超范圍使用甜蜜素的情況經(jīng)常發(fā)生。目前《食品安全國家標準 食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定》（GB 5009.97—2016）[3]的檢測方法主要是液質(zhì)串聯(lián)質(zhì)譜法、氣相色譜法和液相色譜法。本文在酸性條件下對樣品進行提取，利用次氯酸鈉衍生將甜蜜素轉(zhuǎn)化為N，N-二氯環(huán)己烷，以正庚烷萃取后用高效液相色譜法測定，減少了干擾，方法簡單、快速、檢出限低。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀配二極管陣列（PDA）檢測器;分析天平;恒溫水浴鍋;離心機;0.22 μm針頭微孔濾膜過濾器;超聲波振蕩器;艾杰爾ASB-C18色譜柱：250 mm×4.6 mm，5.0 μm。

試劑：甜蜜素標準品（10 mg/mL）;硫酸、次氯酸鈉、鹽酸、碳酸氫鈉為分析純試劑;乙腈、正庚烷、甲醇為色譜純試劑;水為超純水。

1.2 供試樣品

面包，購自超市。

1.3 色譜條件

LC檢測器為PDA;實驗過程采用乙腈+水（70%+30%）以1.0 mL/min的流速洗脫;色譜柱為艾杰爾ASB-C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）;在波長為314 nm、柱溫為40 ℃的條件下進樣;進樣量為10 μL。

1.4 標準溶液的制備

準確移取濃度為10 mg/mL的標準物質(zhì)溶液1.0 mL，用水定容至10 mL配制成甜蜜素標準儲備液1 000 μg/mL。

甜蜜素標準曲線的制備，準確移取甜蜜素標準中間液0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL和1.0 mL于10 mL容量瓶中制成濃度為1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L、8.0 mg/L和10 mg/L的標準使用溶液，用于衍生后，測定。

1.5 標準曲線工作液的衍生

將制備好的標準曲線工作液10 mL進行衍生。先加入5%次氯酸鈉溶液2.0 mL后，再加入正庚烷6.0 mL，硫酸溶液

3.0 mL，渦旋混勻靜止后待分層，除去水層，在正庚烷層加入5%碳酸氫鈉溶液25 mL，渦旋混勻靜止取上層經(jīng)有機濾膜（0.22 μm）過濾，上機檢測。

1.6 樣品的提取

稱取5 g樣品（精確到0.01 g）于塑料離心管中，準確加入25mL 0.1 mol/L的HCL溶液，超聲30 min后加入5 mL正己烷劇烈振蕩用于除去樣品中的油脂，5 000 r/min離心5 min，取出水層后備用。

1.7 樣品的衍生

取樣品10 mL，制備后按照標準曲線衍生方法進行同樣操作。渦旋混勻靜止取上層經(jīng)有機濾膜（0.22 μm）過濾，上機檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶液的選擇

直接用水提取會提取和目標物相似的結(jié)構(gòu)化合物，衍生后會出現(xiàn)雜亂峰影響判斷。實驗發(fā)現(xiàn)酸化水溶液和正己烷的混合溶液提取效果最好，部分樣品內(nèi)含有油脂，在提取樣品的過程中會產(chǎn)生油脂包裹化合物的情況。以面包樣品為基質(zhì)添加水平為2.5 mg/kg的標準溶液進行實驗，不同溶劑的回收率差異見表1。

2.2 色譜條件的選擇

將甜蜜素的衍生物標準溶液在紫外分光光度計上200～350 nm的范圍內(nèi)進行掃描測定，綜合考慮吸收峰值、干擾峰等因素，最終選取檢測波長為314 nm。此峰值基線穩(wěn)定、吸收值高且峰型滿意。

流動相的選擇，比較了不同比例的甲醇︰水（85%+15%，V︰V）、乙腈︰水（90%+10%，V︰V）、甲醇︰水（70%+30%，V︰V）、乙腈︰水（70%+30%，V︰V），發(fā)現(xiàn)乙腈︰水（70%+30%，V︰V）雜質(zhì)干擾小，基線處于平穩(wěn)的狀態(tài)。經(jīng)液相色譜分離后，甜蜜素的衍生物N，N-二氯環(huán)己胺能得到良好的分離，保留時間為6.895 min，峰形滿意。如圖1所示。

2.3 線性范圍和檢出限

對衍生后1.0 mg/L、2.0 mg/L、5.0 mg/L、8.0 mg/L和10 mg/L甜蜜素標準工作曲線進行測定，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。標準曲線如圖2所示。從標準曲線上得出甜蜜素衍生物標準溶液的峰面積與濃度在1.0～10 mg/L范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，其線性回歸方程

y=3 896.1x+1 668.3，相關(guān)系數(shù)為0.9 993，外標法定量，方法的檢出限為0.5 mg/kg。

2.4 樣品測定

從圖3可以看出，面包中不含有甜蜜素衍生物，在2.5～5.0 min有較強的溶劑峰，基線比較平穩(wěn)，沒有其他干擾。

2.5 方法準確度和精密度

稱取已處理的樣品5.0 g，添加100.0 mg/kg的甜蜜密標準中間溶液。平行測定6次，測定數(shù)據(jù)見表3，結(jié)果表明該面包樣品加標回收率范圍84.3%～105.0%，相對標準偏差（RSD）在1.66%～1.81%。

3 結(jié)論

本實驗在酸性條件下對樣品進行提取，利用次氯酸鈉將食品中的甜蜜素轉(zhuǎn)化為N，N-二氯環(huán)己胺，經(jīng)正庚烷提取后用高效色譜法測定。此方法前處理操作簡單，結(jié)果穩(wěn)定且準確性高、重現(xiàn)性好，適用于食品中甜蜜素的檢測。

參考文獻

[1]邵鐵峰，李雪珉，陳勤偉，等.高效液相色譜法測定酒中的甜蜜素[J].中國釀造.2004（12）：31-32.

[2]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品國家安全 食品添加劑使用標準：GB 2760—2014[S].北京：中國標準出版社，2014.

[3]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.食品安全國家標準 食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定：GB 5009.97-2016[S].北京：中國標準出版社，2017.