周勝?gòu)?qiáng) 李 博 王 琦 周春吉 劉 芳 鄧奕輝

（1.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410006；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208；3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007；4.南華大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 衡陽(yáng)421001）

腦梗死急性期時(shí)間窗內(nèi)靜脈溶栓、機(jī)械取栓是目前西醫(yī)治療本病的有效方法，但此方法存在治療時(shí)間窗窄、出血風(fēng)險(xiǎn)高等缺點(diǎn)，臨床獲益者不到5%［1］。對(duì)于遺留肢體癱瘓、麻木等神經(jīng)功能障礙的患者，仍然缺乏安全、高效的治療措施，是目前醫(yī)學(xué)界亟待解決的難點(diǎn)［2］。而傳統(tǒng)中醫(yī)藥對(duì)于本病的防治積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，有望為本病的干預(yù)開(kāi)辟新的途徑［3］。芪仙通絡(luò)方系國(guó)醫(yī)大師劉祖貽教授根據(jù)其“氣陽(yáng)主用”腦病創(chuàng)新理論研制成的中風(fēng)病效驗(yàn)方［4］，主要針對(duì)中風(fēng)病腎虛血瘀證，在補(bǔ)腎填精、活血通絡(luò)的基礎(chǔ)上加以溫補(bǔ)腎中陽(yáng)氣，經(jīng)多年臨床實(shí)踐證實(shí)有效性和安全性確切［5-6］。本研究旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，比較芪仙通絡(luò)方及其拆方對(duì)腦梗死大鼠神經(jīng)功能、梗死周邊區(qū)域缺血損傷神經(jīng)元及神經(jīng)纖維病理形態(tài)以及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)影響的差異，探討芪仙通絡(luò)方組方配伍的意義，以期佐證“氣陽(yáng)主用”創(chuàng)新理論的臨床指導(dǎo)價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性SPF級(jí)SD大鼠，體質(zhì)量（240±30）g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2016-0002。飼養(yǎng)于湖南省中醫(yī)藥研究院SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。飼養(yǎng)環(huán)境溫度（24±0.5）℃，相對(duì)濕度50%，自由飲食進(jìn)水，晝夜光照節(jié)律。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后用于實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥物與試劑 芪仙通絡(luò)方：黃芪30 g，淫羊藿15 g，枸杞子30 g，制首烏 15 g，丹參30 g，葛根 30 g，水蛭9 g，山楂15 g組成。補(bǔ)腎活血拆方：枸杞子30 g，制首烏15 g，丹參30 g，葛根 30 g，水蛭9 g，山楂15 g組成。益氣溫陽(yáng)拆方：黃芪30 g，淫羊藿15 g。中藥飲片均購(gòu)自湖南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，由藥劑科田其學(xué)主任藥師鑒定為正品，符合2015年版《中國(guó)藥典》規(guī)范。芪仙通絡(luò)方水煎后濃縮成生藥質(zhì)量濃度1.566 g/mL，補(bǔ)腎活血拆方水煎濃縮成1.161 g/mL，益氣溫陽(yáng)拆方水煎濃縮成0.405 g/mL，4℃冰箱保存?zhèn)溆?。胞磷膽堿鈉膠囊（齊魯制藥有限公司，0.1 g×40粒/盒，國(guó)藥準(zhǔn)字H20020220）生理鹽水溶解后稀釋成0.0054 g/mL的水溶液備用。甘氨酸銀染液套裝（Servicebio，貨號(hào)G1052）；Anti-BDNF Rabbit pAb（Servicebio，貨號(hào) GB11559）；Anti-GDNF Rabbit pAb（Servicebio，貨號(hào) GB11403）；Anti-NGF Rabbit pAb（Servicebio，貨號(hào)GB11143）；HRP標(biāo)記山羊抗兔（Servicebio，貨號(hào)GB23301）；免疫組化試劑盒（Servicebio，貨號(hào)G1215）；尼氏體染色液（Servicebio，貨號(hào)G1036）。

1.3 主要儀器 大腦中動(dòng)脈栓塞（MCAO）線栓（廣州佳靈生物技術(shù)有限公司，規(guī)格3600AAA）；組織脫水機(jī)（武漢俊杰電子有限公司，型號(hào)JJ-12J）；石蠟包埋機(jī)（武漢俊杰電子有限公司，型號(hào)JB-P5）；石蠟切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司，型號(hào)RM2016）；組織攤片機(jī)（浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司，型號(hào)KD-P）；微波爐（格蘭仕微波爐電器有限公司，型號(hào)P70D20TLP4）；正置光學(xué)顯微鏡（日本尼康，型號(hào)NIKON ECLIPSE E100）。

1.4 造模方法 參照課題組前期研究方法［7］，采用線栓法復(fù)制大鼠MCAO模型。大鼠造模前12 h禁食，不禁水。將大鼠10%水合氯醛腹腔注射麻醉后仰臥位固定于手術(shù)操作臺(tái)上，取頸部正中切口，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈。結(jié)扎頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈。動(dòng)脈夾夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈，于頸總動(dòng)脈上端近分叉處約4 mm處用注射器針頭刺一小孔，將直徑為0.28 mm的線栓插入頸內(nèi)動(dòng)脈，插入深度由分叉部計(jì)約18.0 mm，固定線栓，依次關(guān)閉切口。假手術(shù)組切開(kāi)皮膚，暴露頸總、頸外和頸內(nèi)動(dòng)脈，不插入線栓，其余步驟和手術(shù)組相同。大鼠清醒后，采用Longa評(píng)分法評(píng)定神經(jīng)功能［8］，評(píng)分越高，神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重，選取1～3分者納入實(shí)驗(yàn)，死亡大鼠予以隨機(jī)替補(bǔ)。

1.5 分組與給藥 將30只造模成功的大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為模型組、芪仙通絡(luò)全方組（補(bǔ)腎活血、益氣溫陽(yáng)藥）、拆方1組（補(bǔ)腎活血藥）、拆方2組（益氣溫陽(yáng)藥）、胞磷膽堿組，每組6只。另設(shè)假手術(shù)組6只。于MCAO術(shù)后第3天開(kāi)始灌胃干預(yù)，芪仙通絡(luò)全方組給藥劑量為15.66 g/（kg·d），拆方1組為11.61 g/（kg·d），拆方2組為4.05 g/（kg·d），胞磷膽堿組為0.054 g/（kg·d），假手術(shù)組和模型組予以蒸餾水灌胃，連續(xù)給藥12 d。

1.6 標(biāo)本采集與檢測(cè) 各組大鼠在末次灌胃后4 h，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，打開(kāi)胸腔暴露心臟，剪開(kāi)右心耳，同時(shí)夾閉腹主動(dòng)脈，將注射器針頭經(jīng)心尖插入至主動(dòng)脈端并固定好，用100 mL生理鹽水通過(guò)注射器快速注入，待心臟無(wú)血污流出及前爪、肺部顏色變成白色后，改用100 mL 4%多聚甲醛灌注，然后開(kāi)顱取腦，去除小腦、腦干及嗅球后，將大腦置于4%多聚甲醛中固定，4℃冰箱保存，用于尼氏染色、鍍銀染色和免疫組化檢測(cè)。1）神經(jīng)功能評(píng)價(jià)。分別于造模后第3天、第7天、第14天采用改良神經(jīng)功能缺損評(píng)分（mNSS）［9］評(píng)定大鼠的神經(jīng)功能，對(duì)大鼠的運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、反射和平衡能力進(jìn)行全面評(píng)價(jià)，總分為18分，分值越高代表神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重。2）神經(jīng)元及神經(jīng)纖維病理形態(tài)觀察。于造模后第14天通過(guò)尼氏染色檢測(cè)神經(jīng)元尼氏小體含量，觀察梗死周邊區(qū)域神經(jīng)元病理形態(tài)改變，通過(guò)鍍銀染色觀察神經(jīng)纖維病理形態(tài)改變。腦組織常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋，4 μm連續(xù)冠狀切片，60℃烤片2 h后常規(guī)脫蠟至水，然后將腦組織切片放入尼氏體染色液染色2～5 min或甘氨酸銀染液中染色8～10 min，脫水后，中性樹(shù)膠封片。每張切片在光學(xué)顯微鏡下高倍鏡視野（400倍）觀察梗死周邊區(qū)域，每只大鼠分別隨機(jī)取1張切片，每張切片觀察5個(gè)視野，拍照采集圖像，采用Image Pro Plus 6.0圖像分析軟件計(jì)算單位面積尼氏小體或神經(jīng)纖維積分光密度，取平均光密度（MOD）值對(duì)尼氏小體或神經(jīng)纖維進(jìn)行病理形態(tài)定量分析。3）腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）表達(dá)檢測(cè)。于造模后第14天通過(guò)免疫組化檢測(cè)梗死周邊區(qū)域神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF、GDNF、NGF表達(dá)水平。將常規(guī)脫蠟至水的腦組織切片，置于EDTA（PH9.0）抗原修復(fù)液中進(jìn)行抗原修復(fù)20 min，放入3%雙氧水溶液室溫避光孵育25 min，滴加3%BSA室溫封閉30 min，加入Anti-BDNF Rabbit pAb（1∶200）、Anti-GDNF Rabbit pAb（1∶200）、Anti-NGF Rabbit pAb（1∶200），4 ℃冰箱孵育過(guò)夜，滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗（HRP標(biāo)記），室溫孵育50 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，脫水后中性樹(shù)膠封片。每張切片在光學(xué)顯微鏡下高倍鏡視野（400倍）觀察梗死周邊區(qū)域，每只大鼠隨機(jī)取1張切片，每張切片觀察5個(gè)視野，拍照采集圖像，采用Image Pro Plus 6.0圖像分析軟件計(jì)算神經(jīng)纖維MOD值，進(jìn)行病理形態(tài)定量分析。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠MCAO術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)mNSS比較 見(jiàn)表1。大鼠腦梗死造模后，模型組mNSS明顯升高，經(jīng)芪仙通絡(luò)方及其拆方、陽(yáng)性藥胞磷膽堿干預(yù)后，各給藥組（第7天、第14天）mNSS均明顯低于模型組（P＜0.01），而分別與拆方1組、拆方2組及胞磷膽堿組比較，芪仙通絡(luò)全方組（第7天、第14天）mNSS顯著降低（P＜0.05）。

表1 各組大鼠MCAO術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)mNSS比較（分，±s）

表1 各組大鼠MCAO術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)mNSS比較（分，±s）

注：與模型組比較，**P＜0.01；與芪仙通絡(luò)全方組比較，△P＜0.05。下同。

組別n 3 d 7 d 14 d假手術(shù)組模型組芪仙通絡(luò)全方組拆方1組拆方2組胞磷膽堿組6 6 6 6 6 6 0.00±0.00 9.52±0.43 9.46±0.32 9.37±0.38 9.46±0.27 9.54±0.22 0.00±0.00 8.95±0.21 6.47±0.28**7.07±0.26**△7.98±0.32**△8.07±0.13**△0.00±0.00 6.91±0.38 4.36±0.19**5.32±0.37**△6.05±0.24**△6.11±0.52**△

2.2 各組大鼠梗死周邊區(qū)域神經(jīng)元及神經(jīng)纖維病理形態(tài)比較 如圖1、表2所示，尼氏染色可見(jiàn)假手術(shù)組神經(jīng)元結(jié)構(gòu)清晰，胞漿內(nèi)分布有深藍(lán)色片狀的尼氏小體，以胞漿周邊分布最為密集。模型組梗死周邊區(qū)域神經(jīng)元結(jié)構(gòu)模糊，尼氏小體含量明顯減少，以細(xì)小顆粒為主，著色不均。各給藥組梗死周邊區(qū)域尼氏小體的含量均有不同程度的增加，胞漿著色較深。經(jīng)定量分析，尼氏小體MOD值均明顯高于模型組（P＜0.01），而與拆方1組、拆方2組及胞磷膽堿組分別比較，芪仙通絡(luò)全方組尼氏小體MOD值最高（P＜0.05）。如圖2、表2所示，鍍銀染色可見(jiàn)假手術(shù)組神經(jīng)纖維形態(tài)完整，分布密集，排列有序，距離較長(zhǎng)，呈黑色，背景金黃色；模型組梗死周邊區(qū)域可見(jiàn)大量神經(jīng)纖維斷裂，結(jié)構(gòu)破壞，散亂無(wú)章，參差不齊，彎曲收縮球形，僅極少數(shù)保持連續(xù)完整；各給藥組梗死周邊區(qū)域神經(jīng)纖維均有不同程度的芽生修復(fù)，經(jīng)定量分析，神經(jīng)纖維MOD值均明顯高于模型組（P＜0.01），而與拆方1組、拆方2組及胞磷膽堿組分別比較，芪仙通絡(luò)全方組神經(jīng)纖維MOD值最高（P＜0.05）。

表2 各組大鼠梗死周邊神經(jīng)元及神經(jīng)纖維病理形態(tài)比較（±s）

表2 各組大鼠梗死周邊神經(jīng)元及神經(jīng)纖維病理形態(tài)比較（±s）

組別假手術(shù)組模型組芪仙通絡(luò)全方組拆方1組拆方2組胞磷膽堿組n 6 6 6 6 6 6尼氏小體0.016±0.005 0.004±0.001 0.014±0.006**0.010±0.002**△0.007±0.003**△0.005±0.001**△神經(jīng)纖維0.187±0.012 0.109±0.017 0.167±0.011**0.145±0.018**△0.131±0.012**△0.133±0.014**△

圖1 各組大鼠腦梗死周邊神經(jīng)元病理形態(tài)（尼氏染色，400倍）

圖2 各組大鼠腦梗死周邊神經(jīng)纖維病理形態(tài)（鍍銀染色，400倍）

2.3 各組大鼠梗死周邊神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)比較 如圖3、表3所示，BDNF、GDNF及NGF主要表達(dá)位于細(xì)胞間質(zhì)及細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色，細(xì)胞核為藍(lán)色；假手術(shù)組可見(jiàn)BDNF、GDNF及NGF一定量表達(dá)，模型組表達(dá)稍增加；與模型組比較，各給藥組BDNF、GDNF及NGF表達(dá)均顯著增加（P＜0.01）；與拆方1組、拆方2組及胞磷膽堿組分別比較，芪仙通絡(luò)全方組BDNF、GDNF及NGF表達(dá)增加程度最顯著（P＜0.05）。

表3 各組大鼠梗死周邊神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)比較（±s）

表3 各組大鼠梗死周邊神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)比較（±s）

組別假手術(shù)組模型組芪仙通絡(luò)全方組拆方1組拆方2組胞磷膽堿組n 6 6 6 6 6 6 BDNF 0.008±0.002 0.012±0.003 0.018±0.004**0.016±0.002**△0.014±0.003**△0.014±0.001**△GDNF 0.009±0.002 0.011±0.003 0.019±0.003**0.015±0.001**△0.012±0.002**△0.013±0.001**△NGF 0.002±0.000 0.004±0.001 0.015±0.002*0.010±0.001**△0.007±0.002**△0.008±0.003**△

圖3 各組大鼠腦梗死周邊神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)（IHC染色，400倍）

3 討 論

芪仙通絡(luò)方由黃芪、淫羊藿、制首烏、枸杞子、丹參等藥組成。方中黃芪為君藥，大補(bǔ)元?dú)?；淫羊藿、制首烏、枸杞子為臣藥，淫羊藿佐君藥黃芪益氣溫陽(yáng)、溫補(bǔ)腎中陽(yáng)氣，配伍制首烏、枸杞子補(bǔ)腎填精，達(dá)到助陽(yáng)生陰之用；丹參等活血通絡(luò)為佐藥。諸藥合用，共奏益氣溫陽(yáng)、補(bǔ)腎活血之功。經(jīng)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，目前針對(duì)腦梗死腎虛血瘀證的治療，廣大醫(yī)家大多采用單純補(bǔ)腎填精、活血通絡(luò)法或補(bǔ)腎益氣活血法或補(bǔ)腎活血基礎(chǔ)上加以附子、干姜等剛猛的溫陽(yáng)藥治療［10-13］，而在補(bǔ)腎填精、活血通絡(luò)藥的基礎(chǔ)上，加以柔和的益氣溫陽(yáng)藥、意在少火生氣者則未見(jiàn)報(bào)道。課題組前期臨床研究表明，芪仙通絡(luò)方能顯著改善腦梗死恢復(fù)及后遺癥期患者的神經(jīng)功能，提高其日常生活活動(dòng)能力，改善腎虛血瘀證中醫(yī)證候，且未見(jiàn)任何不良反應(yīng)發(fā)生［5］。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，本方能顯著促進(jìn)MCAO大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)，上調(diào)缺血海馬區(qū)BDNF表達(dá)，抑制膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度活化，促進(jìn)內(nèi)源性神經(jīng)再生［7］。結(jié)果說(shuō)明“氣陽(yáng)主用”腦病創(chuàng)新理論指導(dǎo)下的芪仙通絡(luò)方在治療腦梗死后神經(jīng)功能障礙方面優(yōu)勢(shì)明顯，組方配伍獨(dú)特，臨床實(shí)用性較強(qiáng)。

國(guó)際腦卒中治療臨床前研究指南指出，多重指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)MCAO模型很重要，組織學(xué)和行為學(xué)的結(jié)果都應(yīng)該評(píng)價(jià)［14］。首先在行為學(xué)層面，由于大腦中動(dòng)脈供血的區(qū)域包括額頂顳葉皮質(zhì)、邊緣系統(tǒng)、丘腦、單側(cè)豆?fàn)詈思皟?nèi)囊，依據(jù)缺血部位及程度的不同，可表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、反射、平衡或認(rèn)知功能受損。而目前廣泛采用的動(dòng)物行為學(xué)評(píng)價(jià)主要有Longa評(píng)分法［8］和Bederson分級(jí)法［15］。這些評(píng)分法雖然操作簡(jiǎn)便，但相對(duì)較為粗糙、主觀，僅評(píng)價(jià)運(yùn)動(dòng)功能，有其局限性。而mNSS包括運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、反射和平衡4項(xiàng)測(cè)試，能夠較全面反映腦損傷及恢復(fù)的程度。其次在組織學(xué)層面，尼氏小體是神經(jīng)元活性的指標(biāo)，由粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及游離核糖核蛋白體共同構(gòu)成，主要功能是合成蛋白質(zhì)。生理情況下，尼氏小體的數(shù)量可反映神經(jīng)細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的能力，而當(dāng)神經(jīng)元受損等病理狀態(tài)下，胞質(zhì)內(nèi)的尼氏小體可溶解、減少或消失，如細(xì)胞不死亡，則尼氏小體可逐步恢復(fù)。因此通過(guò)尼氏小體染色密度大小和深淺可以反映神經(jīng)元的功能狀態(tài)［16］。鍍銀染色又稱甘氨酸銀染色，能將神經(jīng)細(xì)胞軸突和樹(shù)突、神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)原纖維等染成黑色，切片的其他組織及背景呈現(xiàn)金黃色，常用于研究神經(jīng)纖維的病理改變，可用來(lái)了解神經(jīng)纖維變性或修復(fù)程度［17］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，造模后腦梗死大鼠肢體運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、平衡等神經(jīng)功能均受損，梗死周邊組織出現(xiàn)明顯的缺血損傷病理改變，而芪仙通絡(luò)方及其補(bǔ)腎活血藥拆方、益氣溫陽(yáng)藥拆方以及胞磷膽堿干預(yù)均可使其病理形態(tài)發(fā)生逆轉(zhuǎn)，梗死周邊區(qū)域神經(jīng)元尼氏小體含量增多，神經(jīng)纖維均有不同程度的芽生修復(fù)，其中又以補(bǔ)腎活血、益氣溫陽(yáng)立法的芪仙通絡(luò)全方組作用最明顯，提示補(bǔ)腎活血藥與益氣溫陽(yáng)藥配伍使用，可產(chǎn)生協(xié)同作用，間接佐證了“氣陽(yáng)主用”創(chuàng)新理論對(duì)于治療腦梗死后神經(jīng)功能障礙具有的重要臨床指導(dǎo)價(jià)值。

神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子是由多種細(xì)胞分泌的一類對(duì)外周和中樞發(fā)揮營(yíng)養(yǎng)作用的物質(zhì)，促進(jìn)和支持靶細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、修復(fù)和存活，調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)的代謝和功能。BDNF、GDNF以及NGF是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族的重要成員，是腦內(nèi)重要的神經(jīng)修復(fù)促進(jìn)因子，在腦缺血損傷修復(fù)過(guò)程中能夠在突觸水平、軸突水平和細(xì)胞水平上調(diào)節(jié)神經(jīng)的再生重塑［18］。本研究顯示，假手術(shù)組可見(jiàn)BDNF、GDNF及NGF一定量表達(dá)，模型組表達(dá)稍增加，而各給藥組表達(dá)均較模型組明顯增加，其中芪仙通絡(luò)全方組表達(dá)增加程度最顯著，表明芪仙通絡(luò)方及其拆方均能顯著促進(jìn)腦梗死大鼠梗死周邊區(qū)域神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF、GDNF、NGF蛋白表達(dá)，其中芪仙通絡(luò)全方作用優(yōu)于單純補(bǔ)腎活血藥和益氣溫陽(yáng)藥，提示腦缺血后大鼠腦組織可反應(yīng)性增加梗死周邊組織神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF、GDNF、NGF的合成和分泌，但這種能力非常有限，而芪仙通絡(luò)方全方較拆方更能顯著上調(diào)這種趨勢(shì)。因此，通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)可能是芪仙通絡(luò)方及其拆方修復(fù)缺血損傷神經(jīng)元及神經(jīng)纖維、改善受損神經(jīng)功能的分子機(jī)制。

綜上所述，本研究從動(dòng)物整體水平證實(shí)了芪仙通絡(luò)方及其拆方治療腦梗死后神經(jīng)功能障礙的療效，同時(shí)初步揭示了其分子機(jī)制，并為中醫(yī)藥運(yùn)用“氣陽(yáng)主用”腦病創(chuàng)新理論治療中風(fēng)病提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。然而，梗死周邊區(qū)域病理形態(tài)的改善是否是由于神經(jīng)元自身修復(fù)或再生或軸突-髓鞘重塑則有待進(jìn)一步深入研究。