林城通 石文 陳林 黃愛軍 林海標

廣東省中醫(yī)院檢驗醫(yī)學部，廣州 510000

硫酸脫氫表雄酮（dehydroepiandrosterone sulfate，DHEA-S）是臨床評價腎上腺功能的指標之一，是由腎上腺合成分泌的類固醇激素。高水平DHEA-S 可提示多囊卵巢綜合征、腎上腺皮質(zhì)良性腫瘤或者惡性腫瘤。DHEA-S 可部分新陳代謝為活性雄激素以及雌激素，DHEA-S 水平增高可導致女性出現(xiàn)閉經(jīng)和男性化癥狀，和代表促卵泡生成素（FSH）、促黃體生成素（LH）、降鈣素、雌激素和睪酮同時測定，以幫助診斷多囊卵巢綜合征，排除其他引起不孕、閉經(jīng)和多毛癥的原因。同時也有助于評估腎上腺功能，和區(qū)分腎上腺對雄激素分泌過多狀態(tài)由睪丸還是或卵巢引起的。性激素結(jié)合球蛋白（sex hormone-binding globulin，SHBG）是在結(jié)合狀態(tài)下以無生物學活性形式轉(zhuǎn)運入血液，由肝細胞合成的一種球蛋白?？山Y(jié)合雌二醇、睪酮和雙氫睪酮，并調(diào)控女性機體中的性激素濃度，在多種婦產(chǎn)科疾病的發(fā)生發(fā)展中均有重要作用［1］。其可用于診斷多毛癥、雄激素過多癥，用于評價不孕婦女的排卵功能以及甲狀腺功能。

本研究依據(jù)ISO15189《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則》要求，做好實驗室各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制［2］，參考美國臨床實驗室標準協(xié)會（CLSI）頒布的EP 系列文件，從測量原裝質(zhì)控品和臨床樣本出發(fā)，使用雅培i1000SR于2020年3月對各質(zhì)控品和臨床樣本進行DHEA-S、SHBG的非隨機對照實驗性研究，對DHEA-S 和SHBG 進行非隨機對照實驗性研究，建立性能驗證方案［3-4］，對二者進行精密度、正確度以及線性范圍性能驗證和評價，為臨床診斷和治療評估提供相應的數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 試劑儀器 美國原裝的雅培DHEA-S 測定試劑盒，批號01620H000；美國原裝的雅培SHBG測定試劑盒，批號00420I000。儀器為美國雅培i1000SR。

1.2 驗證材料 美國雅培原裝DHEA-S 校準品（批號02220F000）、SHBG校準品（批號04220I000），用于測量校準和試劑穩(wěn)定性驗證的。美國伯樂公司的免疫質(zhì)控品：水平1、水平2（批號40362），用于精密度驗證。來自2020年的國家衛(wèi)生健康委員會臨床檢驗中心內(nèi)分泌室間質(zhì)評質(zhì)控品5 份（批號分別為20201、20202、20203、20204、20205），用于正確度驗證。2020 年3 月分別收集的DHEA-S 和SHBG的高值和低值血清標本，用于線性范圍驗證。

1.3 方法 本次實驗室人員應熟悉性能驗證方案并且經(jīng)過專業(yè)培訓具備一定資質(zhì)，能按操作說明書的要求對儀器進行運行、校準和保養(yǎng)等正常操作，同時可根據(jù)ISO15189要求把握好實驗室各個環(huán)節(jié)的質(zhì)控。

1.3.1 精密度驗證 依據(jù)EP15-A3［5］來設計實驗：在當天質(zhì)控在控和儀器狀態(tài)良好的前提下，使用2 個濃度水平的伯樂免疫類質(zhì)控品，每天分析1 批，每批每個水平進行5次重復測定，連續(xù)測定5 d，共需水平1和水平2質(zhì)控品，各25 份，每份200 μl。代入公式最終計算DHEA-S、SHBG的均值、標準差和變異系數(shù)。當精密度小于廠家聲稱的時，通過驗證。

1.3.2 正確度驗證 依據(jù)EP15-A3［2］來設計實驗：取2020年國家衛(wèi)生健康委員會臨床檢驗中心內(nèi)分泌項目室間質(zhì)評5 份質(zhì)控品（各5 份，每份200 μl）檢測結(jié)果，至少測定2 個水平。實驗前充分混勻分析物，用實驗方法重復測定5 次，將檢測結(jié)果與說明書標示值或靶值進行比對，參考CNAS-CL38 醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床化學檢驗領域的應用說明，計算DHEA-S 和SHBG 與靶值的偏倚，以1/2總允許誤差（TEa）作為評價標準。

1.3.3 線性范圍驗證 參考CLSI EP6-A 文件［5］，選用2020 年收集的高值血清樣本H（濃度接近廠家說明書的高限值）和低值樣本L（濃度接近廠家說明書的低限值）進行驗證。樣本基質(zhì)應與臨床實驗樣本相似，所選用的濃度水平應覆蓋臨床重要評價濃度，如分析測量的最低限、最高限、不同的醫(yī)學決定水平等。將各2.5 ml 高值血清樣本H 和低值樣本L 按照L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、H 關系各自配置混合成5個濃度，每個濃度各1.0 ml，分別測定3次。然后將雅培i1000SR所測量均值和靶值進行線性回歸分析，得出實測值與理論值的線性關系公式Y(jié)=aX+b，并計算相關系數(shù)（R2），將得到的線性范圍與廠家聲稱的進行比較，要求得到的相關系數(shù)R2≥0.95。

1.4 統(tǒng)計學方法 根據(jù)EP 系列文件要求，采用Excel對數(shù)據(jù)進行處理和分析。采用SPSS19.0軟件來進行統(tǒng)計分析，最終要求以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 精密度結(jié)果 分別對DHEA-S 和SHBG 5 個批次每個水平分別進行5 次重復測定?？傻玫紻HEA-S水 平1 均值為152.82 μg/dL，得 到DHEA-S 水平2均值為595.72 μg/dL。由表1 可知，DHEA-S 濃度水平1 驗證的批內(nèi)、總變異系數(shù)分別為1.20%、3.68%，DHEA-S 濃度水平2驗證的批內(nèi)CV、總CV分別為1.48%，1.70%均小于廠家聲稱的6.25%的批內(nèi)CV 和8.33%的總CV，最后可得結(jié)論，精密度驗證通過。由表1 可知，SHBG 水平1 均值為39.73 nmol/L，SHBG 水平2 均值為254.02 nmol/L。SHBG濃度水平1 驗證的批內(nèi)CV、總CV 分別為4.00%，4.94%，SHBG水平2驗證的批內(nèi)CV、總CV 分別為0.80%，2.03%，均小于廠家聲稱的6.25%的批內(nèi)CV和8.33%的總CV，最后可得結(jié)論，精密度驗證通過［6］。

表1 雅培i1000SR全自動化學發(fā)光分析儀檢測DHEA-S、SHBG的精密度結(jié)果

2.2 正確度結(jié)果 由表2 可知DHEA-S的5 份質(zhì)控品測量均值分別為：7.42、2.76、13、21.79 和2.7，對應靶值為7.98、2.96、13.65、20.81 和2.77，計算其驗證偏差可得結(jié)果分別為-7.0%、-6.8%、-4.8%、4.7%和-2.5%，結(jié)果均小于衛(wèi)生部臨床檢驗中心2020年室間質(zhì)評所采用的TEa的1/2，即小于要求范圍12.5%，認為新檢測系統(tǒng)DHEA-S的偏倚屬臨床可接受水平，可用于臨床［7］。由表2 可知SHBG的5 份質(zhì)控品測量均值分別為：33.6、10.5、34.7、55.2和9.5，對應靶值為35.20、10.90、35.20、56.6 和9.70，計算其驗證偏差可得結(jié)果分別為-4.5%、-3.7%、-1.4%、-2.5%和-2.1%，結(jié)果均小于衛(wèi)生部臨床檢驗中心2020年室間質(zhì)評所采用的TEa的1/2，即小于要求范圍12.5%，認為新檢測系統(tǒng)SHBG的偏倚屬臨床可接受水平，可用于臨床［7］。

表2 雅培i1000SR全自動化學發(fā)光分析儀檢測DHEA-S、SHBG的正確度結(jié)果

2.3 線性范圍結(jié)果 從表3 可見，DHEA-S 最終驗證的線性范圍是5.10～1 301.07 μg/dL。將DHEA-S 5個濃度L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、H的測量均值結(jié)果5.10、334.33、650.40、981.03、1 301.07 μg/dL 與靶值4.00、378.00、752.00、1126.00、1 450.00 μg/dL 進行線性回歸分析，得出實測值與理論值的線性關系，由圖1 可見稀釋度區(qū)間統(tǒng)計結(jié)果為Y=0.889 1X-5.327 7，R2=0.999 3，結(jié)果大于0.995。測定的DHEA-S 線性范圍在廠家聲明范圍之內(nèi)，驗證結(jié)論：通過，各稀釋倍數(shù)的標本實測濃度與理論濃度的相對偏移均符合廠家聲明。從表3 可知驗證的SHBG 線性范圍是1.90～221.13 nmol/L，將SHBG 5 個濃度L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、H的測量均值結(jié)果1.90、54.60、107.53、153.67、221.13 nmol/L與靶值2.00、56.50、111.00、165.50、1 220.00 nmol/L 進行線性回歸分析。得出實測值與理論值的線性關系，由圖2 可見稀釋度區(qū)間統(tǒng)計結(jié)果為Y=0.986 3X-1.712 6，R2=0.996 6，結(jié)果大于0.995，測定的SHBG線性范圍通過，各稀釋倍數(shù)的樣本實測與理論濃度的相對偏移均符合廠家聲明［8］。

圖1 DHEA-S測定均值與靶值直線回歸圖

圖2 SHBG測量均值與靶值直線回歸圖

表3 雅培i1000SR全自動化學發(fā)光分析儀檢測DHEA-S、SHBG的線性范圍結(jié)果(%)

3 討 論

高水平的DHEA-S 可提示發(fā)生多囊卵巢綜合征、惡性腫瘤、腎上腺增生或腫瘤。低水平DHEA-S 可能由腎上腺功能紊亂或垂體機能減退-可導致調(diào)節(jié)腎上腺激素合成與分泌的垂體激素水平降低的疾病狀態(tài)引起。當女性出現(xiàn)多毛癥、閉經(jīng)或男性出現(xiàn)青春期性早熟，以及考慮雄激素分泌過多（或不足）還有需要評估腎上腺功能時可進行DHEA-S和其他激素檢測［9］。而SHBG的高低與疾病的發(fā)生發(fā)展存在一定的關系。SHBG 升高常見于肝硬化、甲狀腺功能亢進、口服避孕藥或抗癲癇藥物等情況，SHBG 降低可見于多囊卵巢綜合征、多毛癥、肢端肥大癥或甲狀腺功能減退等。通過對SHBG 進行檢驗，可為多種疾病尤其是婦產(chǎn)科疾病的診斷及確定治療方案提供參考依據(jù)，進而可以有效降低相關疾病的發(fā)病率［10］。

采用微粒子化學發(fā)光原理定量檢測DHEA-S 和SHBG的雅培i1000SR全自動化學發(fā)光分析儀與傳統(tǒng)方法相比，有著操作簡便、靈敏度高、檢測速度快、無放射污染等優(yōu)點。而良好的儀器性能和檢測方法才能保證結(jié)果的準確，雖然廠家說明書給出了雅培i2000SR相關性能指標，但是其性能參數(shù)是在國外的最適條件下完成的，與本科室水質(zhì)、電壓穩(wěn)定性、環(huán)境溫濕度、操作人員素質(zhì)等外部條件均存在差異，所以本研究在使用前依據(jù)ISO15189要求和CLSI標準文件，對其進行DHEA-S、SHBG的性能驗證。精密度和正確度可用于驗證重復測定值之間的一致程度和大批檢驗結(jié)果的均值與其真值的一致程度［11］。良好的精密度和正確度是保證分析系統(tǒng)檢驗結(jié)果準確性的前提，也是進行其他方法學評價和驗證試驗的前提［12］。

本研究結(jié)果顯示，DHEA-S 批內(nèi)變異系數(shù)為1.20%、1.48%，總變異系數(shù)為3.68%、1.70%，均小于均小于二者的室間質(zhì)評相應標準；SHBG 批內(nèi)變異系數(shù)為4.00%、0.80%，總變異系數(shù)為4.94%、2.03%，均小于二者的室間質(zhì)評相應標準；DHEA-S 和SHBG 驗證結(jié)果說明精密度高，重復性較好，驗證通過。DHEA-S 和SHBG的檢測偏倚均小于TEa的1/2，驗證結(jié)果說明二者指標正確度高，其檢測結(jié)果可靠［13］。

綜上所述，雅培i1000SR 全自動化學發(fā)光分析儀檢測DHEA-S 和SHBG 具有精密度高、正確度高、線性相關性較好等特點，結(jié)果均符合實驗室的質(zhì)量目標以及ISO15189的要求。

利益沖突作者已申明文章無相關利益沖突。