李喬，孫愛農(nóng)，廖艷婷

(中山市中心血站 檢驗(yàn)科，廣東 中山 528400)

現(xiàn)今采供血機(jī)構(gòu)采用的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)合并核酸檢測(cè)(nucleic acid testing，NAT)篩查模式能進(jìn)一步縮短檢測(cè)的“窗口期”，有效降低病原體因輸血傳播風(fēng)險(xiǎn)，保證血液的安全和質(zhì)量。但由于現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)和病原體流行變化等因素，假反應(yīng)性結(jié)果也隨之存在，從而導(dǎo)致固定獻(xiàn)血者流失、血源浪費(fèi)以及對(duì)獻(xiàn)血者生活造成困擾等一系列相關(guān)問題[1]。為保障血液安全，國(guó)家衛(wèi)生健康委頒布了血站技術(shù)操作規(guī)程(2019版)[2]，明確具體血液檢測(cè)項(xiàng)目和要求，為進(jìn)一步維護(hù)獻(xiàn)血者權(quán)益，近年來中國(guó)輸血協(xié)會(huì)又發(fā)布《血液篩查反應(yīng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)指南》[3](下稱《指南》)，指導(dǎo)和規(guī)范了獻(xiàn)血者檢測(cè)不合格后的歸隊(duì)工作。在常規(guī)兩種不同廠家ELISA試劑盒(HBsAg、抗-HCV、HIV Ag/Ab、抗-TP)檢測(cè)中，單試劑檢測(cè)有反應(yīng)性(陽性)而NAT為無反應(yīng)(陰性)的獻(xiàn)血者，其獻(xiàn)血資格暫時(shí)屏蔽，進(jìn)入獻(xiàn)血者歸隊(duì)程序。本研究通過回顧分析當(dāng)?shù)孬I(xiàn)血者歸隊(duì)情況，為獻(xiàn)血者血液檢測(cè)及歸隊(duì)措施的制定提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象選取2018年1月至2020年6月在中山市中心血站參加無償獻(xiàn)血和血液檢測(cè)ELISA項(xiàng)目單試劑檢測(cè)陽性、NAT為陰性的獻(xiàn)血者，符合《指南》者進(jìn)入獻(xiàn)血者歸隊(duì)流程，共計(jì)724名，其中男438名，平均(36.16±9.65)歲。資料來源于唐山啟奧《現(xiàn)代血站管理信息系統(tǒng)V9.0》。

1.2 試劑與儀器

1.2.1試劑 (1)ELISA檢測(cè)試劑：乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(ELISA法)(HBsAg，珠海麗珠試劑股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S10910154；廈門新創(chuàng)科技有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S10910148)；丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒(抗-HCV，珠海麗珠試劑股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20010014；北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20143014)；人類免疫缺陷病毒抗原/抗體診斷試劑盒(HIV(Ag/Ab))(北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20000024；法國(guó)伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20140049)；梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒(ELISA法)(抗-TP，珠海麗珠試劑股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20020012；廈門新創(chuàng)科技有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20000066；上?？迫A生物科技有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20010057)。其中抗-HCV試劑盒為第3代和第4代，其余均為第3代。(2)HBV、HCV、HIV(Ⅰ+Ⅱ型)核酸聯(lián)合檢測(cè)試劑盒(美國(guó)羅氏診斷產(chǎn)品有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S20181014)，核酸質(zhì)控品即標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[北京康徹思坦生物技術(shù)有限公司，GBW(E)090585，GBW(E)090576，GBW(E)090583]。嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.2.2主要儀器 全自動(dòng)加樣儀(瑞士漢米爾頓公司，型號(hào)STAR-8ch；瑞士帝肯公司，型號(hào)EVO/8D)，全自動(dòng)酶免分析儀(瑞士漢米爾頓公司，型號(hào)FAME24-20；德國(guó)西門子公司，型號(hào)BEPⅢ)，全自動(dòng)核酸檢測(cè)系統(tǒng)(瑞士羅氏公司，型號(hào)COBAS S201)。

1.3 研究方法

1.3.1獻(xiàn)血者保留 對(duì)所有無償獻(xiàn)血者標(biāo)本按國(guó)標(biāo)常規(guī)血液檢測(cè)，其中ELISA項(xiàng)目(HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP)均使用2種不同廠家試劑，若ELISA單一試劑陽性、NAT陰性的獻(xiàn)血者，保留其獻(xiàn)血資格并報(bào)廢血液，屏蔽期間隔滿6個(gè)月及以上可申請(qǐng)歸隊(duì)復(fù)查。

1.3.2獻(xiàn)血者歸隊(duì)程序 主動(dòng)提交歸隊(duì)申請(qǐng)的獻(xiàn)血者進(jìn)行健康征詢，并簽署知情同意書后采集1支5 mL EDTA-K2抗凝的靜脈血。按照既往陽性項(xiàng)目與常規(guī)獻(xiàn)血標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)，經(jīng)2種不同廠家ELISA試劑檢測(cè)均陰性后，由授權(quán)人員審核并解除屏蔽，準(zhǔn)許歸隊(duì)，恢復(fù)再次參加無償獻(xiàn)血資格。每位獻(xiàn)血者可提交3次歸隊(duì)申請(qǐng)，每輪歸隊(duì)屏蔽期均為6個(gè)月，若經(jīng)3次歸隊(duì)ELISA仍陽性，則獻(xiàn)血資格永久淘汰。

2 結(jié)果

2.1 無償獻(xiàn)血者標(biāo)本總檢測(cè)情況總檢測(cè)數(shù)為116 610，總項(xiàng)目不合格率為4.0%(4 626/116 610)。其中符合《指南》進(jìn)入歸隊(duì)程序的獻(xiàn)血者共724名，占0.6%(724/116 610)。截止2021年1月31日申請(qǐng)歸隊(duì)獻(xiàn)血者共有170名，歸隊(duì)返回率占23.5%(170/724)。

2.2 ELISA單陽性檢測(cè)項(xiàng)目情況分析

2.2.1單陽性各項(xiàng)目檢測(cè)情況 單試劑總陽性率為0.6%(724/116 610)。其中HBsAg陽性率為26.5%(192/724)，抗-HCV陽性率為9.5%(69/724)，HIV-Ag/Ab陽性率為28.0%(203/724)，抗-TP陽性率為35.9%(260/724)。見表1。

表1 2018年1月至2020年7月單陽性各項(xiàng)目分類情況(n)

2.2.2單陽性獻(xiàn)血者各項(xiàng)目歸隊(duì)和再次獻(xiàn)血成功情況 申請(qǐng)歸隊(duì)人數(shù)占23.5%(170/724)，歸隊(duì)成功率占58.2%(99/170)，歸隊(duì)后再次申請(qǐng)獻(xiàn)血的返回率占41.4%(41/99)，歸隊(duì)后再次申請(qǐng)獻(xiàn)血的合格率占97.6%(40/41)，其中1名歸隊(duì)后再次獻(xiàn)血檢驗(yàn)ELISA合格、NAT陽性。見表2。

表2 2018年1月至2020年7月中山市單陽性獻(xiàn)血者歸隊(duì)和再次獻(xiàn)血情況(n)

2.3 單陽性獻(xiàn)血者歸隊(duì)情況分析申請(qǐng)歸隊(duì)獻(xiàn)血者與未歸隊(duì)獻(xiàn)血者性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；申請(qǐng)歸隊(duì)獻(xiàn)血者的年齡、獻(xiàn)血次數(shù)均高于未歸隊(duì)獻(xiàn)血者(P<0.05)。見表3。

表3 2018年1月至2020年7月單陽性獻(xiàn)血者因素分析[n(%)]

3 討論

目前血液篩查應(yīng)用的ELISA檢測(cè)方法雖然具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，但存在一定的假反應(yīng)性。造成假反應(yīng)性因素為多方面，不同的試劑生產(chǎn)廠家技術(shù)工藝存在差別，批間變異系數(shù)較大[1]，獻(xiàn)血者自身干擾因素(如自身抗體、疫苗接種史、妊娠等)[4]，標(biāo)本質(zhì)量、儀器環(huán)境、人員操作及灰區(qū)設(shè)置不同等影響因素均可導(dǎo)致假反應(yīng)性結(jié)果[5]。本研究顯示再次復(fù)檢合格率為58.2%(99/170)，說明ELISA單試劑反應(yīng)獻(xiàn)血者中50.0%以上為潛在的合格獻(xiàn)血者。

表1顯示，2018、2019、2020年抗-HCV單陽性發(fā)生率分別為11.7%、10.8%、1.5%，發(fā)生率變化較大，可能因?yàn)榭?HCV檢測(cè)項(xiàng)目自2020年開始雙家試劑均采用第四代ELISA試劑盒，代替以往一家第三代、另一家第四代，從而統(tǒng)一試驗(yàn)敏感性。ELISA第三代試劑盒采用間接ELISA法檢測(cè)IgG類抗體，而第四代試劑盒采用雙抗原夾心ELISA法能同時(shí)檢測(cè)免疫球蛋白IgM和IgG類抗體，提高早期IgM抗體檢出率，縮短檢出病毒感染的“窗口期”[6]。同時(shí)第四代雙抗原夾心ELISA法采用酶標(biāo)抗原形成包被復(fù)合物，對(duì)待檢抗體進(jìn)行2次特異反應(yīng)，有效避免與其他非特異性抗體吸附導(dǎo)致假反應(yīng)性[7]。因此，第四代試劑能夠增加檢測(cè)靈敏度，降低假反應(yīng)性發(fā)生率。

本次發(fā)現(xiàn)1例HBsAg單陽性獻(xiàn)血者，經(jīng)過6個(gè)月屏蔽期后，申請(qǐng)歸隊(duì)ELISA復(fù)檢合格，再次參加獻(xiàn)血ELISA仍為合格，但NAT陽性，顯示該獻(xiàn)血者可能處于病毒感染標(biāo)志物檢測(cè)陰性“窗口期”。ELISA與NAT相互補(bǔ)充檢測(cè)，能最大限度防止因弱陽性及病毒變異等情況而導(dǎo)致的漏檢[8]。NAT檢測(cè)也存在一定的假反應(yīng)性，針對(duì)此類情況，有研究建議增加抗-HBc檢測(cè)[9]、不同核酸檢測(cè)系統(tǒng)平行鑒定/拆分[10]等措施，以提高結(jié)果準(zhǔn)確性。由此證明設(shè)置獻(xiàn)血屏蔽期是非常有必要的，但對(duì)獻(xiàn)血者應(yīng)做好結(jié)果前后不一致的解釋工作。檢測(cè)中應(yīng)盡可能排除導(dǎo)致假反應(yīng)性相關(guān)因素，如排除其他儀器或標(biāo)本的污染因素，定期評(píng)估和選擇漏檢率低的篩查試劑，有條件地區(qū)增加確證試驗(yàn)以作為歸隊(duì)的補(bǔ)充判定依據(jù)。

表3中，男性的歸隊(duì)意愿、成功率略高于女性，考慮女性人群因生理期、懷孕以及心理等方面影響因素多于男性。從獻(xiàn)血者年齡來看，18～29歲人群中以在校大學(xué)生及外來務(wù)工人員居多，人員流動(dòng)性較大，因此，該類人群主動(dòng)申請(qǐng)歸隊(duì)率較低。30～49歲年齡段主動(dòng)申請(qǐng)歸隊(duì)率較高，考慮該年齡段人群特點(diǎn)社會(huì)價(jià)值、責(zé)任感較其他年齡更為成熟，工作生活更為穩(wěn)定等因素。歸隊(duì)人群以獻(xiàn)血次數(shù)2次以上的獻(xiàn)血者為主。獻(xiàn)血經(jīng)驗(yàn)越豐富的獻(xiàn)血者，對(duì)無償獻(xiàn)血政策及知識(shí)、獻(xiàn)血流程了解更多，因此，重復(fù)獻(xiàn)血者主動(dòng)歸隊(duì)意愿更為強(qiáng)烈，歸隊(duì)成功率越高，這與國(guó)外報(bào)道人群特點(diǎn)[11]相似。

目前本研究采用血站標(biāo)準(zhǔn)化信息管理系統(tǒng)，已建立歸隊(duì)獻(xiàn)血者人員信息庫。本研究再次獻(xiàn)血返回率為41.4%(41/99)，低于廣州地區(qū)的58.1%(825/1 420)[12]，介于其他地區(qū)24.6%(32/130)～42.7%(882/2 066)之間[13-14]。實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)超70%的獻(xiàn)血者未申請(qǐng)歸隊(duì)。獻(xiàn)血者對(duì)歸隊(duì)政策了解不足，獻(xiàn)血成本較高(如交通)，且不同人群的受教育程度、心理等存在差異。因此，更進(jìn)一步完善和細(xì)化歸隊(duì)獻(xiàn)血者服務(wù)工作是非常有必要的。

建議制定不同項(xiàng)目或檢測(cè)結(jié)果的告知模板和服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范和提高工作人員專業(yè)培訓(xùn)和服務(wù)意識(shí)，加強(qiáng)與歸隊(duì)獻(xiàn)血者的溝通，解除其顧慮。對(duì)獻(xiàn)血者解釋檢測(cè)結(jié)果時(shí)，充分了解獻(xiàn)血者的需求，及時(shí)提供指引和幫助，增加專業(yè)心理護(hù)理，以減輕獻(xiàn)血者心理負(fù)擔(dān)和保障獻(xiàn)血者權(quán)益。對(duì)延遲歸隊(duì)的獻(xiàn)血者探討可否適當(dāng)增加召回次數(shù)，增加多種召回方法(如短信提醒、微信公眾號(hào)平臺(tái)預(yù)約等)，為獻(xiàn)血者提供更有效和便捷的服務(wù)。通過定期隨訪關(guān)注獻(xiàn)血者身心健康、加強(qiáng)獻(xiàn)血法律法規(guī)和相關(guān)知識(shí)宣傳等方式，以增加獻(xiàn)血者信任度，促進(jìn)獻(xiàn)血者歸隊(duì)積極性和減少獻(xiàn)血者的流失。