陳雪 葉青華 陳文俊

一、材料與儀器

1.材料。水果玉米黑玫瑰8號、黑玫瑰13號。

2.試劑。矢車菊素標準品，成都普思生物科技股份有限公司；甲醇、乙腈、乙醇，均為色譜純，Merck公司。

3.儀器。UV-1900型紫外可見分光光度計，翱藝儀器（上海）有限公司；R-300型旋轉蒸發(fā)儀，瑞士Buchi公司；超高效液相色譜（Ultra Performance Chromatography，UPLC）（Shim-pack UFLC SHIMADZU CBM30A）；串聯(lián)質譜（Tandem mass spectrometry，MS/MS）（Appllied Biosystems 4500QTRAP）。

二、實驗與方法

1.花青素原液的提取制備。將篩選好的黑玫瑰水果玉米樣品40℃烘干并粉碎，使用95%乙醇與2mol/L的鹽酸（比例1︰9）溶解，超聲提取，離心取上清液。殘渣按上述步驟再提取一次，合并兩次離心液，即得花青素原液，并保存到進樣瓶中，用于LC-MS/MS分析備用。

2.黑玫瑰水果玉米花青素的含量測定。精密稱定矢車菊素標準品，配制成0.05mg/mL的母液，再依次將母液稀釋成0.048mg/mL、0.040mg/mL、0.033mg/mL、0.026mg/mL、0.018mg/mL、0.013mg/mL的溶液。在530nm波長處進行比色測定，繪制標準曲線，得到回歸方程：Y=14.798X-0.0352（R2=0.9991）。在530nm波長下進行比色，記錄吸光度，帶入回歸方程計算花青素相對含量。

3.定性與定量鑒定。（1）液相條件。色譜柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8μm，2.1mm*100mm；流動相：水相為超純水（加入0.04%的乙酸），有機相為乙腈（加入0.04%的乙酸）；洗脫梯度：0min水/乙腈為95︰5V/V，11.0min水/乙腈為5︰95V/V，12.0min水/乙腈為5︰95V/V，12.1min水/乙腈為95︰5V/V，15.0min水/乙腈為95︰5V/V；流速：0.4mL/min；柱溫：40℃；進樣量：5μL。（2）質譜條件。電噴霧離子源（ESI）溫度：500℃；質譜電壓：5500V；簾氣（CUR）：25psi；碰撞誘導電離（CAD）：高。

三、結果與分析

利用LC-MS/MS方法，對供試材料黑玫瑰8號及黑玫瑰13號花青素組分進行鑒定，結果見圖1、圖2和表1?；诒镜卮x數(shù)據(jù)庫，本研究對樣本的代謝物進行了質譜定性定量分析。水果玉米黑玫瑰8號、黑玫瑰13號分別檢測到17種已知的花青素類代謝物，代謝物名稱及其相對含量等信息詳見表1，種類遠遠超越了現(xiàn)有黑玉米品種的花青素組分，具有廣闊的開發(fā)前景。

四、討論

1.研究表明，自然界中花青素的穩(wěn)定性受花青素的內部結構以及花青素組分的影響較大，一般認為，花青素的組分越多，穩(wěn)定性就越強。在本研究中，2種花青素水果玉米均含有芍藥花素-3-O-蕓香糖苷、芍藥花素3-O-（6-丙二酰葡萄糖苷）等17種花青素代謝物，結構相對穩(wěn)定，營養(yǎng)價值極高，可以有針對性地開發(fā)功能保健食品。

2.與藍莓等其他富含花青素的水果相比，花青素水果玉米的花青素組分豐富，對氣候條件的要求較低并且產量高，尤其在南方等地可種植兩季，可以作為天然色素的重要來源以及高端保健產品的重要原料進一步開發(fā)和推廣。

五、結論

本研究采用LC-MS/MS法對水果玉米黑玫瑰8號、黑玫瑰13號花青素組分進行鑒定，該方法具有簡單、高效、快捷、重復性好、靈敏度高等優(yōu)點。檢測結果表明，水果玉米黑玫瑰8號與黑玫瑰13號均含有17種已知花青素代謝物，花青素組分種類多、含量豐富。因此，這是一種高端的水果玉米新品種，具有廣闊的開發(fā)價值與發(fā)展前景。