方雅玲，董宇倩，王亞男，吳維怡

嵌合抗原受體（chimeric antigen receptor，CAR）-T 細(xì)胞技術(shù)代表了癌癥免疫治療領(lǐng)域的重大突破。采用合成生物學(xué)的方法，免疫細(xì)胞表達(dá)經(jīng)工程改造的CAR，CAR-T 細(xì)胞進(jìn)入腫瘤部位，特異性識(shí)別并殺死腫瘤細(xì)胞，并進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤抗原的釋放，由此觸發(fā)CAR-T 細(xì)胞的廣泛增殖，并激活免疫系統(tǒng)引發(fā)進(jìn)一步的抗腫瘤反應(yīng)[1]。目前，已獲美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）批準(zhǔn)的2 款CAR-T 細(xì)胞[美國(guó)諾華公司（Novartis）的CTL019（商品名：Kymriah?）和美國(guó)風(fēng)箏制藥公司（Kite Pharma）的Axi-Cel（商品名：Yescart?）]已用于治療復(fù)發(fā)或難治性B 細(xì)胞急性淋巴母細(xì)胞性白血病，復(fù)發(fā)或難治性彌漫性大B 細(xì)胞淋巴瘤和原發(fā)縱隔大B 細(xì)胞淋巴瘤[2-3]，但使用的都是自體CAR-T 細(xì)胞制備技術(shù)。自體CAR-T 細(xì)胞治療需要為每個(gè)患者定制生產(chǎn)過(guò)程，生產(chǎn)成本因無(wú)法規(guī)模化而居高不下；生產(chǎn)周期較長(zhǎng)，某些高度增殖性疾?。ɡ缂毙园籽。┗颊呖赡軙?huì)錯(cuò)過(guò)最佳治療窗口；有些患者自身的T 細(xì)胞存在數(shù)量缺陷或細(xì)胞功能障礙，導(dǎo)致CAR-T 細(xì)胞的質(zhì)量得不到保證。在這種治療背景下，同種異體CAR-T 細(xì)胞療法應(yīng)運(yùn)而生。同種異體CAR-T（allogeneic CAR-T），又稱通用型CAR-T（universal CAR-T）和即用型CAR-T（off-the-shelf CAR-T）是指將來(lái)源于外周血和臍帶血[4]，或者衍生自可再生干細(xì)胞的T 細(xì)胞[5]，進(jìn)行基因改造后使其既能規(guī)避移植物抗宿主和宿主排斥，又能發(fā)揮既定的抗癌作用。該免疫療法在過(guò)去幾年中的代表性里程碑事件見(jiàn)表1。

表1 同種異體CAR-T 細(xì)胞發(fā)展的里程碑事件Table 1 Milestone in the development of CAR-T cells

通用型CAR-T 細(xì)胞移植的最大障礙在于移植物抗宿主?。╣raft-versus-host disease）和宿主排斥異源T 細(xì)胞。一方面，輸入患者體內(nèi)的同種異體T 細(xì)胞上的T 細(xì)胞受體（T-cell receptor，TCR）能夠識(shí)別患者的同型抗原，從而引發(fā)GvHD；另一方面，患者自身的免疫細(xì)胞可能會(huì)識(shí)別CAR-T 細(xì)胞表面上的組織相容性人白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA），從而攻擊輸入體內(nèi)的CAR-T 細(xì)胞，導(dǎo)致免疫排斥。因此，本文將就近年來(lái)通用型CAR-T 技術(shù)在規(guī)避GvHD 和免疫排斥異源T 細(xì)胞方面的研究發(fā)展及臨床前景進(jìn)行綜述。

1 通過(guò)基因編輯靶向敲除TCR 以規(guī)避GvHD

通用型CAR-T 技術(shù)主要依賴于基因編輯平臺(tái)來(lái)解決GvHD。在基因組中特異性地造成雙鏈缺口，然后采用非同源末端連接或同源模板重組修復(fù)，從而實(shí)現(xiàn)TCR 的靶向敲除并減少或消除GvHD。當(dāng)前，存在3 種成熟的用于產(chǎn)生TCR缺陷型T 細(xì)胞的基因編輯方法：鋅指核酸酶（Zinc finger nucleases，ZFNs）法、轉(zhuǎn)錄激活子樣效應(yīng)因子核酸酶（transcription activator-like effectorbased nucleases，TALENs）法和規(guī)律性間隔的短回文序列重復(fù)簇（clustered regularly interspaced short palindromic repeat，CRISPR）法。ZFNs是一類經(jīng)過(guò)特殊設(shè)計(jì)的DNA 內(nèi)切酶，其可以導(dǎo)致目標(biāo)基因的雙鏈斷裂，然后通過(guò)非同源末端連接或同源重組修復(fù)斷裂位點(diǎn)，引起核苷酸的缺失或插入，從而使靶基因功能喪失。主要功能：（1）通過(guò)改進(jìn)專性異二聚體結(jié)構(gòu)增強(qiáng)鋅指核酸酶活性；（2）利用鋅指酶來(lái)進(jìn)行基因編輯；（3）快速構(gòu)建鋅指核酸酶的重組鋅指陣列。TALENs 具有與ZFNs 類似的結(jié)構(gòu)和功能，由特異性的DNA結(jié)合蛋白TALE 和行使DNA 切割功能的Fok Ⅰ核酸內(nèi)切酶組合而成。主要功能：（1）不再像TAL-type Ⅲ effectors 一樣依賴于通過(guò)結(jié)合特定的DNA 堿基組合來(lái)進(jìn)行基因編輯；（2）一個(gè)簡(jiǎn)單的密碼控制著TAL 效應(yīng)器的識(shí)別；（3）通過(guò)TALE 核酸酶對(duì)人多能細(xì)胞進(jìn)行基因編輯?；赯FNs 和TALENs 的方法都需要為每個(gè)新的基因靶點(diǎn)設(shè)計(jì)特定的核酸酶對(duì)，這限制了該技術(shù)的廣泛應(yīng)用。CRISPR-Cas 系統(tǒng)是從原核生物進(jìn)化獲得的一套特有天然免疫系統(tǒng)，通過(guò)小的CRISPR RNAs 靶向抵抗病毒侵襲，如今被修飾成靶向哺乳動(dòng)物細(xì)胞DNA，可實(shí)現(xiàn)對(duì)DNA 序列的修剪、切割、替換或添加。該技術(shù)可對(duì)人類細(xì)胞中的 RNA 程序化基因組進(jìn)行編輯；使用 CRISPR/Cassystems 對(duì)多重基因組進(jìn)行編輯；通過(guò) Cas9對(duì) RNA 引導(dǎo)的人類基因組進(jìn)行編輯；使用 Cas9 RNA 引導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶在人類細(xì)胞中進(jìn)行靶向基因組的編輯。該系統(tǒng)只需要設(shè)計(jì)一個(gè)靶向目標(biāo)序列的單導(dǎo)核酸（single-guide RNA，sgRNA）就能引導(dǎo)Cas 核酸酶作用于相應(yīng)的結(jié)合位點(diǎn)。

TCR 蛋白復(fù)合物由α 鏈和β 鏈（在αβT 細(xì)胞中）或γ 鏈和δ 鏈（在γδT 細(xì)胞中）組成，并與諸如CD3 蛋白的輔助分子相關(guān)。由于αβTCR受體需要形成異二聚體才能表達(dá)功能性細(xì)胞表面分子，因此敲除TCR 恒定α 鏈（TCR alpha constant，TRAC）或β 鏈（TCRbeta constant，TRBC）足以消除αβTCR 的表達(dá)。但是考慮到β鏈基因包含2 個(gè)恒定區(qū)，而編碼α 鏈的基因只有1 個(gè),因此最直接破壞αβTCR 的方式就是靶向編碼TRAC 的基因。2011 年發(fā)表的一項(xiàng)研究支持了這一觀點(diǎn)，TCR α 亞基恒定基因發(fā)生突變會(huì)導(dǎo)致人類免疫缺陷病其特征是αβTCR 陽(yáng)性T 細(xì)胞的缺失[6]。另一項(xiàng)開(kāi)創(chuàng)性研究表明，通過(guò)ZFNs可以編輯基因消除內(nèi)源性αβTCR 的表達(dá)，這些重新編程的T 細(xì)胞不僅表現(xiàn)出對(duì)CD19 的定向特異性，不響應(yīng)TCR 刺激，而且保持了應(yīng)有的抗腫瘤功能[7]。此外，TALENs 亦被證明，可在原代T 細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高效的基因編輯。例如，通過(guò)電穿孔技術(shù)將TALEN mRNA 轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞可獲得αβTCR 缺陷型T 細(xì)胞，從而消除了T 細(xì)胞與同種異體抗原的反應(yīng)，并介導(dǎo)GvHD 的可能性[8]。同樣基于對(duì)TALENs 的應(yīng)用，研究人員在制備用于治療難治性或復(fù)發(fā)性CD19 陽(yáng)性的B 細(xì)胞白血病的UCART19 時(shí)，敲除了TCR α基因，旨在消除供體T 細(xì)胞引發(fā)GvHD 的可能性，同時(shí)敲除了CD52 基因可使供體T 細(xì)胞對(duì)淋巴瘤抑制劑阿侖單抗產(chǎn)生耐藥性[12]。出于安全性的考慮，UCART19 試驗(yàn)中還進(jìn)一步通過(guò)基因工程改造共表達(dá)的RQR8 基因。激活CAR-T 細(xì)胞上所攜帶的RQR8 安全開(kāi)關(guān)，可允許在單次高劑量給藥利妥昔單抗時(shí)特異性清除異常擴(kuò)增的CAR-T細(xì)胞[12]。另外，發(fā)表在Nature 上的一篇報(bào)道則突顯了CRISPR/Cas9 基因組編輯促進(jìn)免疫治療的潛力[9]。研究發(fā)現(xiàn)，將針對(duì)CD19 特異性的CAR 導(dǎo)入TRAC基因座，不僅可以使T 細(xì)胞產(chǎn)生均勻的CAR 表達(dá)，而且還可以增強(qiáng)T 細(xì)胞的抗腫瘤療效[9]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，將CAR 定位到TRAC基因座還可避免強(qiáng)直性CAR 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，并有效延緩效應(yīng)T 細(xì)胞的分化和衰竭[9]。此外，megaTAL 核酸酶[10]和I-CreI 歸巢核酸內(nèi)切酶[11]也被開(kāi)發(fā)用于靶向清除內(nèi)源性TCR 的表達(dá)。以上發(fā)現(xiàn)不僅揭示了破壞CAR-T 細(xì)胞內(nèi)源性TRAC 表達(dá)的可行性，也突顯了基因組編輯TCR缺陷T 細(xì)胞以規(guī)避GvHD 的潛力。然而，需要指出的是，異體CAR-T 細(xì)胞在被敲除TCR基因后，仍然需要經(jīng)歷TCR 負(fù)性篩選[13]。盡管目前的篩選效率較高，但依然無(wú)法保證極少量的TCR陽(yáng)性細(xì)胞不產(chǎn)生GvHD。這也就意味著，當(dāng)前臨床上應(yīng)用同種異體CAR-T 細(xì)胞，仍然伴隨著治療細(xì)胞的數(shù)量與功效之間的權(quán)衡。

基因編輯正在徹底改變細(xì)胞免疫治療的可能性，但這也帶來(lái)了未知的風(fēng)險(xiǎn)?；蛎摪须S時(shí)可能發(fā)生，當(dāng)多個(gè)位點(diǎn)被切斷時(shí)，新的易位可能發(fā)生。在UCART19 療法中，可以看到CD52 和TRAC基因座之間的重組[8]。

2 提高同種異體CAR-T 細(xì)胞的持久性

雖然上述有多種方法可以降低輸入到患者體內(nèi)的異體CAR-T 細(xì)胞攻擊宿主的風(fēng)險(xiǎn)，但是同種異體CAR-T 療法還需要解決另一項(xiàng)重大挑戰(zhàn)，那就是患者的免疫系統(tǒng)會(huì)識(shí)別這些細(xì)胞是“外來(lái)”細(xì)胞，從而對(duì)它們產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。這種免疫排斥可能最終會(huì)將輸入患者體內(nèi)的異體CAR-T細(xì)胞完全消滅。而由患者自身T 細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)可能在異體CAR-T 細(xì)胞療法輸入時(shí)就馬上開(kāi)始工作，降低異體CAR-T 細(xì)胞療法的療效。因此，如何提高同種異體CAR-T 療法的持久性是這一領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題。

2.1 淋巴細(xì)胞耗竭及其與基因編輯相結(jié)合的策略

一種增加異體CAR-T 細(xì)胞持久性的可能方案是，在不影響CAR-T 細(xì)胞活性的前提下延長(zhǎng)淋巴細(xì)胞清除的持續(xù)時(shí)間。有研究顯示，將異體CAR-T 細(xì)胞轉(zhuǎn)移到淋巴細(xì)胞耗竭的人體后會(huì)經(jīng)歷一個(gè)稱為穩(wěn)態(tài)擴(kuò)增的過(guò)程[15]。這一擴(kuò)增是由諸如白細(xì)胞介素7（interleukin-7，IL-7）和IL-15在內(nèi)的細(xì)胞因子以及暴露于靶標(biāo)抗原所驅(qū)動(dòng)[16]。因此，為確保CAR-T 細(xì)胞能發(fā)揮最大功效，在回輸之前，患者要先接受高劑量化療盡可能清除體內(nèi)的原有淋巴細(xì)胞（lymphodepletion）以期在患者體內(nèi)構(gòu)建一個(gè)更有利于CAR-T 細(xì)胞生長(zhǎng)的免疫環(huán)境[15]。一項(xiàng)研究表明，使用電穿孔技術(shù)將TALEN mRNA 轉(zhuǎn)入原代人T 細(xì)胞中進(jìn)行高效的多重基因編輯。這種TALEN 介導(dǎo)的編輯方法可以使T 細(xì)胞同時(shí)缺失αβTCR 和CD52 蛋白的表達(dá)[12]。TCR 和CD52 缺陷的CD19 靶向型CAR-T 細(xì)胞可以在阿侖珠單抗清除體內(nèi)淋巴細(xì)胞時(shí)穩(wěn)態(tài)擴(kuò)增[12]。在淋巴瘤原位小鼠模型中，UCART19 的抗腫瘤活性與標(biāo)準(zhǔn)的CD19 靶向性CAR-T 細(xì)胞相比沒(méi)有區(qū)別[8]；且UCART19 療法在臨床上的初步試驗(yàn)也進(jìn)一步支持了這一方案的可行性[17]。這項(xiàng)UCART19 療法治療高風(fēng)險(xiǎn)難治性或復(fù)發(fā)性B 細(xì)胞白血病患者試驗(yàn)的初步結(jié)果顯示，UCART19 治療沒(méi)有帶來(lái)意外的毒性，且在CAR-T 細(xì)胞輸注后的第42 天依然可以在患者的血液中檢測(cè)到，證實(shí)其在人體內(nèi)的持久擴(kuò)增能力[17]。但是，在采用這一策略時(shí)患者體內(nèi)的內(nèi)源 細(xì)胞水平會(huì)被壓制到很低的水平，感染風(fēng)險(xiǎn)顯著提高。

2.2 通過(guò)基因編輯規(guī)避異源細(xì)胞的免疫原性

同種異體CAR-T 細(xì)胞的治療窗口取決于其初始擴(kuò)增，持久性以及宿主免疫系統(tǒng)對(duì)它們的排斥程度。目前已有諸多研究人員對(duì)來(lái)自具有不同HLA 表達(dá)供體的T 細(xì)胞進(jìn)行基因編輯，以逃避免疫應(yīng)答。由于HLA-I 型蛋白（包括HLA-A、HLA-B 和HLA-C 等）是介導(dǎo)免疫排斥因素的關(guān)鍵分子，通過(guò)基因工程改造的方法敲除同種異體CAR-T 細(xì)胞表達(dá)HLA-I 型蛋白將最為直接。有研究針對(duì)HLA-A 進(jìn)行了特定的ZFN 核酸酶設(shè)計(jì)，電轉(zhuǎn)編碼這些工程核酸酶的mRNA 選擇性破壞CD19 特異性T 細(xì)胞上HLA-A 的表達(dá)，最后成功對(duì)HLA-A 陰性T 細(xì)胞通過(guò)HLA 限制性細(xì)胞毒性T 細(xì)胞進(jìn)行了富集[18]。

HLA 在細(xì)胞表面表達(dá)時(shí)需要β2-微球蛋白（β2-microglobulin，B2M）的亞基充當(dāng)HLA-Ⅰ輕鏈，所以通過(guò)基因工程敲除B2M基因，也可以導(dǎo)致細(xì)胞表面缺乏功能性HLA-Ⅰ的表達(dá)。一項(xiàng)研究報(bào)告了新型B2M（－/－）人類胚胎干細(xì)胞（humanembryonic stem cells，hESCs）系的產(chǎn)生。從該系分化出的成熟T 細(xì)胞即使在干擾素γ（interferon-γ，IFN-γ）的刺激下也不表達(dá)細(xì)胞表面HLA 分子，免疫原性遠(yuǎn)低于正常hESCs[19]。此外，B2M（－/－）hESCs 品系不發(fā)生脫靶整合或切割事件，沒(méi)有穩(wěn)定的B2M mRNA，并保留了自我更新能力，基因組穩(wěn)定性和多能性[19]。使用CRIPSR-Cas9 系統(tǒng)，研究人員對(duì)T 細(xì)胞的內(nèi)源性TRAC、B2M和程序性死亡受體1（programmed cell death protein 1，PD-1）進(jìn)行多重基因破壞，創(chuàng)建了可以抵抗PD-1 抑制的通用性CAR-T 細(xì)胞三聯(lián)基因編輯的CAR-T 細(xì)胞在臨床前的神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型中顯示出顯著增強(qiáng)的抗腫瘤活性，且模型小鼠接受該CAR-T 細(xì)胞治療后，顯著延長(zhǎng)存活時(shí)間[20]。

通過(guò)基因工程手段使T 細(xì)胞表面缺失HLA的表達(dá)，不可避免的就是對(duì)宿主自然殺傷（natural killer，NK）細(xì)胞的清除更加敏感。針對(duì)這個(gè)問(wèn)題，已開(kāi)發(fā)出相應(yīng)的策略。研究人員使用腺相關(guān)病毒（adeno-associated virus，AAV）介導(dǎo)的基因編輯，使細(xì)胞表面表達(dá)HLA-E 單鏈二聚體（與B2M 融合）或三聚體（與B2M 和肽抗原融合），無(wú)細(xì)胞表面HLA-A、HLA-B 或HLA-C 表達(dá)的方式，在人類多能干細(xì)胞中的B2M基因座處插入HLA-E基因。這些經(jīng)HLA 改造的多能干細(xì)胞及其分化衍生物將不被CD8＋T 細(xì)胞識(shí)別為同種異體，不結(jié)合抗HLA 抗體，并且對(duì)NK 細(xì)胞介導(dǎo)的清除具有抗性[21]。此外，還有研究人員通過(guò)CRISPR-Cas9 靶向破壞HLA-A 和HLA-B，但保留HLA-C 來(lái)增強(qiáng)誘導(dǎo)多能干細(xì)（induced pluripotent stem cells，iPSCs）的免疫相容性，逃避CD8＋T 細(xì)胞和NK 細(xì)胞的殺傷作用[22]。

3 臨床前景

同種異體CAR-T 細(xì)胞的諸多優(yōu)勢(shì)為治療復(fù)發(fā)性或難治性惡性腫瘤提供了更多可能性，尤其在疾病進(jìn)展迅速的急性髓細(xì)胞性白血病（acute myeloid leukemia，AML）和急性淋巴細(xì)胞白血?。╝cute lymphocytic leukemia，ALL）中有主要優(yōu)勢(shì)。突破性的實(shí)例如，2例患有頑固性難治性CD19 陽(yáng)性的B 細(xì)胞ALL 的嬰兒在接受單劑量UCART19 細(xì)胞（4.0～4.6×106個(gè)/kg）輸注后，均在28 d 內(nèi)達(dá)到了分子緩解，并且該UCART19細(xì)胞在嬰兒體內(nèi)一直持續(xù)存在，直到成功完成同種異體干細(xì)胞移植。這種移植前的過(guò)渡性策略證明了基因編輯技術(shù)的治療潛力。目前有多項(xiàng)同種異體CAR-T 細(xì)胞治療AML 和ALL 的臨床試驗(yàn)正在開(kāi)展，亦有試驗(yàn)針對(duì)淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤和實(shí)體瘤（表2）。所涉及的靶標(biāo)與自體CAR-T治療的靶標(biāo)相似，包括ALL 和B 細(xì)胞淋巴瘤中的CD19 和CD22；多發(fā)性骨髓瘤中的BCMA和CS1（也 稱CD319 和SLAMF7）；AML 中的CD123；T 細(xì)胞白血病和T 細(xì)胞淋巴瘤中的CD7 以及實(shí)體瘤中的NKG2D（natural killer group 2 member D）、CD70 和間皮素等。值得注意的是，對(duì)于AML 中的CD123 和多發(fā)性骨髓瘤中的CS1 等靶標(biāo)，它們?cè)谀[瘤細(xì)胞上異質(zhì)表達(dá)或在正常造血祖細(xì)胞上表達(dá)[23]，脫靶效應(yīng)會(huì)是CAR-T 細(xì)胞不良反應(yīng)的主要來(lái)源。但同時(shí)，由于同種異體CAR-T 細(xì)胞的持久性有限，對(duì)于靶點(diǎn)在正常細(xì)胞上表達(dá)，異源性CAR-T 細(xì)胞的較短的持久性可能會(huì)變得有利。此外，將不同特異性的異源CAR-T 細(xì)胞組合在一起，以消除腫瘤異質(zhì)性的影響或避免初始靶標(biāo)丟失的免疫逃逸，或許在將來(lái)會(huì)是一種有吸引力臨床治療策略。例如，在ALL 或B 細(xì)胞淋巴瘤中使用CD19 和CD22的CAR-T 細(xì)胞的組合[24]。近期，美國(guó)FDA 已經(jīng)批準(zhǔn)首個(gè)iPSCs 來(lái)源的同種異體CAR-T 細(xì)胞療法FT819 的新藥研究申請(qǐng)（Investigational New Drug），用于治療復(fù)發(fā)/難治性B 細(xì)胞惡性腫瘤，包括慢性淋巴細(xì)胞白血病、ALL 和非霍奇金淋巴瘤等。FT819 目前處于Ⅰ期研究階段，這是一種首創(chuàng)的、現(xiàn)成的、由iPSC 衍生的少TCR的CAR-T細(xì)胞療法，用于治療復(fù)發(fā)性/難治性B 細(xì)胞惡性腫瘤。iPSCs或?qū)⒊蔀橥七M(jìn)免疫細(xì)胞療法產(chǎn)業(yè)化的重要支柱。

表2 進(jìn)入臨床開(kāi)發(fā)階段的代表性通用型CAR-T 細(xì)胞產(chǎn)品Table 2 Representative universal CAR-T cells products entering the clinical development stage

對(duì)于面臨多重挑戰(zhàn)的實(shí)體瘤，一方面，腫瘤微環(huán)境中的物理屏障讓CAR-T 細(xì)胞難以浸潤(rùn)到腫瘤內(nèi)部；另一方面，即使CAR-T 細(xì)胞浸潤(rùn)到了實(shí)體瘤內(nèi)部，也面臨著腫瘤微環(huán)境的免疫抑制[25]。目前，已經(jīng)有許多功能性模塊用于CAR-T 細(xì)胞的工程化改造，這些模塊包括改善T 細(xì)胞歸巢和運(yùn)輸?shù)腃-C 基序趨化因子受體29（C-C motif chemikon receptor 29，CCR29）、CCR4 和CCR1[27-28]；改 善T 細(xì)胞增殖和持續(xù)性的細(xì)胞因子IL-12[29]、IL-18[30]、IL-15 和IL-21[31]分泌元件和細(xì)胞因子IL-7受體（IL-7 receptor，IL-7R）分泌[32]；對(duì)抗免疫抑制的顯性失活的（dominant-negative）受體[33]和開(kāi)關(guān)受體[34]；局部呈遞免疫檢查點(diǎn)阻斷劑的元件[35]等。因此，目前有諸多策略來(lái)優(yōu)化下一代CAR-T 細(xì)胞，使其具有更好的腫瘤選擇性、更好的腫瘤浸潤(rùn)能力和在腫瘤微環(huán)境中對(duì)抗免疫抑制的能力。基因編輯技術(shù)允許在同種異體的CAR-T細(xì)胞中組合多種修飾，然而它們必須滿足嚴(yán)格的質(zhì)量控制和監(jiān)管認(rèn)證流程，以應(yīng)對(duì)可能的臨床風(fēng)險(xiǎn)。

4 展 望

CAR-T 細(xì)胞療法已經(jīng)改變了某些血液系統(tǒng)惡性腫瘤的治療模式，并且是癌癥治療鄰域最有希望的療法之一。自體CAR-T 細(xì)胞治療正在集中闡述腫瘤不完全消除的機(jī)制，研究如何降低毒性，防止抗原逃逸以及基于已建立的合成生物學(xué)原理確定合適的靶標(biāo)和策略，并將該方法擴(kuò)展到其他惡性腫瘤。通用型CAR-T 細(xì)胞治療除了面臨著同樣的挑戰(zhàn)，還面臨著GvHD 和異體排斥這兩大難題。此外，同種異體CAR-T 細(xì)胞的簡(jiǎn)化生產(chǎn)亦值得深入研究。例如直接生成超純現(xiàn)成同種異體 CAR-T 細(xì)胞a。但有理由相信，隨著基因編輯技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)貨型細(xì)胞治療將成為未來(lái)細(xì)胞療法領(lǐng)域的重要方向，有望為更多患者提供可獲得的治療途徑。