■張麗娟 馬志鵬 張 敏 趙玉妍 朱靚蕓 張焱焱 郭雙雙 吳 濤

（武漢輕工大學(xué)農(nóng)副產(chǎn)品蛋白質(zhì)飼料資源教育部工程研究中心，武漢輕工大學(xué)動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)湖北省重點實驗室，湖北武漢 430023）

我國是以農(nóng)業(yè)為基礎(chǔ)的國家，隨著人們生活水平的提高，對營養(yǎng)水平和健康的要求也更高，其中雞肉的熱量、膽固醇、脂肪水平較低，并且蛋白質(zhì)含量較高，這樣的營養(yǎng)成分組成符合人們的期望。隨著對肉雞生長性能最大化所帶來的經(jīng)濟價值的增長，規(guī)?；B(yǎng)殖也得到了更廣泛的發(fā)展，然而規(guī)?；B(yǎng)殖帶來了利，也帶來了弊。因為高密度的規(guī)模化養(yǎng)殖會帶來諸多問題：活動空間小而造成的肉質(zhì)變差，養(yǎng)殖密度過大而導(dǎo)致疾病傳播速度快、疾病變異率高以及應(yīng)激發(fā)生率高等問題。因此，人們開始使用飼用抗生素來解決這些問題，在飼料中加入低劑量的飼用抗生素可以降低肉雞疾病發(fā)生的概率以及應(yīng)激對機體的損害，一定程度上提高了肉雞的經(jīng)濟效益，并且養(yǎng)殖成本低。但是，隨著飼用抗生素的大規(guī)模使用，環(huán)境污染、生物安全、食物安全等問題也隨之暴露出來。在步入21世紀以后，歐盟以及部分亞洲國家全面停止了飼用抗生素的使用，作為農(nóng)業(yè)大國的中國，大規(guī)模的養(yǎng)殖業(yè)更需要停止飼用抗生素的使用[1]。因此尋找一種能解決畜禽的健康問題、提高畜禽經(jīng)濟價值的抗生素替代品成為了現(xiàn)在的研究熱點，目前研究較為深入的營養(yǎng)素有：有機酸、植物提取物、益生菌、中草藥提取物等可作為抗生素替代品[2]，這些營養(yǎng)素具有對畜禽本身及其代謝產(chǎn)品并無副作用，在畜禽體內(nèi)易吸收或分解；在飼料中穩(wěn)定性高；可改善腸道中菌群生存環(huán)境來調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，改善免疫機制、降低應(yīng)激損害等作用；安全高效、成本較低。

葛根素(Puerarin)作為從豆科植物野葛(Puerarin Lobata)或甘葛藤(Puerarin Thomsonii)中提取的一種異黃酮苷,對機體起到了重要的保護[3]。在藥理學(xué)的研究中，葛根素具有阻礙β-腎上腺素受體的作用，可以有效的擴張血管，降低血管的阻力[4]。除此之外，葛根素能夠除去超氧陰離子和氧自由基，增強心室中乳頭肌內(nèi)的超氧化物歧化酶（SOD）起到保護乳頭肌的作用，還能夠進行一定程度上的抗癌、抗炎作用[5]。但是就目前的研究看，葛根素很少應(yīng)用到動物身上，然而我國在畜牧業(yè)上加大了替抗的力度，許多科研工作者研發(fā)抗生素替代物來提升動物的抗病能力。本試驗以肉雞為試驗對象，研究葛根素對肉雞的生長性能、血清生化和腸道形態(tài)的影響，來探討葛根素在肉雞生產(chǎn)中的應(yīng)用效果，為其在家禽中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

植物精油是從植物花、葉、根、樹皮、果實、種子、樹脂等以蒸餾、壓榨方式提煉出來的一類植物源次生代謝物質(zhì)，它具有揮發(fā)性強、容易被機體吸收的特點。植物精油具有凈化空氣、改善環(huán)境污染、促進新陳代謝、促進皮膚吸收、消腫消炎等功效。有試驗研究表明不同類型（智然香Ⅰ和智然香Ⅱ）的植物精油對肉雞均有提高平均日增重和降低料重比的作用[6]。有研究表明在肉雞飼糧中添加植物精油可以提高部分養(yǎng)分消化率、改善肉雞抗氧化能力、提高機體免疫功能[7]。因此試驗以肉雞為研究對象，在肉雞的飼糧中分別添加葛根素、復(fù)合植物精油，探究葛根素、復(fù)合植物精油對肉雞生長性能和血清生化指標、免疫器官的影響，篩選出效果更好的添加劑，為下一步篩選飼用抗生素替代品提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

①98%葛根素(C21H20O9)，購于MACKLIN公司。

②復(fù)合植物精油（百里香酚∶肉桂油=1∶1），由湖北浩華生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 試驗動物與試驗設(shè)計

試驗選用384只1日齡愛拔益加肉仔雞，按照體重相近（45.3±0.5）g原則隨機分為4個處理組，每個處理組8個重復(fù)，每個重復(fù)12只雞。4個處理組分別為：對照組（飼喂基礎(chǔ)日糧），葛根素組（飼喂基礎(chǔ)日糧+20 mg/kg葛根素），植物精油①組（飼喂基礎(chǔ)日糧+100 mg/kg復(fù)合植物精油），植物精油②組（飼喂基礎(chǔ)日糧+500 mg/kg復(fù)合植物精油）。

1.3 試驗日糧

試驗基礎(chǔ)日糧為玉米-豆粕型日糧，日糧組成和營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)）見表1。試驗期為39 d。

表1 基礎(chǔ)日糧的組成及營養(yǎng)水平（風干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理

1.5 樣品采集

在試驗第21 d和第39 d早上，從每個重復(fù)隨機選取體重適中的公雞和母雞各1只，翅下靜脈采集血液4 mL，待血清析出后，在4℃，3 000 r/min離心10 min，分離血清，于-80℃冰箱保存待測。在試驗第39 d，從每個重復(fù)隨機選取體重適中的公雞和母雞各1只，頸部脫臼致死后放血，剖腹后取十二指腸、空腸和回腸腸段（約0.5 cm）樣，置于4%多聚甲醛溶液中固定樣品。

1.6 檢測指標與方法

1.6.1 生長性能指標

在第20 d和第38 d晚22：00進行斷料處理，并于第1、21 d和第39 d以重復(fù)為單位對肉雞進行稱重。記錄第0～21、22～39 d階段肉雞的耗料量，并計算各階段以及第0～39 d肉雞的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(FCR)。

1.6.2 血清生化指標

采用日立HITEC7100自動生化分析儀（東京，日本）檢測血清中總蛋白（TP）、總膽紅素（TB）、白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）、三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）。谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）使用南京建成生物工程研究所試劑盒進行測定。

1.6.3 腸道形態(tài)指標

將腸段從4%的多聚甲醛溶液中取出，用不同濃度的乙醇進行梯度脫水后，用二甲苯將樣本透明處理，再用石蠟將樣品進行包埋。包埋后將組織蠟塊用切片機切割成厚度為2μm的5片，經(jīng)烤片、烘片處理后，用蘇木精-伊紅染液進行染色，然后用中性樹脂封片，做成永久切片。制成的切片用光學(xué)顯微鏡（裝有計算機輔助形態(tài)測定系統(tǒng)）40倍放大觀察，從每個小腸組織切片的不同部位分別選取10根完好的腸道絨毛，測量每根絨毛的絨毛高度、隱窩深度和絨毛面積，取平均值。

①絨毛高度：絨毛頂端到腸腺開口的垂直距離;

因此，筆者認為，繼續(xù)盤問制度的法律性質(zhì)就是指為了公安機關(guān)的人民警察更好地履行法律所規(guī)定的職責和義務(wù)，更好地行使盤查權(quán)，賦予其在當場無法處置的情況下可以進一步進行盤問和行使檢查權(quán)力的法律制度。該法律制度是公安機關(guān)的人民警察為了查明行為人身份、查明行為人是否有違法犯罪嫌疑，以期進一步按照行政違法案件或者刑事犯罪案件來辦理的前置程序。其法律屬性既不屬于行政強制措施，也不屬于刑事強制措施，而是公安機關(guān)及人民警察在辦理行政違法案件和刑事犯罪案件之前的一種特殊的強制措施。

②隱窩深度：隱窩開口處到隱窩底部的垂直距離;

③絨毛面積：用面積測量工具測定完整絨毛的面積。

1.7 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 25.0軟件進行單因素方差分析，用Duncan's多重比較進行組間分析。以P＜0.05為統(tǒng)計學(xué)差異，試驗結(jié)果用”平均值±標準差”來表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 葛根素和復(fù)合植物精油對肉雞生長性能的影響（見表2）

表2 葛根素和復(fù)合植物精油對肉雞生長性能的影響

由表2可知，在第0～21 d，與對照組相比，葛根素組與植物精油組對肉雞的ADFI、ADG以及FCR沒有影響。在第22～39 d，與對照組相比，葛根素組和植物精油②組顯著降低肉雞的料重比（P＜0.05）。在第0～39 d，與對照組相比，葛根素組、植物精油①組和植物精油②組顯著降低了肉雞的料重比（P＜0.05）。

2.2 葛根素和復(fù)合植物精油對肉雞血清生化指標的影響（見表3）

表3 葛根素和復(fù)合植物精油對肉雞血清生化指標的影響

由表3可知，在第21 d，與對照組相比，葛根素組顯著降低了血清堿性磷酸酶的活力（P＜0.05），植物精油①組和植物精油②組降低了血清堿性磷酸酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活力（P＜0.05），植物精油②組顯著降低了血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力、三酰甘油含量（P＜0.05）；與葛根素組相比，植物精油①組顯著降低了血清堿性磷酸酶活力、谷草轉(zhuǎn)氨酶活力（P＜0.05），植物精油②組顯著降低了血清總膽紅素含量、谷草轉(zhuǎn)氨酶活力（P＜0.05）；與植物精油①組相比，植物精油②組顯著降低了血清總膽紅素含量、三酰甘油含量（P＜0.05）。

在第39 d，與對照組相比，葛根素組顯著降低了血清堿性磷酸酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活力以及三酰甘油含量(P＜0.05)，植物精油①組和植物精油②組顯著降低了血清堿性磷酸酶活力、谷草轉(zhuǎn)氨酶活力、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力(P＜0.05)，植物精油②組顯著降低了三酰甘油含量(P＜0.05)；與葛根素組相比，植物精油①組顯著降低了血清谷草轉(zhuǎn)氨酶的活力和提高了三酰甘油的含量(P＜0.05)，植物精油②組顯著降低了血清堿性磷酸酶活力(P＜0.05)；與植物精油①組相比，葛根素組和植物精油②組顯著降低了三酰甘油含量(P＜0.05)。

2.3 葛根素和復(fù)合植物精油對肉雞腸道形態(tài)的影響（見表4）

表4 第39 d葛根素和復(fù)合植物精油對肉雞腸道形態(tài)的影響

由表4可知，與對照組相比，葛根素組顯著地降低了回腸絨毛高度、隱窩深度、絨毛高深比、絨毛面積（P＜0.05）；植物精油①組顯著地增加了十二指腸和回腸的隱窩深度（P＜0.05），顯著降低了十二指腸絨毛高深比、回腸絨毛高度、回腸絨毛高深比（P＜0.05）。與葛根素組相比，植物精油①組顯著地升高了十二指腸的隱窩深度，回腸的絨毛高度、隱窩深度、絨毛面積（P＜0.05）；植物精油②組顯著增加了回腸的絨毛高度、隱窩深度（P＜0.05），顯著降低了空腸的隱窩深度、絨毛面積（P＜0.05）。與植物精油①組相比，植物精油②組顯著降低了空腸的隱窩深度、絨毛面積，回腸的隱窩深度（P＜0.05）。

3 討論

3.1 葛根素和復(fù)合植物精油對肉雞生長性能的影響

在試驗中，0～21 d試驗組對肉雞的平均日采食量和平均日增重效果都沒有影響，葛根素組和復(fù)合植物精油②組顯著改善了肉雞生長后期的飼料轉(zhuǎn)化效率。劉博等[8]在愛拔益加肉雞日糧中加入不同劑量的葛根總黃酮，發(fā)現(xiàn)10 mg/kg組相比于對照組可以降低21日齡以后的料重比，但是對平均日增重沒有影響，這與本試驗結(jié)果類似。李莉等[9]飼喂黃羽肉雞5、10、20 mg/kg山楂葉總黃酮，發(fā)現(xiàn)不同劑量的山楂葉總黃酮可以改善黃羽肉雞后期生長性能。班暉瓊等[10]探究了葛根素對畜禽脂質(zhì)代謝的影響，葛根素可能是通過調(diào)控畜禽脂質(zhì)代謝來改善其生長性能。脂肪沉積及代謝是一個受到多種因素影響的復(fù)雜生理過程，正常情況下是處于一個動態(tài)平衡的過程，葛根素可以調(diào)節(jié)畜禽脂肪的沉積以及代謝。本試驗從血清生化指標可以看出葛根素對脂質(zhì)代謝具有改善作用，這可能是葛根素改善飼料轉(zhuǎn)化效率的途徑之一。

近些年，不論國內(nèi)外都對植物精油研究較多，總體上看植物精油對肉雞生長性能是具有促進作用，但是存在添加劑量差異大、結(jié)果不一致的問題。呂勇等[11]用500 g/t植物精油Ⅰ、300 g/t植物精油Ⅱ、500 g/t植物精油Ⅱ和1 000 g/t植物精油Ⅱ飼喂肉雞，在0～21日齡階段，植物精油各組間的料重比無顯著差異，在22～42日齡階段，添加植物精油均可以顯著地降低肉雞的料重比。試驗獲得相似地結(jié)果，植物精油降低了肉雞生長后期的料重比。張文靜[12]在肉仔雞飼糧中分別添加低、中、高劑量的復(fù)合植物精油，發(fā)現(xiàn)添加植物精油可以顯著地提高肉仔雞的平均日增重，顯著地降低肉仔雞的料重比。王蘭等[13]在肉雞飼糧中添加復(fù)合植物精油（百里香酚、香芹酚、肉桂醛和載體糊精粉），發(fā)現(xiàn)植物精油對肉雞的生長性能沒有顯著影響，但試驗組與對照組相比數(shù)值有一定程度的改善。刁慧[14]在仔豬日糧中添加不同劑量的百里香酚，發(fā)現(xiàn)其可以顯著地降低斷奶仔豬的料重比，提高斷奶仔豬的平均日增重和平均日采食量。植物精油在畜禽上的應(yīng)用效果已有較多研究報道，植物精油對畜禽的生長性能具有一定的改善作用，但是由于植物精油的成分不同或者研究的對象不同，導(dǎo)致試驗結(jié)果產(chǎn)生差異[15-16]。

3.2 葛根素和復(fù)合植物精油對肉雞血清生化指標的影響

畜禽機體的代謝過程是保持機體組織或者器官等處于一個動態(tài)平衡的過程，血清生化指標可以用來判斷這些過程或者組織器官是否正常運作，血清總蛋白含量就可以反映機體蛋白合成代謝的效率，以及蛋白參與的反應(yīng)是否正常進行[16]。膽紅素是肝臟代謝的重要物質(zhì)，肝細胞可以攝取、結(jié)合血液中的膽紅素，如果肝細胞功能障礙就會導(dǎo)致膽紅素在血液中升高。堿性磷酸酶的活力反映出機體脂肪的吸收與分解、物質(zhì)跨膜運輸?shù)裙δ堋A性磷酸酶與禽類骨骼代謝有關(guān)。轉(zhuǎn)氨酶在蛋白質(zhì)、糖類和脂肪三者轉(zhuǎn)化上有著重要的作用，并且谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活力通常是反映肝功能的重要指標，當肝功能出現(xiàn)障礙時，肝細胞中的轉(zhuǎn)氨酶會釋放進入血液，導(dǎo)致其活力增高。膽固醇和三酰甘油可以反映畜禽對脂類的吸收情況，膽固醇升高可能會導(dǎo)致動脈硬化[17]。

本試驗中，與對照組相比，葛根素組第21 d顯著降低了堿性磷酸酶活性，顯著降低第39 d血清堿性磷酸酶活性、三酰甘油含量、谷草轉(zhuǎn)氨酶活力、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力。張鵬斐等[18]對葛根類黃酮的結(jié)構(gòu)和功能進行了總結(jié)，葛根黃酮類化合物能夠?qū)怪|(zhì)的抗氧化作用起到保護肝臟的效果。班暉瓊等[10]通過試驗發(fā)現(xiàn)葛根素主要是通過改善脂質(zhì)的代謝，降低三酰甘油等來發(fā)揮作用。田青[19]通過飼喂櫻桃谷鴨包括葛根素的三種不同成分的異黃酮，發(fā)現(xiàn)葛根素對櫻桃谷鴨蛋白質(zhì)代謝無影響。本試驗表明葛根素在抗氧化、改善脂質(zhì)代謝、改善肝臟代謝酶的活力方面有一定的促進作用，與前人研究結(jié)果相似，與生長性能的改善作用相吻合。

在本試驗中，與對照組相比，植物精油①、②組顯著降低了第39 d血清谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力(P＜0.05)，且植物精油②組效果要優(yōu)于植物精油①組，并且植物精油②組還可以降低第21 d血清總膽紅素和三酰甘油含量。段瑞[20]研究包被肉桂油飼喂肉雞發(fā)現(xiàn)，添加包被肉桂油可以降低谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力，并且在試驗前期還能夠影響蛋白質(zhì)代謝，不過隨著劑量的增加，影響效果逐漸減弱。朱曉磊[21]飼喂麻花雞不同劑量的百里香酚顯著降低了血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力，但對谷草轉(zhuǎn)氨酶活力無影響。夏夢芳[22]分別在不同周齡期間在肉雞飲水中加入不同劑量的植物精油制劑，研究結(jié)果表明，該植物精油水劑可以提高肉雞血清中總蛋白含量，降低膽固醇含量。上述研究與本試驗結(jié)果存在一定的差異，可能是由于本試驗所用植物精油是由百里香酚和肉桂油兩種植物精油復(fù)合而成，與單一植物精油作用效果存在不同，但總的來說都能夠?qū)θ怆u生長起到促進作用。

3.3 葛根素和復(fù)合植物精油對肉雞腸道形態(tài)的影響

小腸是動物消化吸收營養(yǎng)物質(zhì)的主要場所，小腸形態(tài)學(xué)指標可以用來衡量小腸對養(yǎng)分的消化吸收能力。在本試驗中，與對照組相比，葛根素組對十二指腸和空腸的腸道形態(tài)沒有顯著影響，并顯著地降低了回腸的絨毛高度、隱窩深度和絨毛面積。根據(jù)黎醒等[23]的研究表明，丹參素在大鼠的十二指腸、空腸中提高吸收率的作用不明顯，但是通過丹參素與葛根素聯(lián)合作用后，在大鼠的腸道中對營養(yǎng)的滲透系數(shù)明顯增加，促進了營養(yǎng)的吸收。而范昕[24]的研究則表明葛根素與其他葛根中藥材成分具有良好的線性關(guān)系，吸收作用比較穩(wěn)定，并且其余的葛根成分能夠有效地促進葛根素對腸道的吸收。本試驗添加20 mg/kg葛根素對肉雞的腸道形態(tài)沒有顯著影響，但是對腸道營養(yǎng)物質(zhì)吸收的影響尚不清楚。

在本試驗中，與對照組相比，葛根素組顯著降低了回腸絨毛高度、隱窩深度、絨毛高深比、絨毛面積；復(fù)合植物精油①組顯著地增加了十二指腸的隱窩深度，顯著降低了回腸的絨毛高度和絨毛高深比，對腸道形態(tài)也沒有改善作用。與我們的結(jié)果不同，毛紅霞等[25]和Kroismayr等[26]在肉雞飼糧中加入不同劑量的植物提取精油混合物，顯著地提高了回腸的絨毛高深比。王思宇等[27]在斷奶仔豬日糧中添加不同劑量的植物精油NE150顯著地降低了十二指腸、空腸、回腸的隱窩深。嚴霞等[28]在竹絲肉雞的日糧中添加復(fù)合植物精油，可以提高十二指腸絨毛高度及絨毛高深比值、提高回腸絨毛長度。本試驗中，葛根素和復(fù)合植物精油可能不是通過影響腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)揮改善飼料轉(zhuǎn)化效率的作用。

4 結(jié)論

添加20 mg/kg葛根素和500 mg/kg復(fù)合植物精油對生長后期肉雞飼料轉(zhuǎn)化效率、脂質(zhì)代謝和肝臟代謝活力具有一定的改善作用；500 mg/kg復(fù)合植物精油效果優(yōu)于20 mg/kg葛根素。添加葛根素和復(fù)合植物精油對第39 d的肉雞的腸道形態(tài)有改善作用。