■易 鑫杜 紅彭佳昊 徐 丹 孫弟芬陳 芬趙小玲舒 剛*

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，四川成都 611130；2.四川宜賓山勾勾農(nóng)業(yè)科技有限公司，四川宜賓 644000）

蛋雞產(chǎn)蛋周期可分為產(chǎn)蛋前期、高峰期和產(chǎn)蛋后期[1]。當(dāng)?shù)半u進(jìn)入產(chǎn)蛋后期后，產(chǎn)蛋率開始下降，并且蛋品質(zhì)開始降低[2]。產(chǎn)蛋后期，蛋雞產(chǎn)蛋率的降低不僅與其營養(yǎng)的攝入有關(guān)，而且還與其體內(nèi)自由基的不斷增多有關(guān)，且過多的自由基會對機(jī)體細(xì)胞帶來損傷，進(jìn)而影響機(jī)體器官功能[3]。而生產(chǎn)性能與蛋品質(zhì)的降低，會直接影響?zhàn)B殖戶的經(jīng)濟(jì)效益，因此，改善產(chǎn)蛋后期蛋雞的抗氧化能力，提高其生產(chǎn)性能、改善其蛋品質(zhì)，對于延長蛋雞使用年限、提高蛋雞經(jīng)濟(jì)效益具有重要意義。

辣木(Moringa oleifera Lam.)隸屬辣木科，又稱辣根樹等，是一種生長迅速的小型常綠或落葉樹，樹高通常長10～12 m，目前廣泛種植于熱帶和亞熱帶國家和地區(qū)[4]。辣木葉是辣木的樹葉，其活性成分主要有黃酮類、生物堿類、糖苷類、異硫氰酸酯、有機(jī)酸、有機(jī)酸酯等，其藥理作用包括降血糖、降血脂、抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、肝腎調(diào)節(jié)、抗癌等[5]。辣木葉具有較好的科研價值和推廣應(yīng)用前景，具有改善蛋雞的產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、生理代謝作用，其作用效果受動物品種、添加量、生理狀態(tài)等因素的影響[6]。陸唯[7]在基礎(chǔ)飼料中添加5%、10%、15%的辣木葉粉，其研究結(jié)果表明，添加高劑量的辣木葉粉對蛋雞會產(chǎn)生不良影響，而5%～10%的添加量較為適宜，可以改善蛋清品質(zhì)和哈夫單位，提高蛋黃顏色和蛋雞抗氧化能力。習(xí)欠云等[8]用2%、4%和8%的辣木葉粉替代等量基礎(chǔ)飼糧飼喂蛋雞，其研究結(jié)果表明，添加4%～8%的辣木葉粉對其生產(chǎn)性能無不良影響，但可顯著提高蛋黃顏色，但未研究其抗氧化能力。Wei等[9]研究表明，添加5%的辣木葉可提高蛋黃顏色、機(jī)體抗氧化能力、促進(jìn)了機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)吸收，而10%和15%的添加量會使機(jī)體甲醛含量升高。根據(jù)本實驗室前期預(yù)試驗結(jié)果顯示，添加40 g/kg的辣木葉較為適宜。

地衣芽孢桿菌是一種革蘭氏陽性菌，具有酶種類豐富、耐熱、產(chǎn)酶量高、安全性好等諸多優(yōu)點[10]。將地衣芽孢桿菌作為飼料添加劑使用，具有維護(hù)畜禽腸道微健康、促進(jìn)動物生長、提高免疫力等作用[11]。雷凱[12]在蛋雞基礎(chǔ)飼料中添加0.01%、0.02%、0.03%、0.06%、0.09%的地衣芽孢桿菌，研究發(fā)現(xiàn)，地衣芽孢桿菌能顯著提高產(chǎn)蛋率和產(chǎn)蛋量，其中0.01%和0.06%的添加量最佳；地衣芽孢可以提高蛋殼強(qiáng)度和厚度；能顯著降低血清中二胺氧化酶活性和D-乳酸，表明蛋雞的腸道通透性顯著降低；并且還能顯著降低血清中促腎上腺皮質(zhì)激素水平，顯著提高促卵泡激素和雌二醇的分泌水平。景翠等[13]在飼糧中添加1×109、2×109、3×109CFU/kg的地衣芽孢桿菌，研究表明，地衣芽孢桿菌可以平衡腸道菌群、改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)且效果明顯。孫全友等[14]研究表明，100 mg/kg的地衣芽孢桿菌能降低肉仔雞料重比，提高平均日增重，降低腸道中大腸桿菌和沙門氏菌的含量，提高乳酸桿菌和雙歧桿菌的含量。

目前，對于辣木葉在產(chǎn)蛋后期蛋雞上的應(yīng)用較少，且辣木葉與地衣芽孢桿菌二者的聯(lián)用試驗更少。研究的重要意義在于，辣木葉具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、肝腎調(diào)節(jié)、抗癌作用，地衣芽孢桿菌具有維護(hù)畜禽腸道微健康、促進(jìn)動物生長、提高免疫力等作用，兩者聯(lián)用可以從多方面促進(jìn)蛋雞健康并且提高生產(chǎn)性能，以達(dá)到替代抗生素的目的。所以本試驗旨在通過在產(chǎn)蛋后期蛋雞日糧中添加辣木葉以及辣木葉和地衣芽孢桿菌的聯(lián)用，探究其對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、抗氧化能力的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

辣木葉粉（粒徑大小為100目）購自攀枝花市春成商貿(mào)有限公司；地衣芽孢桿菌（含量為1.0×1010CFU/g）由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)微生態(tài)研究中心提供。50周齡海蘭灰蛋雞由宜賓山勾勾農(nóng)業(yè)科技有限公司生產(chǎn)基地提供。

1.2 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理

將288只50周齡健康無病海蘭灰蛋雞隨機(jī)分為4組，每組4個重復(fù)，每個重復(fù)12只，每組72只，分別為對照組、試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組在基礎(chǔ)飼糧的基礎(chǔ)上分別按照40 g/kg辣木葉、0.1 g/kg地衣芽孢桿菌、40 g/kg辣木葉和0.1 g/kg地衣芽孢桿菌的劑量進(jìn)行添加，藥物以等量遞加法與飼料混合均勻。相關(guān)試驗研究在宜賓山勾勾農(nóng)業(yè)科技有限公司養(yǎng)殖場開展。預(yù)試期1周，正式試驗期6周，試驗期間蛋雞自由采食和飲水。基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 樣品采集

每周從每個組中選取6枚蛋，在24 h內(nèi)檢測雞蛋的蛋橫徑、蛋縱徑、蛋型指數(shù)、蛋白高度、哈夫單位、蛋黃顏色、蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度、蛋殼重、蛋殼比例、蛋黃重指標(biāo)。試驗結(jié)束時，每組隨機(jī)選取6只體重一致的蛋雞，共24只，禁飼12 h(不禁水)，對蛋雞進(jìn)行稱重，頸靜脈處采集5 mL血液，分離血清，置于-80℃條件下保存并待測。然后屠宰分離肝臟置于-80℃條件下保存并待測。

1.4 指標(biāo)測定及方法

1.4.1 產(chǎn)蛋性能

試驗期間，每天統(tǒng)計各重復(fù)蛋雞的產(chǎn)蛋數(shù)、破蛋數(shù)、畸形蛋（包括過大、過小、過長蛋）、砂殼蛋數(shù)、合格蛋重（指除去破殼蛋、砂殼蛋數(shù)和畸形蛋后的總蛋重），計算產(chǎn)蛋率、次品蛋率（破蛋率、砂殼蛋率、畸形蛋）、平均合格蛋重、料蛋比。

1.4.2 蛋品質(zhì)測定

采用游標(biāo)卡尺測定雞蛋橫徑和縱徑，計算蛋型指數(shù)；采用蛋白高度儀測定蛋白高度和蛋殼厚度，計算哈夫單位；采用羅氏比色扇測定蛋黃顏色；采用蛋殼強(qiáng)度測定儀測定蛋殼強(qiáng)度；用分離器將蛋黃與蛋清分離，采用電子天平對蛋黃、蛋殼進(jìn)行稱重。

1.4.3 血清抗氧化指標(biāo)測定

血清中丙二醛（MDA）含量、總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性、總抗氧化能力（T-AOC）用試劑盒(購自南京建成生物工程研究所)進(jìn)行測定，測定方法嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.4.4 肝臟抗氧化指標(biāo)測定

肝臟中總蛋白（TP）含量、丙二醛（MDA）含量、總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性、總抗氧化能力（TAOC）、還原型谷胱甘肽（GSH）含量用試劑盒(購自南京建成生物工程研究所)進(jìn)行測定，測定方法嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗數(shù)據(jù)運用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計，并進(jìn)行正態(tài)分布檢驗，符合正態(tài)分布的采用單因子方差分析進(jìn)行差異顯著性檢驗，最小顯著差數(shù)法（LSD）進(jìn)行多重比較，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示；不符合正態(tài)分布的采用非參數(shù)秩和檢驗，結(jié)果以中位數(shù)表示，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的影響（見表2）

表2 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，與對照組相比，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組在產(chǎn)蛋率、平均合格蛋重、料蛋比、砂殼蛋率、次品蛋率、破蛋率、畸形蛋率方面無顯著差異(P＞0.05)。

2.2 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)的影響（見表3）

表3 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，與對照組相比，試驗Ⅰ組蛋黃顏色和蛋黃重分別提高了46.41%和10.63%，具有顯著差異(P＜0.05)；試驗Ⅱ組蛋殼重提高了20.15%，蛋殼比例提高了14.88%，具有顯著差異(P＜0.05)；試驗Ⅲ組蛋黃顏色和蛋黃重分別提高了58.57%和12.52%，具有顯著差異(P＜0.05)。

2.3 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期血清抗氧化指標(biāo)的影響（見表4）

由表4可知，與對照組相比，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組的MDA含量均無顯著差異(P＞0.05)；與對照組相比較，試驗Ⅰ組的T-AOC和T-SOD活性分別提高了69.86%和12.45%，試驗Ⅱ組的T-AOC、T-SOD活性分別提高了97.26%、9.38%，具有顯著差異(P＜0.05)。

表4 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期血清生化指標(biāo)的影響

2.4 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期肝臟抗氧化指標(biāo)的影響（見表5）

表5 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，與對照組相比，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組的MDA含量，T-AOC、T-SOD活性和GSH、TP含量均無顯著差異(P＞0.05)。但與對照組相比，試驗組MDA含量和GSH含量有提高的趨勢。

3 討論

3.1 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期產(chǎn)蛋性能的影響

辣木葉中含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素和大量微量元素，并且辣木葉容易消化和吸收，因而可以提高動物的生產(chǎn)性能[15]。王志剛[15]研究發(fā)現(xiàn)，辣木葉降低了育雛期鵪鶉采食量，提高了平均日增重，提高了飼料轉(zhuǎn)化率，提高了育雛期鵪鶉的生產(chǎn)性能。胡詩慧[16]在辣木葉替代菜籽餅作為蛋白飼料的研究中發(fā)現(xiàn)，辣木葉可以使文昌雞日增重、日采食量和總增重提高，使料重比降低，改善其生產(chǎn)性能，其替代比例可達(dá)5%。陸唯[7]研究發(fā)現(xiàn)，添加5%的辣木葉對蛋雞產(chǎn)蛋率和飼料轉(zhuǎn)化率無影響，添加15%的辣木葉會使蛋雞產(chǎn)蛋率下降，料蛋比升高，對生產(chǎn)性能產(chǎn)生負(fù)面影響。本試驗中，飼糧中添加辣木葉以及辣木葉與地衣芽孢桿菌的聯(lián)合應(yīng)用的結(jié)果與前人研究結(jié)果相似。辣木葉對產(chǎn)蛋率無影響的原因可能是其營養(yǎng)物質(zhì)主要被機(jī)體吸收轉(zhuǎn)化為肌肉蛋白或脂肪，而利用在產(chǎn)蛋方面的能量較少。

3.2 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)的影響

N'nanle等[17]研究發(fā)現(xiàn)，在整個試驗期，辣木葉提高了薩索母雞蛋黃顏色，蛋白和蛋黃比有顯著性差異，提高了雞蛋蛋品質(zhì)。Abou-Elezz等[18]研究發(fā)現(xiàn)，辣木葉可以使羅德島紅母雞的蛋黃顏色顯著升高，降低了蛋黃百分比，升高了蛋白百分比，改善了蛋品質(zhì)。Wei等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加5%的辣木葉可以提高雞蛋蛋黃顏色，提高蛋白的穩(wěn)定性。本試驗結(jié)果與前人研究結(jié)果一致，辣木葉以及辣木葉和地衣芽孢桿菌二者的聯(lián)用使蛋黃顏色均有顯著提升，在提高蛋品質(zhì)效果上顯著優(yōu)于地衣芽孢桿菌的單獨使用。蛋黃的顏色取決于蛋黃中類胡羅素含量的多少，雞的機(jī)體本身不能合成該物質(zhì)，只能從食物中獲取，食物中的色素被機(jī)體吸收后，在卵黃和雞體表沉積，色素含量越多，蛋黃色澤越深[19]。而辣木葉中含有豐富的維生素和類胡蘿卜素。郭剛軍等[20]認(rèn)為多油辣木葉中含量最高的為蛋白質(zhì)、維生素C、維生素E、維生素B6、β-胡蘿卜素、P、Ca與Mg。因此，蛋黃顏色的加深可能與辣木葉中含有豐富的天然色素有關(guān)。

3.3 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期血清抗氧化能力的影響

辣木葉中所含的多糖、多酚、黃酮等物質(zhì)具有較強(qiáng)的抗氧化能力[21-23]。張婷婷等[24]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加6%和9%的辣木葉使育肥豬的肌肉總抗氧化能力和SOD活性顯著提高，改善了育肥豬抗氧化功能。張幸怡等[25]研究發(fā)現(xiàn)，辣木葉粉能夠有效提高大鼠肝臟和血液的谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和過氧化氫酶(CAT)的活力，使丙二醛(MDA)的含量降低，從而提高機(jī)體抗氧化能力。Abu等[26]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加辣木葉可提高谷胱甘肽(GSH)、過氧化氫酶和超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶的活性，降低TBARS水平。本試驗結(jié)果與前人研究結(jié)果一致，在飼糧中添加辣木葉可以顯著提高血清總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性和總抗氧化能力（T-AOC），且效果優(yōu)于地衣芽孢桿菌的單獨使用；與對照組相比，辣木葉與地衣芽孢桿菌二者的聯(lián)用也使機(jī)體總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性和總抗氧化能力（T-AOC）提高。

3.4 辣木葉與地衣芽孢桿菌對蛋雞產(chǎn)蛋后期肝臟抗氧化能力的影響

關(guān)于辣木葉和地衣芽孢桿菌對蛋雞肝臟抗氧化能力的影響的研究較少，還需進(jìn)一步試驗探索其影響機(jī)理。解靜等[27]研究發(fā)現(xiàn)，辣木葉粉飼料組的小鼠肝臟表達(dá)上調(diào)和下調(diào)的差異表達(dá)基因共有1 227個，其中包括過氧化物酶體表達(dá)基因上調(diào)，故而辣木葉對小鼠肝臟的抗氧化能力有一定提升作用。陸唯[7]研究發(fā)現(xiàn)，在過氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激條件下，辣木葉粉粗提物可使體外肝臟細(xì)胞SOD活性、T-AOC提高以及MDA含量下降。徐鵬[28]研究發(fā)現(xiàn)，地衣芽孢桿菌TS-01分泌的胞外多糖對蛋雞肝細(xì)胞T-AOC有提高趨勢但是效果不明顯，可以顯著降低MDA的含量。本試驗結(jié)果與前人研究結(jié)果一致，與對照組相比，試驗組MDA含量和GSH含量有提高的趨勢，但是沒有顯著性變化，說明辣木葉和地衣芽孢桿菌以及二者的聯(lián)用對肝臟的抗氧化能力有一定的作用，而作用不明顯的原因可能為辣木葉和地衣芽孢桿菌添加量較少。

4 結(jié)論

在生產(chǎn)性能方面，辣木葉以及辣木葉和地衣芽孢桿菌聯(lián)合使用無不良影響。在蛋品質(zhì)方面，辣木葉以及辣木葉和地衣芽孢桿菌聯(lián)合使用對產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋黃顏色和蛋黃重有所改善，且效果優(yōu)于地衣芽孢桿菌單獨使用。在抗氧化能力方面，辣木葉、地衣芽孢桿菌以及辣木葉和地衣芽孢桿菌聯(lián)合使用均可使產(chǎn)蛋后期蛋雞血清抗氧化能力提升。綜上所述，辣木葉以及辣木葉和地衣芽孢桿菌聯(lián)合使用對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能無不利影響，對蛋品質(zhì)、抗氧化能力有較好改善作用。