字海靜，杜建平，陳 英，席 瑞，李尚存，高云鹍，肖 瑜

（1云南省楚雄州大姚縣人民醫(yī)院內(nèi)四科 云南 楚雄 675400）

（2云南省楚雄州大姚縣人民醫(yī)院辦公室 云南 楚雄 675400）

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征以打鼾、呼吸暫停和白天嗜睡為主要表現(xiàn)。OSA患者睡眠時反復(fù)發(fā)生上氣道塌陷、阻塞，會造成通氣不足，間歇性缺氧、高碳酸血癥以及睡眠結(jié)構(gòu)紊亂，嚴(yán)重者甚至?xí)霈F(xiàn)高血壓、心律失常、認(rèn)知功能障礙等多器官系統(tǒng)損害[1]。國內(nèi)相關(guān)研究顯示，14歲以上男性和女性中OSA患病率分別為4.1%和2.4%，隨著生活方式和生活習(xí)慣的改變，這種患病率可能被低估[2]。近年研究顯示OSA發(fā)病率在不斷增加。越來越多的研究證實OSA是動脈粥樣硬化、高血壓、心肌梗塞、心律失常、糖尿病等眾多心血管、代謝疾病的獨立危險因素，因此對于早期診斷認(rèn)識OSA具有重要的意義[3]。Hypocretin又稱Orexin，于1998年首次被發(fā)現(xiàn)，Orexins又稱為Hcrts，是下丘腦腹后外側(cè)區(qū)某種特異神經(jīng)元合成的前體裂解成兩個成熟的33氨基酸多肽Orexin A和28氨基酸多肽Orexin。本文旨在了解高原地區(qū)OSA患者HCRT蛋白的變化情況，并探討OSA患者血HCRT水平變化及其對OSA診斷的價值。

1.資料與方法

1.1 對象

選取我院2019年3月—2020年3月 期 間 收 治的30例OSA患者與健康體檢的30例健康者，分別納入實驗組和對照組。實驗組中，男性17例，女性13例，年齡39～79歲，平均年齡（55.98±3.20）歲；對照組中，男性18例，女性12例，年齡40～78歲，平均年齡（56.43±3.19）歲。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析比較，兩組人群各項基線資料的比較差異不顯著。入選、排除標(biāo)準(zhǔn)如下。

1.1.1 入 選 標(biāo) 準(zhǔn) （1）年 齡30～80歲 之 間；（2）行全夜便攜式睡眠監(jiān)測及睡眠問卷的受試者；（3）簽署知情同意書。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）有嚴(yán)重心腦血管病變、肝腎功能不全等慢性疾病史；（2）有代謝綜合征，胰島素抵抗，糖耐量異常以及糖尿病患者；（3）有甲狀腺基礎(chǔ)疾病的患者；（4）明顯攝食障礙以及營養(yǎng)狀況不良的患者；（5）無法配合監(jiān)測及回答問題；（6）近3個月外傷、手術(shù)史者。

1.1.3 所需的研究材料 基本信息：年齡、身高、體重、性別、職業(yè)、生活環(huán)境及方式、藥物使用情況等。生物標(biāo)本：血液標(biāo)本（10 mL/人次），于便攜式睡眠監(jiān)測之后的清晨6點空腹抽血。

1.2 測量方法、指標(biāo)及統(tǒng)計學(xué)方法

1.2.1 測量方法 運用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）法檢測血清HCRT水平，實驗采用雙抗夾心法，加入樣本和標(biāo)準(zhǔn)品與目標(biāo)抗體結(jié)合，洗去游離成分，加入生物素化的目標(biāo)抗體形成免疫復(fù)合物，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，生物素與親和素特異性結(jié)合，加入顯色劑，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑顯藍色，加終止液變黃，在450 nm下測OD值，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中目標(biāo)抗體濃度。

1.2.2 操作方法 根據(jù)待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量計算所需板條數(shù)，實驗設(shè)空白對照孔，37℃溫箱孵育90 min。洗板4次，注入洗滌液200 mL靜置30 S后甩盡液體，在吸水紙上拍干。加入生物素抗體工作液（100 mL/孔）37℃溫箱孵育60 min。洗板4次，加入辣根過氧化物酶工作液（100 mL/孔）37℃溫箱孵育30 min。洗板4次，加入顯色劑100 mL/孔，避光，37℃溫箱孵育10～20 min。加入終止液100 mL/孔，混勻后即刻測量OD450值。

1.2.3 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn) 確保試劑配制充分混勻，避免試劑產(chǎn)生大量氣泡。對于不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，在取樣本時需更換吸頭。在實驗開始前需進行預(yù)實驗，若預(yù)實驗結(jié)果顯示樣本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，則應(yīng)適當(dāng)稀釋后重新檢測，計算濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。結(jié)果重復(fù)性，板間，板內(nèi)變異系數(shù)均＜10%。靈敏度：最低檢測樣本目標(biāo)抗體劑量小于標(biāo)準(zhǔn)品最低濃度。方法：20個零標(biāo)準(zhǔn)的平均OD值增加兩個標(biāo)準(zhǔn)差，在計算相應(yīng)濃度。特異性：該試劑盒克檢測天然和重組目標(biāo)抗體，與其他細(xì)胞因子及蛋白均不反應(yīng)。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 20.0分析HCRT水平與OSA嚴(yán)重程度指標(biāo)，如：睡眠呼吸暫停低通氣指數(shù)（AHI）、夜間最低血氧飽和度等的相關(guān)性，計量資料經(jīng)t檢驗、計數(shù)資料經(jīng)χ2檢驗，以P＜0.05表示數(shù)據(jù)的比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

統(tǒng)計學(xué)結(jié)果顯示，OSA患者血HCRT水平顯著低于正常（P＜0.05）。通過對實驗數(shù)據(jù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，發(fā)現(xiàn)實驗組較正常組低，且與OSA嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，即OSA越嚴(yán)重，食欲素蛋白越低，見表1。

表1 實驗組與正常組HCRT水平比較表（±s, ng/mL）

表1 實驗組與正常組HCRT水平比較表（±s, ng/mL）

組別 例數(shù) HCRT水平實驗組 30 0.62±0.31正常組 30 2.92±0.87 t 13.472 P＜0.05

3.討論

OSA為高原地區(qū)較為常見的一種睡眠呼吸障礙性疾病，指在睡眠過程中出現(xiàn)的，因為呼吸道反復(fù)塌陷、阻塞而造成的反復(fù)微覺醒、睡眠結(jié)構(gòu)異常的癥狀，在反復(fù)覺醒的過程中患者還伴有不同程度的低氧血癥，屬于典型的典型的缺氧-復(fù)氧模式。此外，人體為了應(yīng)對反復(fù)出現(xiàn)的上氣道阻塞，在睡眠時機體會自主增加呼吸肌做功，導(dǎo)致胸腔負(fù)壓因此增大；同時，因為呼吸不暢導(dǎo)致的低氧和二氧化碳潴留，將直接影響到中樞交感神經(jīng)的調(diào)控部位，促使交感神經(jīng)興奮，導(dǎo)致自主神經(jīng)功能紊亂。基于上述病理機制，患者在臨床上多表現(xiàn)為不同程度的打鼾、夜尿增多、自覺憋氣，且晨起后有明顯的頭痛頭暈、口咽干燥感，長此以往，患者的生活質(zhì)量、性功能等將因此顯著下降，嚴(yán)重者甚至還將伴隨認(rèn)知功能異常、行為異常。作為一種全身性疾病，OSA對于人體的傷害是巨大的，是導(dǎo)致猝死的危險因素，只有明確OSA的發(fā)病機制、探明OSA的進展特點，才能針對性用藥，確保疾病得到有效控制，保證患者的身體健康和生命安全。

目前OSA的發(fā)病率呈逐漸上升，數(shù)據(jù)表明，我國成人人群中，呼吸睡眠疾病的患病率為3.5%～4.8%，而在患有呼吸睡眠疾病的人群中，約有42.7%的人為呼吸睡眠障礙。調(diào)查數(shù)據(jù)表明，我國人口基數(shù)大，失眠人口總數(shù)接近3億，其中，大約有5 000萬的失眠人口患有呼吸睡眠障礙[4]。以往研究證實，睡眠呼吸暫停綜合征會進一步加重呼吸衰竭，使得血管意外、心肌梗死、高血壓及內(nèi)分泌代謝性疾病等發(fā)生率上升，嚴(yán)重威脅著人民的身體健康。導(dǎo)致OSA原因眾多，除了常見的肥胖、年齡以外，OSA還可通過集體炎癥、氧化應(yīng)激反應(yīng)、自主神經(jīng)功能障礙等途徑發(fā)生。此外，凝血系統(tǒng)和抗凝系統(tǒng)的異常也是OSA的重要致病機制，研究認(rèn)為凝血系統(tǒng)和抗凝系統(tǒng)與慢性阻塞性肺疾?。–OPD）、支氣管哮喘、支氣管炎等呼吸道疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，而呼吸道疾病又將進一步增加OSA的發(fā)生率。

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)OSA與Hypocretin蛋白具有相關(guān)性，OSA患者的HCRT水平顯著低于正常人（P＜0.05）。對此，通過檢測OSA患者血HCRT水平變化對OSA及時診斷具有一定幫助。

綜上所述，現(xiàn)代社會工作節(jié)奏的不斷加快，導(dǎo)致睡眠相關(guān)疾病逐漸增多[5]。睡眠呼吸監(jiān)測技術(shù)在大姚區(qū)域內(nèi)無人開展，此技術(shù)操作簡便、技術(shù)成熟、使用性廣，設(shè)備投入成本不大，可用于阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征的診斷初篩，可提早發(fā)現(xiàn)、提早治療。