李樂， 于曉清， 李翹楚， 于道德， 鄒琰， 葉海斌， 吳海一， 刁菁

山東省海洋科學(xué)研究院，山東省海水養(yǎng)殖病害防治重點實驗室，山東青島266104

鮭鱒魚類是鮭魚和鱒魚的統(tǒng)稱，均隸屬于鮭科（Salmonidae），為世界三大主養(yǎng)品種之一，因生活環(huán)境清潔、肉質(zhì)細嫩且富含二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA）等不飽和脂肪酸等優(yōu)點深受消費者喜愛，在我國有50 多年的養(yǎng)殖歷史。養(yǎng)殖品種包括大西洋鮭、虹鱒、金鱒、銀鮭、硬頭鱒、七彩鮭、山女鱒等10余種，養(yǎng)殖區(qū)域涵蓋了北京、青海、黑龍江、遼寧、吉林、甘肅、山東、新疆等地，隨著近年來對黃海冷水團資源的發(fā)掘，鮭鱒魚養(yǎng)殖也從陸地走向了海洋[1-5]。

我國鮭鱒魚人工養(yǎng)殖規(guī)模逐年擴大，養(yǎng)殖技術(shù)日趨成熟，但養(yǎng)殖品種種質(zhì)退化、外源疾病輸入、養(yǎng)殖環(huán)境遭受破壞、防病意識缺乏以及其他人為原因?qū)е陆陙聿『︻l發(fā)，特別是傳染性造血器官壞死病、癤瘡病等暴發(fā)性疾病，給養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大危害[6-9]。因此，本文對我國養(yǎng)殖鮭鱒魚主要流行疫病種類、診斷技術(shù)以及免疫防控技術(shù)的研究現(xiàn)狀進行概述，旨在為鮭鱒魚養(yǎng)殖從業(yè)者對疫病的預(yù)防和診斷提供參考。

1 主要流行疫病

1.1 細菌性疾病

1.1.1 癤瘡病 癤瘡?。╢urunculosis）是鮭鱒養(yǎng)殖過程中常見細菌病之一，可分為急性型、亞急性型、慢性Ⅰ型及慢性Ⅱ型，虹鱒魚多表現(xiàn)為慢性型或亞急性型[10]，通常表現(xiàn)為體色發(fā)黑、眼球突出、食欲不振、腹部腫脹、鰭基部充血、皮膚潰瘍等。癤瘡病的病原為殺鮭氣單胞菌（Aeromonas salmonicida），屬氣單胞菌科（Aeromonadaceae）氣單胞菌屬（Aeromonas）[11]，是一種不能運動、兼性厭氧的革蘭氏陰性菌。殺鮭氣單胞菌具有廣泛的地理分布，其宿主范圍廣泛，主要危害鮭鱒魚類、鯉魚、大菱鲆等，可感染各個生長發(fā)育階段的海淡水魚類[11-14]。目前已知的殺鮭氣單胞菌分為：殺鮭亞種、無色亞種、殺日本鮭亞種、溶果膠亞種和史氏亞種等，其中殺鮭亞種為典型株。近年來，有學(xué)者根據(jù)其特異性毒力基因vapA序列的差異分為14個類型，呈現(xiàn)出一定程度的地緣特性[15-17]。

目前，我國對殺鮭氣單胞菌的分離鑒定、致病性、生長模型、藥敏特性等方面開展了相關(guān)研究。刁菁等[18]自虹鱒病魚中分離到一株致病菌，通過生理生化分析及分子生物學(xué)手段鑒定為A. salmonicida，并通過回染實驗和毒力因子（如氣溶素、溶血素、封閉帶毒素等）檢測，確定此菌株具有較強的致病力。田會芹等[19]則對從大西洋鮭患病個體分離的A. salmonicida開展了環(huán)境因子（溫度、pH）對其生長的影響研究，確定了其各單因子的適宜范圍，并以溫度為主要影響因子建立了生長模型。此外，有團隊研究了A.salmonicida感染對大西洋鮭游泳和變色型的影響及其生理機制，對受感染后體內(nèi)免疫系統(tǒng)以及與能量代謝相關(guān)的因子進行了量化分析，揭示了病變后的生理變化[20]。上述研究通過探明A. salmonicida致病機理、分析其生長特性、研究魚類感染后的行為變化和生理機制，來為疫苗研制、病害預(yù)警系統(tǒng)研發(fā)提供理論數(shù)據(jù)，有助于減少養(yǎng)殖鮭鱒魚類感染A.salmonicida的可能性，降低癤瘡病的發(fā)病率。

1.1.2 細菌性敗血癥 細菌性敗血癥也稱細菌性出血病、細菌性腹水病等，是一種水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中常見的病癥之一，病魚外部癥狀表現(xiàn)為體色發(fā)黑、腹部腫脹、尾部和鰭條出現(xiàn)壞死和糜爛，肛門和大部分皮膚出血且會惡化為水腫型潰爛，并伴有內(nèi)臟器官出血。嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）為該病主要病原，隸屬于氣單胞菌科氣單胞菌屬，是淡水養(yǎng)殖動物與重要的病原菌之一，嚴重危害鮭鱒魚類、草魚、牙鲆、鯽魚、團頭魴等魚類的養(yǎng)殖業(yè)，可引起細菌性敗血癥、腸炎，是一種典型的條件性致病菌，當飼養(yǎng)周邊條件、水質(zhì)指標發(fā)生劇烈變化時，常與其他病原菌混合感染使病情惡化[21-25]。研究表明，A. hydrophila致病性與自身兩大類致病因子密切相關(guān)：一類是本身具有致病作用，如溶血素、腸毒素等外毒素；另一類則與細菌的吸附、入侵機體有關(guān)，如菌毛、表面蛋白S 層等粘附因子[26-28]。

1.1.3 其他細菌性疾病 除癤瘡病、細菌性敗血癥兩類常見流行疫病外，還有爛鰓病、爛鰭病、紅嘴病、腸炎等細菌性疾病，相應(yīng)的病原種類繁多，多為條件致病菌，包括鰻弧菌、嗜鰓黃桿菌、魯氏耶爾森菌、遲鈍愛德華氏菌、海分枝桿菌、柱狀黃桿菌等，大多存在著混合感染的情況，對鮭鱒魚養(yǎng)殖業(yè)造成一定程度的危害[2,9,27-30]。

1.2 病毒性疾病

世界動物衛(wèi)生組織（Office International des épizooties，OIE）必須申報的魚類疫病中，以鮭鱒魚類作為宿主的有5種：傳染性鮭魚貧血癥、鮭魚甲病毒病、流行性造血器官壞死病、病毒性出血性敗血癥、傳染性造血器官壞死病，均為病毒性疾病，它們對全球鮭鱒魚類養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟打擊。我國貫徹執(zhí)行《中國人民共和國動物防疫法》，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部明確規(guī)定了《一、二、三類動物疫病病種名錄》[31]，其中流行性造血器官壞死病、傳染性造血器官壞死病、病毒性出血性敗血癥被歸為二類疫病，進行重點防疫。

水溫對上述病毒病的發(fā)病及死亡率影響較大，在水溫3～18 ℃均可造成魚類死亡，8～12 ℃為流行高峰。其中，傳染性造血器官壞死病在水溫10 ℃時，死亡率最高；水溫低于10 ℃時，潛伏期延長，病情呈慢性；水溫高于10 ℃時病情較急，顯示低死亡率；當水溫超過15 ℃后，一般不出現(xiàn)自然發(fā)病。

相較于歐洲、北美等地區(qū)，我國目前報道的病毒性疾病種類較少，主要為傳染性造血器官壞死病和傳染性胰腺壞死病2 種，目前國內(nèi)尚未有鮭鱒魚類暴發(fā)其他疾病的報道，但仍有較大的傳入風(fēng)險[32-34]。

1.2.1 傳染性造血器官壞死病 傳染性造血器官壞死病為農(nóng)業(yè)部二類動物疫病，也是OIE 必須申報的疫病，常發(fā)生于虹鱒魚養(yǎng)殖場，急性暴發(fā)會導(dǎo)致極高死亡率。該病病原為傳染性造血器官壞死病毒（infectious hematopoietic necrosis virus，IHNV），是一種單鏈RNA 病毒，彈狀病毒科，侵染的主要靶器官為腎造血組織[35-37]。IHNV 于20 世紀80年代傳入我國，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2011年起對其實施專項監(jiān)測，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所盧彤巖團隊于2012—2017 年在遼寧、北京、山東、甘肅、新疆、河北、云南、青海等省份均分離到相應(yīng)的病毒（圖1）[38]。

圖1 2012—2017年我國IHNV收集分布圖[38]Fig.1 Map of collection sites for IHNV in China from 2012 to 2017[38]

IHNV 的核酸序列約為11 000 bp，目前NCBI錄入的已有6 株完整的IHNV 毒株基因組被分離鑒定，其中 HLJ-09（JX64910）、BjLL（MF509592）及 CH20101008（KJ421216）均為國內(nèi)分離鑒定[39-40]。IHNV 蛋白則由 P、G、M、N 和 L 5 種結(jié)構(gòu)蛋白和1 種非結(jié)構(gòu)蛋白組成，通過對G 基因進行系統(tǒng)發(fā)育分析，將IHNV 分為5 個主要的基因型，即 U、M、L、E 和 J 型[41-42]，我國以 J 基因型為主，具有顯著的地域特性。IHNV 在稚魚和幼魚之間水平傳播是最主要的傳染方式，其主要通過接觸被病毒污染的水、食物、帶毒魚排泄的尿、糞便以及漁具等而感染[43]。

1.2.2 傳染性胰腺壞死病 傳染性胰腺壞死病主要危害20 周齡以內(nèi)的鮭鱒幼魚，一般為急性流行，短時間致死率可達90%以上，分布范圍廣泛，涉及我國山西、甘肅、山東、遼寧、四川等省份，其中1989 年發(fā)生的傳染性胰腺壞死病暴發(fā)導(dǎo)致山東省的鮭鱒魚類養(yǎng)殖損失接近90%[44]。其病原為傳染性胰臟壞死病毒（infectious pancreatic necrosis virus，IPNV），隸屬于雙RNA 病毒科，可通過垂直傳播和水平傳播將病毒粒子釋放到環(huán)境中，染病后幸存魚將成為IPNV的終身攜帶者。

IPNV 基因組包含 A 和 B 2 個線性 RNA 分子，B 鏈編碼的 VP1 為 RNA 聚合酶，A 鏈編碼 VP2、VP3、VP4 和 VP5 4 種蛋白，其中，VP2 作為主要外衣殼蛋白，含有主要的抗原表位決定簇，其217～221 位氨基酸與病毒的毒力密切相關(guān)，現(xiàn)階段大部分IPNV 的檢測、分類、免疫研究均以VP2 為研究對象[45-47]。2013 年 Ji 等[48]在云南某養(yǎng)殖場虹鱒中分離出了IPNV 毒株——ChRtm213，并確定了其全基因組序列，這是我國IPNV分離株的第一個基因序列，根據(jù)A 鏈序列比對分析，其與日本株AM-98（AY283780.1）聚為一簇。同時，劉淼等[49]根據(jù)VP2序列進行基因型分型，采用臨位相鄰法構(gòu)建了IPNV 的系統(tǒng)進化樹，聚類分析結(jié)果顯示，ChRtm213 與參考毒株加拿大Jasper（ATCC:VR-1325）聚為一簇，具有較近的親緣關(guān)系（圖2）。

圖2 以VP2基因序列構(gòu)建的ChRtm213分離株進化樹[49]Fig.2 Phylogenetic tree of ChRtm213 isolate based on gene sequence of VP2[49]

1.2.3 病毒性出血性敗血癥 病毒性出血性敗血癥為農(nóng)業(yè)農(nóng)村部二類動物疫病，也是OIE 必須申報的疫病，主要流行于歐洲和北美，近年來擴散到日本和韓國，迄今為止我國未見報道[33]。該病病原為病毒性出血性敗血病毒（viral hemorrhagic septicemia virus，VHSV），屬于彈狀病毒科，為單鏈負義RNA 病毒，宿主極為廣泛，可感染鮭鱒魚、牙鲆、狗魚和大菱鲆等淡水、海水養(yǎng)殖品種，近年來野生魚類遭受感染而死亡的情況亦有報道[50-55]。

1.3 其他生物疾病

1.3.1 魚虱病 挪威作為大西洋鮭的主產(chǎn)國，目前已形成成熟的防疫體系，但魚虱病引起的損失仍困擾著其鮭魚養(yǎng)殖業(yè)。魚虱病的病原為魚虱，屬于節(jié)肢動物門、甲殼綱、橈足亞綱、魚虱目、魚虱科、魚虱屬，以寄主的粘液、表皮組織和血液為食，寄生在鮭魚身上影響肉質(zhì)，嚴重時導(dǎo)致魚死亡，具有11 個不同形態(tài)的發(fā)育階段，流行季節(jié)為5—10月[56]。魚虱很容易產(chǎn)生廣泛的抗藥性，不易用藥物防治，魚虱雌蟲受精后會離開宿主，將卵袋產(chǎn)在附著物上，這時可能是其生命周期最薄弱的環(huán)節(jié)[5]。目前，除生態(tài)防治和免疫預(yù)防外，通過防蟲藥物如敵百蟲、除蟲菊酯等藥浴或飼料中預(yù)混殺蟲藥物，也是國外對其防控的主要手段。

1.3.2 水霉病 水霉病又叫白毛病、水綿病或膚霉病，一般是由水霉屬或綿霉屬等的真菌引起，大多生長在魚體的傷口處和魚卵上，呈白色棉絮狀。健康魚體具有較強的抗水霉病能力，水霉病多發(fā)生于養(yǎng)殖過程中分池、倒池、清污、運輸?shù)拳h(huán)節(jié)后，因操作粗暴導(dǎo)致魚體體表組織破損、鱗片脫落等機械損傷后感染。隨著其特效藥——孔雀石綠于2002 年后全面禁用，水霉病也成為了限制虹鱒、七彩鮭、山女鱒等鮭鱒魚類養(yǎng)殖增產(chǎn)的重要因素[57-58]。

2 流行疫病診斷技術(shù)

盡管各類疾病均在國內(nèi)流行多年，但尚無有效治療的措施。隨著病原體耐藥性的增強，高效檢出病原、切斷傳播途徑尤為重要。目前，針對水生動物疫病診斷，OIE 出版了《水生動物診斷手冊》，我國頒布了相關(guān)的檢測標準（表1），通過細菌培養(yǎng)鑒定、組織病理學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等手段綜合判斷，對流行疫病病原診斷起到了指導(dǎo)性作用。

表1 我國鮭鱒魚類部分疾病檢驗規(guī)程Table 1 The quarantine methods of partial disease of salmon and trout in China

2.1 組織病理學(xué)技術(shù)

組織病理學(xué)作為基礎(chǔ)診斷手段，在初診中具有不可替代的地位。從業(yè)人員觀察魚體體表，對內(nèi)臟器官、組織進行染色切片，利用顯微鏡檢查，對機體進行解剖學(xué)特征分析，綜合正常組織與老化、損傷、感染、病變等過程的特征變化，對魚體疾病進行判斷。但需要豐富的一線經(jīng)驗和技術(shù)手段，較難有科技產(chǎn)出，且需與其他手段配合。王琦等[59]對感染IHNV 的發(fā)病與未發(fā)病虹鱒的組織進行常規(guī)石蠟切片，HE 染色，并結(jié)合對不同規(guī)格和不同發(fā)病階段虹鱒的血液細胞學(xué)檢測。結(jié)果表明，發(fā)病虹鱒肝臟、腎臟、腸上皮、心肌等組織都發(fā)生了不同程度壞死；同時，發(fā)病魚的血液細胞學(xué)各項指標發(fā)生了明顯變化。這也說明，通過對虹鱒各組織的觀察以及血液的檢測，能較為便捷、直觀地反映其健康狀況。中國農(nóng)業(yè)出版社出版的《鮭鱒疾病彩色圖譜（第2 版）》將鮭鱒魚類受到感染后的體表、鰓、肝、脾、腎等部位出現(xiàn)的病灶以圖譜的形式展現(xiàn)，涵蓋了八類疾病，為從業(yè)者初診提供了直觀的檢索參考[60]。

2.2 細菌培養(yǎng)鑒定技術(shù)

使用取樣針從病灶處取樣，選取適當?shù)呐囵B(yǎng)基劃線培養(yǎng)，選取菌斑進行分離鑒定。使用細菌生化實驗微量鑒定管、全自動生化分析儀等對細菌的形態(tài)學(xué)特征、培養(yǎng)特性及生化實驗結(jié)果綜合分析，可以在一定程度上將細菌進行鑒定，但仍需通過分子生物學(xué)方法對16S rDNA 基因片段進行比對來判斷[61]。郭中鋼等[21]挑取虹鱒的肝臟、腎臟等病變部位，通過重復(fù)劃線培養(yǎng)，獲得一株嗜水氣單胞菌，命名為HSZS-01，為革蘭氏陰性菌，采用細菌微量生化鑒定管進行了生理生化分析，按照《常規(guī)細菌系統(tǒng)鑒定手冊》鑒定到種，并使用藥敏紙片進行了藥敏分析。該方法操作簡便、適用于初檢以及基層檢測。

2.3 細胞培養(yǎng)技術(shù)

作為病毒學(xué)研究最經(jīng)典的方法，目前細胞培養(yǎng)技術(shù)仍為水生動物病毒診斷的“黃金標準”。將待測樣本的靶器官（如肝臟、腎臟、脾臟）進行破碎勻漿并稀釋，選用特定的敏感細胞進行分離培養(yǎng)后，通過顯微鏡觀察是否出現(xiàn)細胞病變（cytopathic effect，CPE）進行判斷[62]。該方法觀察方法簡單，能夠通過培養(yǎng)分離毒株、保存毒株，但操作要求高、診斷時間長且難以鑒定到種，需要與其他檢測技術(shù)配合使用，不適合大規(guī)模檢測。胡曉利等[46]將病料進行勻漿后，用含有雙抗的M199 細胞培養(yǎng)液1∶10稀釋后，4 ℃孵育過夜，稀釋接種于大鱗大麻哈魚胚胎細胞（Chinook salmonembryo cells，CHSE）進行傳代培養(yǎng)，分離得到了一株IPNV。趙景壯等[36]則利用鯉魚上皮瘤細胞（epithelioma papulosum cyprini，EPC）分 離 得 到 了 IHNV 毒 株Sn1203，同時結(jié)合分子生物學(xué)手段進行了全基因組序列分析，進一步明晰了該毒株的系統(tǒng)進化地位。

2.4 免疫學(xué)技術(shù)

根據(jù)抗原抗體特異性結(jié)合的原理，針對保守的抗原決定簇，借助于顯色手段或標記技術(shù)，達到診斷特定病原的目的。免疫學(xué)檢測技術(shù)包括中和試驗、免疫熒光、免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附、膠體金、原位雜交等。免疫學(xué)技術(shù)對抗體要求較高，高效價抗血清難以制備，容易出現(xiàn)交叉反應(yīng)，影響鑒定的可靠性[63]。同細胞培養(yǎng)技術(shù)相比較，免疫學(xué)技術(shù)具有靈敏性和特異性高、假陽性率低、部分手段不依賴儀器設(shè)備、適用環(huán)境廣等優(yōu)點，特異性診斷產(chǎn)品研發(fā)之后具有極高的推廣應(yīng)用價值。陳桂花等[64]以 IPNV ChRtm213 分離株的 VP3 序列為模板進行了原核表達，以純化的VP3 蛋白為免疫原制備鼠抗血清，并將該血清應(yīng)用到了中國不同地區(qū)的IPNV 分離株的免疫熒光檢測中，對基因1 型和5 型均有識別，且對IHNV 和VHSV 無交叉反應(yīng)。

2.5 分子生物學(xué)技術(shù)

分子生物學(xué)診斷技術(shù)通過細菌培養(yǎng)或病毒分離，進行核酸提取，根據(jù)病原的保守片段（如致病菌的16S rDNA、真菌ITS、IHNV的G基因、IPNV的VP2等）設(shè)計特異性引物，進行對數(shù)擴增，能夠迅速準確地進行判斷。分子生物學(xué)診斷技術(shù)包括傳統(tǒng)的PCR、real-time PCR、LAMP 等手段，也有多重PCR、基因芯片、DNA 探針、重組酶聚合酶擴增等新型技術(shù)[65-68]。與其他診斷方法相比，分子生物學(xué)手段具有靈敏度高、特異性強、耗時短、可確認到種、手段豐富等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用，如普通PCR、恒溫擴增適用于高通量、基層診斷，而熒光定量PCR、DNA探針等技術(shù)適用于實驗室精細化操作。呂曉楠等[65]以IHNV G 基因為靶位點，建立了逆轉(zhuǎn)錄重組酶介導(dǎo)擴增（reverse transcription recombinase-aid amplification，RT-RAA）檢測技術(shù)，反應(yīng)條件為恒溫37 ℃，擴增時間為20 min，與傳統(tǒng)RTPCR（約180 min）相比，更具有時效性和普遍適用性，同時在靈敏度、特異性以及準確率上與傳統(tǒng)的RT-PCR技術(shù)基本一致。

3 免疫防控技術(shù)

目前國內(nèi)魚類疾病的控制，仍有不少從業(yè)者依賴于抗生素，但隨著抗生素的使用甚至濫用，魚類養(yǎng)殖面臨著耐藥性以及質(zhì)量控制的問題，將來可能會面臨著“無藥可用”的狀態(tài)。在挪威，從起初的單價疫苗到現(xiàn)在的多聯(lián)疫苗，已逐漸形成一個成熟的免疫防控產(chǎn)業(yè)化體系，從1987 年的每噸大西洋鮭使用接近1 kg的抗生素到目前的幾乎不使用抗生素，死亡率控制到5%以下[69]。疫苗接種方式有口服、浸泡、注射等多種手段，迄今為止，已報道的疫苗主要有滅活疫苗、減毒活疫苗和重組疫苗等，多聯(lián)疫苗的研發(fā)亦備受主流研究機構(gòu)的青睞。

3.1 滅活疫苗

滅活疫苗作為當前最為成熟的技術(shù)手段被廣泛應(yīng)用，通過物理或化學(xué)方法將培養(yǎng)的病原進行消殺滅活而成，在保持抗原免疫原性的基礎(chǔ)上，破壞了病原體的致病性，因此安全性得到保障。由于制備方法簡便、研發(fā)周期短且成本低廉，長期以來都是各類疫苗研發(fā)的首選，國內(nèi)水產(chǎn)疫苗如弧菌、氣單胞菌和草魚呼腸弧病毒等疫苗的免疫保護性非常明顯[70]。物理滅活方法（如高溫法）制備的疫苗免疫保護率相對較低，通常采用化學(xué)滅活劑進行滅活。

最傳統(tǒng)且最廣泛的化學(xué)滅活劑為甲醛，具有價格低廉、易獲取等優(yōu)點，其對殺鮭氣單胞菌、嗜冷黃桿菌腎桿菌等細菌以及IHNV、IPNV 等病毒進行滅活后均有良好的效果。但甲醛存在著一定的刺激性和致癌風(fēng)險，滅活時間長且不徹底，篩選更有效的滅活劑成為研究熱點[71]。β-丙內(nèi)酯是甲醛的良好替代品，采用 2.7 mmol·L-1的 β-丙內(nèi)酯滅活I(lǐng)HNV 24 h 后對虹鱒進行注射，相對保護率達90%以上，免疫時效可持續(xù)56 d[71]。刁菁等[72]則使用新型材料-納米鋅作為滅活劑，使用100 mg·L-1的納米鋅溶液制作的殺鮭氣單胞菌滅活疫苗效果優(yōu)于甲醛處理組，免疫保護率達86%，同時對EPC 細胞的生長及代謝無顯著影響，是一種潛在的高效滅活劑。

3.2 重組疫苗

利用現(xiàn)代分子生物學(xué)及微生物學(xué)技術(shù)，將特定的抗原基因進行重組、表達，直接將核酸或表達的蛋白注入魚體內(nèi)進行免疫，含重組亞單位疫苗、核酸疫苗、基因缺失或突變疫苗及活載體疫苗等[73]。與傳統(tǒng)的疫苗相比，具有成本低、無致病性、適用范圍廣、儲存方便等優(yōu)點，顯示出廣闊的開發(fā)和應(yīng)用前景。

重組亞單位疫苗是指將保守的抗原基因進行體外表達，并將病原蛋白分離純化制備而成。Diao等[74]將殺鮭氣單胞菌的外膜蛋白OmpC、溶血素等進行重組表達，免疫保護率達80%以上，特異性抗體水平在6 周內(nèi)呈持續(xù)升高趨勢。但受限于大腸桿菌、酵母等表達系統(tǒng)的影響，通常情況下重組亞單位疫苗需添加佐劑以增強其免疫原性。

核酸疫苗一般指DNA 疫苗，指將表達主要抗原原性的基因鏈接到不同的載體上構(gòu)建而成的重組質(zhì)粒。目前國內(nèi)多個研發(fā)團隊針對IHNV 的G基因、IPNV 的VP2等構(gòu)建了適用于不同情況的DNA 疫苗，效果良好，其中，徐黎明等[75-77]構(gòu)建的IHN DNA 疫苗（pIHNchG）在黑龍江省已完成中間試驗，提交了環(huán)境釋放申報材料。但由于進入體內(nèi)的質(zhì)粒不可控，它將持續(xù)在體內(nèi)進行表達并釋放到環(huán)境中，缺乏與風(fēng)險相關(guān)的基礎(chǔ)研究，出于安全性考慮，一些國家（如挪威）禁止使用DNA疫苗。

相較于核酸疫苗及亞單位疫苗，基因缺失或突變疫苗及活載體疫苗受限于研發(fā)成本及難度，相關(guān)研究較少，20世紀90年代由歐洲學(xué)者最先報道的基因突變疫苗及活載體疫苗均為殺鮭氣單胞菌疫苗。李守湖等[78]運用腺病毒作為載體，利用IHNV G蛋白完成了重組腺病毒的構(gòu)建，制備而成的活載體疫苗，通過浸泡的方式進行免疫，免疫保護率達90%以上，免疫持續(xù)期達6個月。

3.3 多聯(lián)疫苗

多聯(lián)疫苗即經(jīng)一次免疫可同時抵抗2 種或2種以上病原感染，避免重復(fù)接種造成的機械損傷，多聯(lián)疫苗的研發(fā)對鮭鱒魚養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展極為重要。由于鮭鱒魚類養(yǎng)殖過程中經(jīng)常發(fā)生諸如殺鮭氣單胞菌、IHNV 等不同病原引起的疾病交叉，挪威已經(jīng)研發(fā)出針對弧菌病、癤瘡病和腸炎等多種病害的六聯(lián)、七聯(lián)疫苗[79]。國內(nèi)的鮭鱒魚養(yǎng)殖業(yè)起步較晚，相關(guān)多聯(lián)疫苗的研發(fā)相對滯后，2017 年國內(nèi)研發(fā)團隊構(gòu)建了IHNV 和IPNV 的二價核酸疫苗，可以對IHNV 和IPNV 的交叉感染具有顯著作用，累積死亡率低于7%[80]。

3.4 佐劑

高度純化的疫苗成分通常缺乏病原相關(guān)分子模式，不能有效激活先天免疫應(yīng)答而發(fā)生有效的免疫反應(yīng)，從而造成免疫保護效果不佳，需要配合佐劑使用。理想的佐劑須具備良好的免疫活性、穩(wěn)定且清晰的化學(xué)結(jié)構(gòu)、能夠顯著提高疫苗的免疫保護率和持久性，同時兼顧價格和副作用。佐劑的分類方法眾說紛紜，在鮭鱒魚疫苗中如弗氏佐劑、Seppic 公司的 ISA763 和 IMS1312 等含油佐劑應(yīng)用最廣，采用油包水的方式將疫苗包裹在內(nèi)部用于注射，其他常用佐劑有鋁鹽佐劑、葡聚糖、脂多糖、皂苷、細胞因子、蜂膠等[81-84]。劉帥[83]使用蜂膠和弗氏完全2 種佐劑混合殺鮭氣單胞菌疫苗對虹鱒進行接種，攻毒14 d 后免疫保護率分別為90%和85%，均高于純疫苗接種組，說明佐劑的使用能有效提高疫苗的保護作用，而副作用方面的研究結(jié)果表明蜂膠佐劑不會對魚體造成損害，更適于生產(chǎn)應(yīng)用。

4 展望

目前，我國鮭鱒魚的養(yǎng)殖規(guī)模仍小于挪威、智利等主產(chǎn)國，但隨著國民生活水平的不斷提高，人民對優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)的需求不斷加大，國內(nèi)科技力量對于鮭鱒魚類養(yǎng)殖不斷投入，有效地促進了產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。伴隨著我國東北、西南、西北、華北以及黃海冷水團等地鮭鱒魚產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展，國內(nèi)科技力量的聯(lián)合攻關(guān)，我國水生動物疫病及免疫學(xué)研究近年來獲得了長足的進步。與此同時，國內(nèi)對于鮭鱒魚類疫病的研究和防控體系建設(shè)方面仍落后于挪威等國。流行疫病基礎(chǔ)理論研究仍有欠缺，部分疫病的致病機理、傳播途徑以及機體響應(yīng)機制尚不明確，我國仍存在著病原變異、外源疫病輸入等風(fēng)險，而流行病學(xué)調(diào)查的重要性則容易被忽略，導(dǎo)致研究水平滯后于疫病暴發(fā)情況。

伴隨著免疫學(xué)和分子生物學(xué)的發(fā)展，如膠體金技術(shù)、恒溫擴增技術(shù)等廣泛開發(fā)和推廣應(yīng)用，將突破實驗條件限制，能夠迅速、準確進行現(xiàn)場判斷，結(jié)合更加科學(xué)的實驗室檢驗，能夠讓診斷技術(shù)更好的為產(chǎn)業(yè)服務(wù)。

國內(nèi)鮭鱒魚適用的預(yù)防接種處于“九龍治水”階段，多為自家疫苗，商品化疫苗仍未實現(xiàn)零的突破，與國外的商品化多聯(lián)疫苗仍存在不小差距。同時接種手段、注射疫苗后的器官黏連、佐劑配伍以及小規(guī)格魚苗的預(yù)防接種方案等難題仍困擾著科研人員，科學(xué)預(yù)防體系任重道遠。因病原的耐藥性問題以及藥物限用，將來可能會面臨著發(fā)病后無藥可用的狀態(tài)，科學(xué)防控尤為重要，充分利用診斷技術(shù)將疫情控制，通過免疫接種預(yù)防將成為主流手段，具有無可比擬的優(yōu)勢和發(fā)展前景。