王智,王娟,徐雷,趙東明△
黃芩苷是黃芩的有效提取物之一[1],現(xiàn)代藥理學(xué)證實其具有抗炎[2]、抗腫瘤[3]、降壓[4]的作用,對于擴張型心肌病心室重構(gòu)亦有較好的抑制作用[5]。已有研究證實,黃芩苷對異丙腎上腺素(isoprenaline,ISO)所致的心肌損傷具有保護作用,可穩(wěn)定血流動力學(xué)指標,但并未進行系統(tǒng)深入的研究[6]。本課題組前期研究表明,黃芩苷對脂多糖損傷的人心肌H9c2細胞具有一定的保護作用,可減少心肌細胞凋亡,抑制線粒體損傷,提高細胞存活率[7]。有文獻報道,當心肌細胞發(fā)生過度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)時,會引起Kv4.3、Nav1.5等離子通道異常表達,導(dǎo)致心律失常[8]。目前,鮮有黃芩苷對心力衰竭大鼠心室肌細胞ERS與心律失常關(guān)系的相關(guān)報道。本研究以心室肌細胞ERS-肌電穩(wěn)定性為切入點,探討黃芩苷對ISO所致心力衰竭大鼠室性心律失常、心功能的影響及其與心室肌細胞ERS-肌電穩(wěn)定性的相關(guān)性。
1.1 材料
1.1.1 實驗動物72只清潔級雄性Wistar大鼠,6周齡,體質(zhì)量(200±20)g,購自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動物實驗中心,動物生產(chǎn)合格證號:SCXK(吉)2011-0004。大鼠自由飲水、飲食,飼養(yǎng)環(huán)境溫度20~22℃,嚴格遵循國家《實驗動物管理條例》。
1.1.2 主要試劑 黃芩苷(浙江江北藥業(yè)公司,批號13659,純度≥98%);酒石酸美托洛爾片(阿斯利康制藥有限公司,國藥準字H32025391,批號A14202000531);原位缺口末端標記(TUNEL)試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司,貨號C1088);人基質(zhì)裂解素2(ST2)、腦鈉肽(BNP)試劑盒,兔抗鼠甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、肌醇需酶1(inositolrequiring enzyme-1,IRE1)、C/EBP環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子同源蛋白(CCAAT/enhancer binding protein homologous protein,CHOP)、縫隙 連接蛋 白43(connexin,Cx43)單克隆抗體(英國Abcam公司,貨號分別為:ab256751、ab108816、ab181602、ab108615、ab37073、ab179823及ab235585),山羊抗兔二抗(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,ZB2301)。
1.1.3 實驗儀器5180/R型多功能臺式離心機(德國Eppendorf公司);WD-9413B型凝膠成像系統(tǒng)(北京六一生物科技有限公司);MK3型酶標儀(美國Multiskan公司);1703940型半干轉(zhuǎn)膜儀(美國Bio-Rad公司);BL420F生理儀(成都泰盟公司);Langendorff裝置(上海奧爾科特生物科技有限公司);DF-5A型心臟刺激儀(蘇州市東方電子儀器廠);BX53型熒光顯微鏡(日本Olympus公司);GE Vivid E9彩色超聲、ML6-15型高頻超聲淺表探頭(美國GE公司)。
1.2 心力衰竭模型制備與分組72只清潔級雄性Wistar大鼠采用隨機數(shù)字表法分為對照組,模型組,美托洛爾組,黃芩苷低、中、高劑量組,每組12只。根據(jù)文獻[4],模型組大鼠予后頸部皮下注射5 mg(/kg·d)的ISO,對照組予后頸部皮下注射等體積0.9%NaCl注射液,連續(xù)注射7 d;美托洛爾組及黃芩苷低、中、高劑量組在模型組基礎(chǔ)上分別給予美托洛爾10 mg(/kg·d)及25、50、100 mg(/kg·d)黃芩苷灌胃,對照組給予等體積0.9%NaCl注射液灌胃,連續(xù)給藥4周。模型成功標準:左心室射血分數(shù)(LVEF)下降0.05,左心室舒張末期內(nèi)徑(LVEDd)、左心室收縮末期內(nèi)徑(LVESd)增大0.15 mm[4]。全部大鼠均造模成功。
1.3 心電圖檢測 于實驗第4周末,取各組大鼠進行腹腔注射3%戊巴比妥鈉溶液(60 mg/kg)麻醉,待大鼠麻醉成功后固定于粘鼠板,四肢連接BL420F生理儀心電電極,持續(xù)觀察3 min,記錄大鼠心率及室性早搏發(fā)生情況,每分鐘出現(xiàn)1~4個室性早搏為偶發(fā)室性早搏,每分鐘室性早搏發(fā)生數(shù)≥5個為頻發(fā)室性早搏。
1.4 心功能檢測 于實驗第4周末取各組大鼠麻醉后固定于粘鼠板,清理大鼠胸前毛發(fā),應(yīng)用胸壁高頻超聲ML6-15型探頭對大鼠進行心功能檢測,觀察指標包括LVEF、LVESd及LVEDd,每只大鼠取3個連續(xù)完整心動周期測量平均值。
1.5 血清心力衰竭標志物檢測 各組大鼠進行心臟超聲檢查后,抽取尾靜脈血1 mL,靜置1 h后分離血清并于EP管中及時-80℃凍存,常溫下解凍樣本,采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測各組大鼠血清中心力衰竭標志物BNP和ST2含量,檢測流程嚴格按照說明書操作。
1.6 Langendorff離體心臟灌注模型 于實驗第4周末,從各組中抽取6只大鼠,麻醉后沿胸骨左緣剪開胸腔,直接剪下心臟,置于預(yù)冷H-K液中(H-K液配制參照文獻[9]),修剪后充分暴露主動脈,主動脈與Langendorff裝置連接后,在37℃,8.65 kPa恒壓條件下,用95%O2-5%CO2飽和K-H液非循環(huán)式逆行灌注。待離體心臟灌注模型穩(wěn)定復(fù)跳10 min后,冠脈流量控制在10~12 mL/min,冠脈壓力維持為9.3 kPa左右,進行恒流灌注,導(dǎo)管接壓力轉(zhuǎn)換器[9]。植入電極,正負電極均放置于左心室前壁,并且正負極距離保持1 mm左右,于主動脈根部固定參考電極,連接BL420F生物機能實驗系統(tǒng)記錄心肌單相動作電位(MAP),并計算心肌單相動作電位復(fù)極90%的時程(MAPD90)。
應(yīng)用DF-5A型心臟刺激儀,記錄電極與刺激電極均放置于左心室前壁,兩者相距3 mm,BL420F生物機能實驗系統(tǒng)記錄有效不應(yīng)期(ERP):連續(xù)發(fā)放8個起搏刺激波S1后發(fā)放1個早搏刺激波S2,S1S1與S1S2設(shè)置為250 ms,S1S2間期自設(shè)置數(shù)值每次縮短10 ms幅度,直至經(jīng)S2誘發(fā)無反應(yīng),再于無誘發(fā)反應(yīng)數(shù)值基礎(chǔ)上增加10 ms,然后以-1 ms反掃直至S2不能誘發(fā)出動作電位,此時S1S2間期即為心室肌細胞ERP。計算并比較各組間ERP/MAPD90比值。
1.7 TUNEL染色檢測心室肌細胞凋亡情況 取每組剩余6只大鼠,頸椎脫臼處死后用眼科剪子取下心臟,剪下部分左心室組織,用4%多聚甲醛液進行固定,無水乙醇脫水,切片厚度保持在3~4 μm制作切片樣本,其余左心室組織樣本留取進行后續(xù)實驗,根據(jù)TUNLE試劑盒說明書進行操作,樣本經(jīng)0.1%Trition X-100透化,加入3%H2O2200 μL,磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗3次后,加入蛋白酶K滅活DNA、RNA,最后加入TUNEL液,恒溫箱中避光孵育60 min。取出后經(jīng)PBS沖洗3次加入DAPI反應(yīng)液,反應(yīng)20 min后沖洗封片。應(yīng)用顯微鏡觀察左心室組織切片,褐色代表已凋亡細胞,藍色代表仍生存細胞,于200倍鏡下觀察各組大鼠心室肌細胞凋亡情況。凋亡指數(shù)(AI)=各視野陽性細胞數(shù)/視野所有細胞總數(shù)×100%。
1.8 Western blot法檢測ERS信號通路蛋白及Cx43蛋白表達 取1.7各組大鼠留取的左心室肌組織樣本并制備組織勻漿(10%),裂解細胞后采用BCA法測定各組心室肌樣本蛋白濃度,制備上樣液。各組樣品均取10 μL和5 μL蛋白Marker,加入電泳裝置中,5%、10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白。待電泳結(jié)束后將含蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝膠轉(zhuǎn)移到PVDF膜,5%脫脂奶粉常溫封閉4 h,加入目標蛋白GRP78一抗(1∶800)、IRE1一抗(1∶1 000)、CHOP一抗(1∶800)、Cx43一抗(1∶1 000)及內(nèi)參蛋白GAPDH(1∶800)一抗4℃封閉過夜。次日應(yīng)用PBS于水平搖床洗膜3次,加入山羊抗兔二抗(1∶500)后常溫下孵育2 h。取出PVDF膜后,用PBS洗膜3次,ECL顯像,暗室曝光,掃描膠片,用Gel-Pro-Analyzer軟件進行圖像處理,計算所測條帶光密度值。實驗獨立重復(fù)3次。
1.9 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理,計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間多重比較行LSD-t檢驗;計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。χ2檢驗組間多重比較,采用校正后的檢驗水準,P<0.01為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2.1 各組大鼠心電圖檢查結(jié)果 與對照組比較,模型組大鼠心率增快,室性早搏發(fā)生率增高(P<0.05);與模型組比較,美托洛爾組及黃芩苷低、中、高劑量組大鼠心率降低,室性早搏發(fā)生率降低(P<0.05);與美托洛爾組比較,黃芩苷低、中、高劑量組大鼠心率升高,室性早搏發(fā)生率差異無統(tǒng)計學(xué)意義;黃芩苷低、中、高劑量組大鼠心率依次降低(P<0.05),室性早搏發(fā)生率差異無統(tǒng)計學(xué)意義,見表1。
Tab.1 Comparison of heart rate and ventricular premature beat between six groups表1各組大鼠心率及室性早搏情況比較 (n=12)
2.2 各組大鼠超聲心動圖的變化 與對照組比較,模型組大鼠LVESd、LVEDd升高,LVEF降低(P<0.05)。與模型組比較,美托洛爾組及黃芩苷低、中、高劑量組LVEF升高,LVESd、LVEDd降低(P<0.05)。與美托洛爾組比較,黃芩苷低、中劑量組LVEF降低,LVESd、LVEDd升高(P<0.05);黃芩苷高劑量組與美托洛爾組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。黃芩苷低、中、高劑量組LVEF依次升高,LVESd、LVEDd依次降低(P<0.05),見圖1、表2。
2.3 各組大鼠血清心衰標志物的變化 與對照組比較,模型組大鼠血清ST2、BNP水平升高(P<0.05)。與模型組比較,美托洛爾組及黃芩苷低、中、高劑量組血清ST2、BNP水平降低(P<0.05)。與美托洛爾組比較,黃芩苷低、中劑量組血清ST2、BNP水平升高(P<0.05),高劑量組與美托洛爾組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。黃芩苷低、中、高劑量組血清ST2、BNP水平依次降低(P<0.05),見表3。
2.4 各組大鼠Langendorff離體心臟灌注模型ERP、ERP/MAPD90情況 與對照組比較,模型組大鼠心室肌細胞ERP、MAPD90增大,ERP/MAPD90減?。≒<0.05)。與模型組比較,美托洛爾組及黃芩苷低、中、高劑量組心室肌細胞ERP、MAPD90降低,ERP/MAPD90升高(P<0.05)。與美托洛爾組比較,黃芩苷低、中劑量 組ERP、MAPD90升 高 ,ERP/MAPD90降 低(P<0.05);高劑量組與美托洛爾組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。黃芩苷低、中、高劑量組心室肌細胞ERP、MAPD90依次降低,ERP/MAPD90依次升高(P<0.05),見表4。
Fig.1 Echocardiography of rats in each group圖1各組大鼠超聲心動圖
Tab.2 Comparison of LVEF,LVESd and LVEDd between six groups表2各組大鼠LVEF、LVESd、LVEDd比較(n=12,±s)
Tab.2 Comparison of LVEF,LVESd and LVEDd between six groups表2各組大鼠LVEF、LVESd、LVEDd比較(n=12,±s)
*P<0.05;a與對照組比較,b與模型組比較,c與美托洛爾組比較,d與黃芩苷低劑量組比較,e與黃芩苷中劑量組比較,P<0.05
組別LVEFLVESd(mm)LVEDd(mm)對照組0.857 2±0.024 61.73±0.114.58±0.19模型組0.698 0±0.034 9a3.46±0.12a6.27±0.25a美托洛爾組0.820 9±0.024 8b1.89±0.10b4.84±0.19b黃芩苷低劑量組0.720 5±0.038 4bc2.17±0.15bc5.79±0.25bc黃芩苷中劑量組0.785 9±0.026 0bcd2.03±0.14bcd5.13±0.20bcd黃芩苷高劑量組0.835 7±0.029 5bde1.83±0.10bde4.68±0.21bde F 56.463*48.208*34.224*
Tab.3 Comparison of serum levels of ST2 and BNP between six groups表3各組大鼠血清ST2、BNP比較 (μg/L,±s)
Tab.3 Comparison of serum levels of ST2 and BNP between six groups表3各組大鼠血清ST2、BNP比較 (μg/L,±s)
*P<0.05;a與對照組比較,b與模型組比較,c與美托洛爾組比較,d與黃芩苷低劑量組比較,e與黃芩苷中劑量組比較,P<0.05
組別nST2BNP對照組1250.03±5.5864.92±5.58模型組1280.16±5.79a220.75±20.28a美托洛爾組1264.15±4.07b112.50±9.89b黃芩苷低劑量組1275.63±3.65bc176.08±11.56bc黃芩苷中劑量組1271.71±4.34bcd155.83±12.55bcd黃芩苷高劑量組1264.50±5.28bde106.75±16.39bde F 186.724*246.843*
2.5 各組大鼠TUNEL染色情況 與對照組比較,模型組大鼠心室肌細胞AI值明顯升高(F=289.711,P<0.05);與模型組比較,美托洛爾組及黃芩苷低、中、高劑量組大鼠心室肌細胞AI值明顯降低(P<0.05)。與美托洛爾組比較,黃芩苷低、中劑量組心室肌細胞AI值明顯升高(P<0.05);高劑量組與美托洛爾組差異無統(tǒng)計學(xué)意義。黃芩苷低、中、高劑量組大鼠心室肌細胞AI值依次降低(P<0.05),見圖2、3。
Tab.4 Comparison of ERP,MADP90 and ERP/MADP90 between six groups表4各組大鼠ERP、MADP90、ERP/MADP90比較 (±s)
Tab.4 Comparison of ERP,MADP90 and ERP/MADP90 between six groups表4各組大鼠ERP、MADP90、ERP/MADP90比較 (±s)
*P<0.05;a與對照組比較,b與模型組比較,c與美托洛爾組比較,d與黃芩苷低劑量組比較,e與黃芩苷中劑量組比較,P<0.05
組別nERP(ms)MADP9(0ms)ERP/MADP90對照組648.67±3.4465.33±3.390.75±0.02模型組664.17±6.24a97.50±8.46a0.66±0.02a美托洛爾組650.17±3.31b66.83±3.87b0.75±0.01b黃芩苷低劑量組661.17±2.71bc89.17±3.43bc0.69±0.01bc黃芩苷中劑量組654.83±1.83bcd76.33±3.20bcd0.72±0.02bcd黃芩苷高劑量組650.50±2.26bde67.33±3.67bde0.75±0.02bde F 58.857*168.426*18.734*
2.6 Western blot檢測結(jié)果 與對照組比較,模型組大鼠心室肌組織中GRP78、IRE1、CHOP表達升高,Cx43表達降低(P<0.05)。與模型組比較,美托洛爾組及黃芩苷低、中、高劑量組大鼠心室肌組織中GRP78、IRE1、CHOP表達降低,Cx43表達升高(P<0.05)。與美托洛爾組比較,黃芩苷低、中劑量組心室肌組織中GRP78、IRE1、CHOP表達升高,Cx43表達降低(P<0.05);高劑量組與美托洛爾組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。黃芩苷低、中、高劑量組大鼠心室肌組織中GRP78、IRE1、CHOP表達依次降低,Cx43表達依次升高(P<0.05),見表5、圖4。
Fig.2 TUNEL staining results of baicalin on ventricular myocytes of rats with heart failure(×200)Fig.2各組心力衰竭大鼠心室肌組織TUNEL染色結(jié)果(×200)
Fig.3 Effects of baicalin on myocardial AI in rats with heart failure圖3黃芩苷對心力衰竭大鼠心室肌組織AI值的影響
Tab.5 Comparison of the protein expression levels of GRP78,IRE1,CHOP and Cx43 between six groups表5各組大鼠心室肌組織GRP78、IRE1、CHOP及Cx43蛋白表達水平比較 (n=6,±s)
Tab.5 Comparison of the protein expression levels of GRP78,IRE1,CHOP and Cx43 between six groups表5各組大鼠心室肌組織GRP78、IRE1、CHOP及Cx43蛋白表達水平比較 (n=6,±s)
*P<0.05;a與對照組比較,b與模型組比較,c與美托洛爾組比較,d與黃芩苷低劑量組比較,e與黃芩苷中劑量組比較,P<0.05
組別GRP78IRE1CHOPCx43對照組0.17±0.030.20±0.040.17±0.022.58±0.22模型組0.40±0.04a1.16±0.08a1.23±0.09a0.25±0.06a美托洛爾組0.17±0.02b0.36±0.03b0.41±0.02b1.81±0.10b黃芩苷低0.31±0.03bc1.01±0.03bc1.05±0.06bc0.59±0.07bc劑量組黃芩苷中0.23±0.03bcd0.91±0.04bcd0.73±0.04bcd0.86±0.05bcd劑量組黃芩苷高0.17±0.01bde0.36±0.02bde0.42±0.03bde1.82±0.07bde劑量組F 46.492*70.758*132.413*224.024*
Fig.4 Electrophoretic map of baicalin on GRP78,IRE1,CHOP and Cx43 in ventricular myocytes of rats with heart failure圖4各組心力衰竭大鼠心室肌組織GRP78、IRE1、CHOP及Cx43表達電泳圖
心力衰竭是指心臟結(jié)構(gòu)與功能發(fā)生異常,表現(xiàn)為心室壁變薄,心室腔呈擴張樣改變,心室過度充盈,射血無力等一系列臨床綜合征,多出現(xiàn)于心血管疾病的終末期[10]。心室重構(gòu)是心力衰竭的病理學(xué)基礎(chǔ),主要包括結(jié)構(gòu)重構(gòu)和電重構(gòu),兩者均是引發(fā)心力衰竭患者生活質(zhì)量下降的重要因素。不僅如此,兩者還可相互影響,相互加重[11]。黃芩苷對不同心血管疾病的作用已成為心血管領(lǐng)域研究熱點,有望成為治療或輔助治療多種心血管疾病的有效藥物[12]。
有研究顯示,黃芩苷能改善ISO所致心力衰竭大鼠心功能,提高LVEF,減少體內(nèi)水鈉潴留,降低循環(huán)機械應(yīng)力傳導(dǎo)至心肌細胞,抑制BNP及ST2產(chǎn)生[13]。本研究結(jié)果顯示,與對照組比較,模型組大鼠心率增快,室性早搏發(fā)生率增高,LVESd、LVEDd增加,LVEF降低,血清BNP及ST2含量升高,經(jīng)25~100 mg(/kg·d)黃芩苷灌胃后,上述指標均有所改善,且呈劑量依賴性,提示黃芩苷可改善ISO致心力衰竭大鼠的癥狀,但其具體機制仍不明確。
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是真核細胞合成蛋白的主要場所。當各種原因?qū)е聝?nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡時,易出現(xiàn)未折疊或錯誤折疊蛋白聚集于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中,細胞本身降解和重新折疊蛋白的過程即為ERS[14],但持續(xù)而嚴重的ERS則可直接引發(fā)細胞凋亡[15]。心肌細胞凋亡不僅降低心功能,而且可引發(fā)心臟成纖維細胞增生并轉(zhuǎn)化為肌成纖維細胞。由于心肌細胞和成纖維細胞的靜息膜電位水平不同,兩類細胞間形成的電偶聯(lián)可降低心肌細胞除極速率和電活動傳導(dǎo)速度,引發(fā)心律失常[16]。從電生理角度分析,室性快速性心律失?;蝾l繁發(fā)作的室性早搏可導(dǎo)致心室收縮功能障礙,嚴重者可導(dǎo)致心臟擴大或心力衰竭[17]。由此可見,心室結(jié)構(gòu)重構(gòu)與電重構(gòu)之間存在相互誘發(fā)的病理條件。
正常心肌細胞群均為單相動作電位,使用Langendorff離體心臟灌注模型可準確反映心肌細胞的去極和復(fù)極。K+外流形成MAPD90,主要反映0相去極化至3相復(fù)極末期,ERP反映0相去極化至3相復(fù)極中期。當Na+通道激活延遲,ERP則延長,由于ERP和MAPD90存在同步性變化,因此ERP/MAPD90比值更能反映心室肌電穩(wěn)定性;其比值越小,心肌細胞除極引起折返性心律失常以及局部傳導(dǎo)阻滯的概率越大[18]。既往已有研究探索黃芩苷治療心力衰竭大鼠的作用機制,但大多停留在心室結(jié)構(gòu)重構(gòu)及分子信號通路的研究[19],并未將心室重構(gòu)及心律失常相關(guān)聯(lián)。無論是心臟的結(jié)構(gòu)重構(gòu)還是電重構(gòu)出現(xiàn)嚴重變化,均會對整體產(chǎn)生影響,故而對兩方面共同研究方可得出較為科學(xué)、可信的結(jié)論。
心肌細胞縫隙連接是由縫隙連接蛋白組成的六聚體半通道橋梁,由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌,駐于心肌細胞膜表面,對心肌細胞之間的電傳導(dǎo)起決定作用。而心肌細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并不發(fā)達,一旦發(fā)生ERS,可能對縫隙連接蛋白的合成與表達產(chǎn)生影響[20]。賀智慧等[21]研究發(fā)現(xiàn),阿霉素誘導(dǎo)的擴張型心肌病大鼠心室肌細胞存在ERS,并且ERS可能激發(fā)心室肌纖維化信號通路,引發(fā)Cx43表達減少,造成大鼠心律失常。為了印證黃芩苷是否也通過抑制ERS,減少心肌細胞凋亡并增加Cx43表達,減少室性早搏的發(fā)生,本次研究還對部分大鼠進行了Langendorff離體心臟灌注,進行TUNEL染色、ERS信號通路及Cx43蛋白檢測,降低離體心臟對凋亡的影響,以保障檢測結(jié)果的客觀性和準確性。結(jié)果顯示,與對照組比較,模型組心室肌細胞ERP/MAPD90比值降低,心室肌細胞AI值升高,ERS信號通路GRP78、IRE1、CHOP蛋白表達水平升高,Cx43蛋白表達水平降低。而經(jīng)黃芩苷干預(yù)后,心室肌細胞ERP/MAPD90比值升高,AI值降低,GRP78、IRE1、CHOP蛋白表達水平降低,Cx43蛋白表達水平升高,且均呈劑量依賴性,提示ISO所致心力衰竭模型大鼠心室肌細胞發(fā)生ERS凋亡的同時,Cx43表達下調(diào),心室肌細胞肌電穩(wěn)定性降低,可能是造成模型組大鼠室性早搏發(fā)生率升高的原因;而黃芩苷可能通過調(diào)節(jié)ERS,恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)蛋白合成穩(wěn)態(tài),在減少心室肌細胞凋亡的同時,上調(diào)Cx43的表達,提升心室肌細胞肌電穩(wěn)定性,在抑制心力衰竭大鼠心室結(jié)構(gòu)重構(gòu)的同時還可抑制電重構(gòu)。另外,黃芩苷高劑量組大鼠心功能、心室肌細胞凋亡情況、Cx43表達及肌電穩(wěn)定性療效與美托洛爾組無明顯差異,提示高劑量黃芩苷可與美托洛爾發(fā)揮幾近相同的作用,但其主要作用機制可能存在較大差異,美托洛爾是β受體阻滯劑,可能通過抑制心動過速,增加心臟舒張期供血,從而達到治療心力衰竭的作用,而黃芩苷則更可能傾向于通過抑制心室結(jié)構(gòu)重構(gòu)起到增加心肌電穩(wěn)定性的作用。
綜上所述,黃芩苷具有改善ISO所致心力衰竭大鼠的心功能作用,減少心室肌細胞凋亡,減輕ERS,提高心室肌細胞Cx43表達及肌電穩(wěn)定性,在逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)的同時抑制電重構(gòu),有望成為心血管疾病的輔助用藥。