王春梅 王彩生

1.呼和浩特市第二醫(yī)院檢驗科，內(nèi)蒙古呼和浩特 010010；2.內(nèi)蒙古錫林郭勒盟中心醫(yī)院感染性疾病科，內(nèi)蒙古錫林浩特 010010

胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，具有惡性度高、治愈率低及預(yù)后差等特點(diǎn)。胃癌早期臨床癥狀無明顯特異性，主要有惡心、嘔吐等，晚期可出現(xiàn)上腹部不適、進(jìn)食后飽脹、嘔血、黑便等，嚴(yán)重可導(dǎo)致死亡[1-2]。大部分胃癌患者確診時往往是中晚期，治療效果較差。因此，探索胃癌發(fā)生的生物學(xué)機(jī)制，盡早診斷與治療對延長胃癌患者的生存時間及預(yù)后具有至關(guān)重要的意義。G 蛋白偶聯(lián)受體-4（LGR4）稱為富含亮氨酸重復(fù)序列的GPCR4 或GPCR48，是G 蛋白偶聯(lián)受體家族成員之一，也是重要的細(xì)胞膜受體之一，由18個外顯子和17個內(nèi)含子組成，在胚胎和成人各種組織中均廣泛表達(dá)[3]，其具有多種生物學(xué)功能，如介導(dǎo)細(xì)胞信號傳導(dǎo)與激活、促進(jìn)器官發(fā)育，在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到促癌作用[4]。β-肌動蛋白（β-actin）是一種細(xì)胞骨架蛋白，與E-鈣黏蛋白（E-cadherin）形成復(fù)合體，具有維持同型細(xì)胞的黏附、防止細(xì)胞移動的作用。當(dāng)細(xì)胞質(zhì)中存在過量的β-catenin 時，β-catenin便轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中，充當(dāng)細(xì)胞增殖分化過程的轉(zhuǎn)錄因子[5-6]。有研究顯示，β-catenin 可通過調(diào)節(jié)Wnt 信號通路的表達(dá)，參與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展[7]。因此，本研究通過檢測胃癌患者β-actin 與LGR4 的表達(dá)水平，初步探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年2 月—2020 年6 月于呼和浩特市第二醫(yī)院以下簡稱“我院”住院治療的胃癌患者103 例（觀察組），納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)胃鏡活檢確診為胃癌；②均首次診斷為胃癌；③臨床病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有其他消化系統(tǒng)疾病，如十二指腸潰瘍、胃潰瘍等；②患有其他惡性腫瘤，如肺癌、骨髓瘤等；③患有免疫系統(tǒng)疾??；④接受過抗腫瘤治療。觀察組男59 例，女44 例；年齡45～71 歲，平均（55.2±6.3）歲；≥55 歲55 例，＜55 歲48 例；根據(jù)胃癌病理組織分化結(jié)果，中低分化51 例，高分化52 例；TNM 分期：Ⅰ期64 例，Ⅱ期27 例，Ⅲ期8 例，Ⅳ期4 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40 例；腫瘤 直 徑＜2.5 cm 65 例，≥2.5 cm 38 例；TNM 分期及病理分化程度參考第8 版美國癌癥聯(lián)合會標(biāo)準(zhǔn)[8]。另選同期我院住院的胃良性腫瘤患者52 例為對照組，①經(jīng)術(shù)后病理檢查明確診斷為胃良性腫瘤。②首次診斷胃良性腫瘤。③患者臨床病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有其他消化系統(tǒng)疾病，如胃炎、慢性腸炎等。②患有心、腦系統(tǒng)疾病。③患有免疫功能缺陷疾病。對照組男30 例，女22 例；年齡47～68 歲，平均（54.7±2.1）歲。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性。本研究患者均自愿參與，獲醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理協(xié)會審核通過。

1.2 研究方法

所有受試者晨起空腹抽取靜脈血約4 mL，加入到肝素促凝血管中，3000 r/min 離心15 min，離心半徑12.5 cm，分離血清進(jìn)行實(shí)驗。采用ELISA 法檢測各組患者血清中LGR4 與β-actin 的濃度（試劑盒購于上海生工生物工程有限公司，批號：20180115），操作步驟按照試劑盒的說明書逐步進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用t 檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)表示，采用χ2檢驗；應(yīng)用ROC 曲線評價LGR4 與β-actin 的表達(dá)在胃癌中的診斷能力。以P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組β-actin 與LGR4 表達(dá)水平比較

觀察組患者血漿中β-actin 與LGR4 表達(dá)均高于對照組（P ＜0.05）。見表1。

表1 兩組β-actin 與LGR4 表達(dá)水平比較（pg/mL，）

表1 兩組β-actin 與LGR4 表達(dá)水平比較（pg/mL，）

注：β-actin：β-肌動蛋白；LGR4：G 蛋白偶聯(lián)受體-4

2.2 觀察組患者血清中β-actin 與LGR4 的表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系

血清β-actin、LGR4 在低～中分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌患者的表達(dá)高于高分化、Ⅰ～Ⅱ分期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P ＜0.05），而在患者不同年齡、性別及腫瘤直徑中表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）。見表2。

表2 胃癌組患者血清中β-actin 與LGR4 的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系（pg/mL，）

表2 胃癌組患者血清中β-actin 與LGR4 的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系（pg/mL，）

注：β-actin：β-肌動蛋白；LGR4：G 蛋白偶聯(lián)受體-4

2.3 胃癌患者血清中β-actin 與LGR4 的表達(dá)對胃癌的診斷價值

繪制ROC 曲線結(jié)果顯示：β-actin、LGR4 對胃癌均有較好的診斷能效，最佳截斷值分別為3.21、47.62 pg/mL，ROC-AUC 分別為0.747（95%CI：0.726，0.785，P ＜0.001）、0.782（95%CI：0.751，0.803，P ＜0.001）。血清中β-actin 與LGR4 聯(lián)合檢測胃癌的ROC-AUC為0.869（95%CI：0.837，0.914，P ＜0.001），聯(lián) 合檢測的ROC-AUC 高于β-actin、LGR4 單一檢查，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=2.153、2.365，P=0.005、0.003）。見圖1。

圖1 β-actin 聯(lián)合LGR4 檢測診斷胃癌的ROC 曲線

3 討論

胃癌是世界上常見的惡性腫瘤之一，好發(fā)年齡在50 歲以上，男女發(fā)病率比例約為2∶1。相關(guān)文獻(xiàn)顯示，胃癌是世界范圍內(nèi)癌癥相關(guān)死亡原因的第五大原因[9-10]，且發(fā)病率居高不下，惡性度和死亡率高。盡管現(xiàn)代社會的醫(yī)學(xué)檢查及治療方法都取得了較大進(jìn)步，但全世界內(nèi)胃癌的死亡率并未明顯降低，確診病例數(shù)仍在持續(xù)增加，嚴(yán)重威脅著人們的身心健康。因此，探尋靈敏的胃癌生物標(biāo)志物，對于胃癌患者的早診斷早治療、提高患者的生存時間有著重要的意義。

LGR4 是G 蛋白偶聯(lián)受體家族的重要成員之一，其染色體位置為11 號染色體長臂，分子質(zhì)量約為104 000，并在人體多種組織中均有表達(dá)，如胰腺、腎臟及心臟組織等[11]。研究顯示，LGR4 可介導(dǎo)多種細(xì)胞信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，如參與免疫反應(yīng)及自主神經(jīng)的調(diào)節(jié)等[12]；同時，LGR4 亦參與多種病理過程，如LGR4 通過調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝使得白色脂肪組織增多、棕色脂肪組織減少，進(jìn)而導(dǎo)致肥胖的發(fā)生[13-14]，同時還可通過促進(jìn)Snail 蛋白、下調(diào)E-鈣黏蛋白的表達(dá)水平，進(jìn)而促進(jìn)了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），參與前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程[15-16]。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者血清中LGR4 的水平升高，并且與胃癌患者的TNM 分期、細(xì)胞分化程度及淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示LGR4 可能參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。相關(guān)文獻(xiàn)顯示，LGR4 是R-spongdin 蛋白的受體，具有較高的親和力，當(dāng)LGR4 與R-spongdin 蛋白結(jié)合后，激活Wnt/β 聯(lián)蛋白信號通路，上調(diào)β 聯(lián)蛋白的表達(dá)水平，高表達(dá)的β 聯(lián)蛋白進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，進(jìn)而促進(jìn)了基因的轉(zhuǎn)錄及翻譯，加速了腫瘤細(xì)胞的生長周期，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖及分化，提高腫瘤細(xì)胞的惡性程度，進(jìn)而影響胃癌的進(jìn)展[17]；此外，LGR4 還可促進(jìn)Wnt/β 聯(lián)蛋白信號通路中的下游靶基因Dickkopf 相關(guān)蛋白1（DKK1）的表達(dá)，過表達(dá)的DKK1 分泌到細(xì)胞外，為腫瘤細(xì)胞的生長及分化提供了良好的微環(huán)境，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的生長、并向周圍組織浸潤，進(jìn)一步提高腫瘤細(xì)胞的惡性程度[18-21]。

肌動蛋白是一種分子質(zhì)量約為42 kDa 的多功能蛋白，是組成微絲的主要成分，肌動蛋白參與很多重要的細(xì)胞生物學(xué)過程，如肌肉的收縮、細(xì)胞分裂、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等[22-23]。肌動蛋白有3種亞型，分別為α-肌動蛋白、β-肌動蛋白及γ-肌動蛋白。β-肌動蛋白是細(xì)胞骨架的組成成分，在大多數(shù)的細(xì)胞中均有表達(dá)，在細(xì)胞器的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)、肌肉收縮及細(xì)胞遷移的過程中發(fā)揮了重要的作用[24]。有研究顯示，β-actin 在肝癌組織中呈高表達(dá)現(xiàn)象，與病情的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，為肝癌的臨床研究提供了新的靶點(diǎn)[25]。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者血清中β-actin 的表達(dá)水平升高，并與胃癌患者的TNM 分期、細(xì)胞分化程度及淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示β-actin 亦可能參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展過程。有研究顯示，β-actin 單體有3個結(jié)合位點(diǎn)，一個是ATP 的結(jié)合位點(diǎn)，其余兩個是肌動蛋白的結(jié)合位點(diǎn)[26]。當(dāng)微絲成熟后，與β-actin 結(jié)合的ATP 水解并釋放出大量的能量，為細(xì)胞的生長提供了有利的環(huán)境，促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖及分化，在腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用。水解后的ATP 形成ADP-F-肌動蛋白，并經(jīng)過一系列細(xì)胞過程再次形成ATP-肌動蛋白單體，而后ATP 水解釋放能量，這種循環(huán)被稱為“踏車運(yùn)動”，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移及轉(zhuǎn)移過程[27]。ROC 分析顯示，胃癌患者血清中β-actin 與LGR4 對胃癌具有一定的診斷價值，ROC-AUC 均＞0.7。二者聯(lián)合應(yīng)用時ROC-AUC 為0.869，高于兩指標(biāo)的單獨(dú)診斷效能，提示二者聯(lián)合使用時對胃癌的診斷具有更高的臨床價值。

綜上所述，胃癌患者患者血清中β-actin 與LGR4的表達(dá)水平均升高，且在低～中分化、TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中高表達(dá)，二者聯(lián)合檢測有可能作為診斷胃癌的分子標(biāo)志物。