吳 燕，劉 菁，李華龍

（天津市藥品檢驗(yàn)研究院，天津 300070）

甲基纖維素是纖維素的甲基醚，是堿化纖維素與氯甲烷醚化而得［1］。甲基纖維素是一種應(yīng)用廣泛的藥用輔料，可作為片劑的黏合劑以改善崩解及溶出，可用于液體藥劑的助懸及增稠，可增加乳劑的穩(wěn)定性等等。

甲基纖維素現(xiàn)已被多國(guó)藥典收載［2-4］，但均未有殘留溶劑的檢測(cè)方法。作為2017年藥用輔料綜改課題項(xiàng)目之一，對(duì)現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》中收載的甲基纖維素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)予以完善。本文結(jié)合部分廠家提供的甲基纖維素制備工藝并采用氣質(zhì)聯(lián)用法對(duì)樣品中可能存在的殘留溶劑進(jìn)行初篩，建立了甲基纖維素中苯系列殘留溶劑的測(cè)定方法［5-9］，為甲基纖維素質(zhì)量控制提供技術(shù)支撐。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 安捷倫7890A氣相色譜儀，安捷倫7697A頂空進(jìn)樣裝置，配氫火焰離子化檢測(cè)器；安捷倫7000 GC/MS Triple Quad氣相色譜質(zhì)譜儀；梅特勒-托利多XS205電子分析天平。

1.2 試藥 苯、甲苯、對(duì)二甲苯、間二甲苯、鄰二甲苯均為分析純。二甲基亞砜為色譜純（默克股份有限公司）。甲基纖維素樣品共征集到3個(gè)廠家10批：A廠，批號(hào)分別為D180FCF012、D180G6D012、D180H1E012、D180H2J021；B廠，批號(hào)分別為20170311、20170134、20170417；C廠，批號(hào)分別為0001643710、0551517401、0001776346。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.1.1 氣相色譜條件 色譜柱：HP-INNOWAX毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.5 μm）；柱溫：40℃保持8 min，以8℃/min升溫到120℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度：200℃，檢測(cè)器溫度：250℃，分流比：20∶1，進(jìn)樣體積：1 ml。頂空瓶加熱溫度：90℃，平衡時(shí)間：30 min；定量環(huán)溫度：100℃，傳輸線溫度：110℃。

2.1.2 氣相色譜質(zhì)譜條件 色譜柱：HP-INNOWAX毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；柱溫：40℃保持8 min，以8℃/min升溫到120℃，保持10 min；進(jìn)樣口溫度：250℃；傳輸線溫度：260℃；碰撞氣：氮?dú)?；載氣：氦氣，流速：2.0 ml/min。頂空瓶加熱溫度：90℃；平衡時(shí)間：30 min；進(jìn)樣量：1 ml；分流比：10∶1。離子源溫度：250℃；四級(jí)桿溫度：150℃；EI源；電子能量：70 eV；全掃描檢測(cè)模式，掃描質(zhì)核比范圍（25～200）。

2.2 系統(tǒng)適用性考查 分別精密量取苯、甲苯、對(duì)二甲苯、間二甲苯和鄰二甲苯各25 μl，置25 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，再精密量取0.5 ml，置10 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，即得系統(tǒng)適用性試驗(yàn)供試液。精密量取5 μl，置20 ml頂空瓶中，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。5種苯系列殘留溶劑色譜峰分離良好，見圖1。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)氣相色譜圖

2.3 線性范圍 分別精密量取苯、甲苯、對(duì)二甲苯、間二甲苯和鄰二甲苯各25 μl，置25 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品儲(chǔ)備液；分別精密量取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.5、1、2和3 ml，分別置10 ml量瓶中，均加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為線性溶液2、3、4、5、6和7號(hào)；再精密量取4號(hào)線性溶液1 ml，置10 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為線性溶液1號(hào)。精密量取線性溶液5 μl，分別置20 ml頂空瓶中，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。5種殘留溶劑進(jìn)樣量與峰面積均呈良好的線性關(guān)系。見表1。

表1 線性范圍考查結(jié)果

2.4 檢出限試驗(yàn) 以二甲基亞砜作為稀釋劑，通過(guò)逐級(jí)降低濃度進(jìn)樣測(cè)定，按信噪比3計(jì)算，苯、甲苯、對(duì)二甲苯、間二甲苯和鄰二甲苯的檢出限分別為0.011 0、0.010 8、0.010 8、0.010 8和0.011 0 μg。

2.5 定量限試驗(yàn) 以“2.3”項(xiàng)下線性溶液1號(hào)作為殘留溶劑的定量限溶液，計(jì)算苯、甲苯、對(duì)二甲苯、間二甲苯和鄰二甲苯的檢出限分別為：0.022 0、0.021 6、0.021 5、0.021 7和0.022 0 μg。

2.6 日間精密度試驗(yàn) 取B廠（批號(hào)20170417）樣品，連續(xù)3日重復(fù)測(cè)定5次。結(jié)果苯、對(duì)二甲苯和間二甲苯均未檢出；檢出甲苯均小于定量限；均檢出鄰二甲苯，平均值為0.117 μg/g，RSD為7.8%（n=5）。方法精密度符合要求。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取B廠（批號(hào)20170417）樣品0.5 g，精密稱定，置20 ml頂空瓶中。精密加入系統(tǒng)適用性試驗(yàn)供試液5 μl，依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。同法平行試驗(yàn)6次。結(jié)果苯、甲苯、對(duì)二甲苯、間二甲苯和鄰二甲苯的平均加樣回收率分別為68.67%、60.28%、48.83%、48.45%和60.68%，RSD分別為8.4%、7.7%、7.7%、8.8%和7.2%，見表2-6。

表3 殘留溶劑甲苯回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表4 殘留溶劑對(duì)二甲苯回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表5 殘留溶劑間二甲苯回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表6 殘留溶劑鄰二甲苯回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.8 樣品測(cè)定 取本品約1.0 g，精密稱定，置20 ml頂空瓶中。依“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。10批甲基纖維素殘留溶劑測(cè)定結(jié)果見表7，代表性圖譜見圖2（批號(hào)20170311）。

圖2 樣品測(cè)定的氣相色譜圖

表7 樣品殘留溶劑測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 殘留溶劑檢測(cè)種類的確定 甲基纖維素已被《中國(guó)藥典》2015年版四部收載，對(duì)其殘留溶劑的研究是國(guó)家藥典委2017年藥用輔料綜改課題的研究項(xiàng)目之一。試驗(yàn)中共收集到國(guó)內(nèi)外藥用輔料級(jí)別的甲基纖維素樣品10批，其中國(guó)內(nèi)B廠提供了工藝中使用到的有機(jī)溶劑。

研究中，筆者首先采用氣相色譜質(zhì)譜法進(jìn)行樣品中可能含有的殘留溶劑的初探。結(jié)合《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0861“殘留溶劑測(cè)定法”收載的常用有機(jī)溶劑的分子量范圍，分別選取3個(gè)廠家各2批樣品進(jìn)行了質(zhì)核比（25～200）范圍的全掃描。結(jié)果顯示，部分廠家樣品中檢出“甲苯”與“二甲苯”。代表性圖譜見圖3-5。同時(shí)，筆者考慮苯、甲苯、二甲苯為藥品中規(guī)定的一類和二類需要禁用和限用的殘留溶劑，故建立了甲基纖維素中5種苯系列殘留溶劑的氣相色譜測(cè)定法。

圖3 批號(hào)20170311樣品測(cè)定的GC/MS全掃描圖譜

圖4 色譜峰1定性圖譜

圖5 色譜峰2定性圖譜

3.2 氣相色譜法進(jìn)樣方式的選擇 兼顧甲基纖維素及殘留溶劑的溶解度，筆者曾嘗試采用二甲基亞砜作溶劑溶解樣品，適當(dāng)加熱助溶后，頂空進(jìn)樣測(cè)定樣品的殘留溶劑。結(jié)果10批樣品均未檢出殘留溶劑。后改用樣品直接加熱頂空進(jìn)樣檢測(cè)，并比較不同取樣量（0.1、0.5和1.0 g）殘留溶劑的檢出情況，確定了取樣量為1.0 g的直接加熱頂空進(jìn)樣氣相色譜法。

3.3 回收率試驗(yàn)結(jié)果思考 回收率試驗(yàn)結(jié)果顯示，回收率偏低且回收率隨殘留溶劑極性的增強(qiáng)有下降趨勢(shì)?？紤]甲基纖維素為極性較強(qiáng)的高分子聚合物，回收率試驗(yàn)中在甲基纖維素樣品中加入5種殘留溶劑的二甲基亞砜混合溶液，使得加入位置的甲基纖維素物性局部發(fā)生變化，推測(cè)與待測(cè)部分成分產(chǎn)生相互作用，影響成分的充分釋放，導(dǎo)致回收率偏低。故回收率試驗(yàn)只能近似模擬樣品中殘留溶劑的存在情況，考慮回收率精密度符合要求（RSD≤10%，n=6），故方法可用于甲基纖維素中殘留溶劑的研究。

3.4 樣品測(cè)定結(jié)果分析 從10批樣品測(cè)定結(jié)果可知，10批均有鄰二甲苯檢出；9批樣品檢出甲苯，其中5批低于定量限。結(jié)果顯示：甲苯均小于0.000 02%，鄰二甲苯均小于0.000 04%?！吨袊?guó)藥典》2020年版四部通則0861規(guī)定：甲苯不得過(guò)0.089%，二甲苯總和不得過(guò)0.217%，故樣品質(zhì)量均符合要求。

國(guó)內(nèi)外未見甲基纖維素殘留溶劑檢測(cè)的報(bào)告，作為綜改課題項(xiàng)目予以研究，尚不完善，僅供輔料標(biāo)準(zhǔn)提高工作的參考。