吳 茗，徐 睿，劉書娜，王 芳

南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)學(xué)部，江蘇 南京 210029

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是婦科惡性腫瘤患者的首要死亡原因，2020 年統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，卵巢癌新發(fā)病例21 750例，死亡病例達(dá)到13 940例，5年生存率不到40%，該病的發(fā)病率僅次于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌，占所有女性癌癥的近4%［1］。近年來腫瘤的免疫治療成為研究熱點(diǎn)，目前過繼腫瘤浸潤(rùn)T 淋巴細(xì)胞療法、免疫卡控點(diǎn)修飾法、嵌合抗原受體T細(xì)胞療法、T 細(xì)胞受體療法等免疫治療方法已取得了一定進(jìn)展［2-5］，但卵巢癌復(fù)雜的免疫抑制微環(huán)境是目前免疫治療的主要障礙，治療效果仍不盡如人意。

腫瘤免疫微環(huán)境中存在著各種免疫細(xì)胞參與免疫抑制微環(huán)境的組成，包括骨髓來源的抑制性細(xì)胞（myeloid-derived suppressor cell，MDSC）、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumor-associated macrophage，TAM）、調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（regulatory T cell，Treg）等［6-9］，其中Treg細(xì)胞是卵巢癌免疫抑制微環(huán)境形成的重要因素。在腫瘤微環(huán)境中，癌細(xì)胞與免疫細(xì)胞會(huì)發(fā)生營(yíng)養(yǎng)代謝的競(jìng)爭(zhēng)，腫瘤細(xì)胞大量消耗葡萄糖導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)缺乏，腫瘤微環(huán)境中活化的T 細(xì)胞代謝與功能受到限制，最終抑制T細(xì)胞的免疫監(jiān)視功能，使得腫瘤進(jìn)一步發(fā)展［10-11］。

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者外周血CD4+T細(xì)胞與健康人相比有更高的糖攝取和糖酵解水平，并且其中Treg細(xì)胞比例上升［12］。為了進(jìn)一步明確Treg 細(xì)胞是導(dǎo)致卵巢癌患者外周血CD4+T 細(xì)胞產(chǎn)生這一糖代謝特征的主要因素，我們對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的CD4+Treg 細(xì)胞和CD4+Teff 細(xì)胞的不同糖代謝特征進(jìn)行探討。

1 材料和方法

1.1 材料

新鮮外周血50 mL 由健康志愿者自愿提供；人卵巢漿液性囊腺癌細(xì)胞株SKOV3 來源于中科院上海細(xì)胞庫(kù)。本研究經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫審號(hào)：2017-SRFA-064）。

組織淋巴細(xì)胞分離液Ficoll（天津?yàn)笊镏破酚邢薰荆?；KRPH 緩沖液（北京雷根生物技術(shù)有限公司）；CD3/CD28 T 細(xì)胞擴(kuò)增磁珠（Invivogen 公司，美國(guó)）；糖攝取分析試劑盒（Biovision公司，美國(guó)）；糖酵解分析試劑盒（Cayman，美國(guó)）；RNeasy Micro Kit（Qiagen 公司，美國(guó)）；PrimeScript RT reagent Kit（Ta-KaRa 公司，日本）；SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（大連寶生物工程有限公司）；PCR 引物（南京金斯瑞生物科技有限公司）；Rabbit anti-human β-actin mAb、Rabbit anti-human LDH-α mAb、Rabbit anti-human Glut1 mAb、Rabbit anti-human PKM2 mAb、Rabbit anti-human GPI mAb、Rabbit anti-human HIF-1α mAb（Cell Signaling 公司，美國(guó)）；30%丙烯酰胺、Anti-CD4-FITC、Anti-CD25-APC、Anti-CD127-PE（Bio-Rad 公司，美國(guó)）；聚偏氟乙烯（PVDF）膜（Amersham Pharmacia 公司，美國(guó)）；封閉專用脫脂奶粉（BD 公司，德國(guó)）；HRP 標(biāo)記山羊抗兔IgG（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；細(xì)胞裂解液、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 流式分選和擴(kuò)增CD4+Treg 細(xì)胞和CD4+Teff細(xì)胞

抽取50 mL正常人的外周血（EDTA抗凝），F(xiàn)icoll液分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），PBS洗滌棄上清后，加入流式抗體Anti-CD4-FITC 40 μL、Anti-CD25-APC 50 μL、Anti-CD127-PE 30 μL，室溫避光孵育20 min，PBS清洗后使用BD FACS Aria Ⅱ進(jìn)行分選。將分選后的細(xì)胞鋪入96孔板，加入20 μL Treg細(xì)胞擴(kuò)增磁珠，進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增。

1.2.2 CD4+Treg、CD4+Teff 細(xì)胞與SKOV3 建立共培養(yǎng)體系

收集擴(kuò)增后的CD4+Treg 細(xì)胞和CD4+Teff 細(xì)胞和生長(zhǎng)狀態(tài)良好的SKOV3細(xì)胞，PBS清洗后計(jì)數(shù)鋪入帶有0.4 μm 孔徑小室的24 孔培養(yǎng)板，SKOV3 細(xì)胞以2×105個(gè)細(xì)胞每孔鋪于Transwell 板下室，CD4+Treg 細(xì)胞與CD4+Teff 細(xì)胞以8×105個(gè)細(xì)胞每孔分別鋪于Transwell 板上室，調(diào)整終體積為1.5 mL/孔，置37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱共培養(yǎng)72 h 后，收集兩組T 細(xì)胞，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）實(shí)驗(yàn)

收集與SKOV3 細(xì)胞共培養(yǎng)前后的CD4+Treg 細(xì)胞以及與SKOV3 細(xì)胞共培養(yǎng)后的CD4+Treg、CD4+Teff 細(xì)胞，PBS 清洗后用RNeasy Micro Kit 提 取總RNA，調(diào)整濃度為500 ng/mL 后，37 ℃15 min，85 ℃5 s 條件下采用PrimeScript RT reagent Kit 試劑盒將總RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再用RT-PCR 檢測(cè)糖代謝相關(guān)基因葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3（glucose transporter3，Glut3）、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（glucose transporter1，Glut1）、缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia-inducible factor-1 alpha，HIF-1α）、人葡萄糖6 磷酸異構(gòu)酶（glucose-6-phosphate isomerase，GPI）、烯 醇 化 酶1（enolase1，ENO1）、M2 型丙酮酸激酶（M2-pyruvate kinase，PKM2）、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDHα）、磷酸丙糖異構(gòu)酶1（triose-phosphate isomerase1，TPI1）的mRNA 表達(dá)水平。引物序列見表1。擴(kuò)增程序：預(yù)變性95 ℃30 s；95 ℃5 s，57 ℃30 s，72 ℃34 s，40個(gè)循環(huán)；72 ℃5 min，95 ℃15 s，60 ℃1 min，95 ℃15 s，60 ℃15 s；結(jié)束反應(yīng)。

表1 PCR引物序列一覽表Table 1 PCR primer sequences

1.2.4 細(xì)胞總蛋白提取和Western blot實(shí)驗(yàn)

收集與SKOV3 細(xì)胞共培養(yǎng)前后的CD4+Treg 細(xì)胞以及與SKOV3 細(xì)胞共培養(yǎng)后的CD4+Treg、Teff 細(xì)胞，PBS洗滌細(xì)胞2次去上清，加入適量蛋白裂解液提取細(xì)胞總蛋白，用BCA 法定量檢測(cè)蛋白濃度，配制10%分離膠和4%濃縮膠，將變性的蛋白樣品加入各泳道，同時(shí)以蛋白Marker 作分子量對(duì)照，80 V 電壓下電泳至樣品全部到達(dá)分離膠，改電壓為100 V繼續(xù)電泳適當(dāng)時(shí)間，至Loading buffer 電泳至膠板底部后，100 mA 電流條件下轉(zhuǎn)膜1 h 50 min，使用5%脫脂奶粉封閉3 h，使用5% BSA 將兔抗人LDHα、Glut1、GPI、PKM2、β-actin 按1∶1 000 稀釋后，與PVDF膜4 ℃搖床孵育過夜，第2天用1×TBST洗膜3次后，用5%脫脂奶粉溶液將辣根過氧化物酶（horse radish peroxidase，HRP）標(biāo)記山羊抗兔IgG 多克隆抗體按1∶5 000稀釋，與PVDF膜室溫?fù)u床孵育2 h，再用1×TBST洗膜3次后加ECL發(fā)光試劑A和試劑B按1∶1混勻后，加至PVDF膜表面，使用曝光儀進(jìn)行曝光。

1.2.5 糖代謝檢測(cè)

1.2.5.1 糖攝取實(shí)驗(yàn)

收集與SKOV3 細(xì)胞共培養(yǎng)后的CD4+Treg 和CD4+Teff 細(xì)胞，PBS 清洗計(jì)數(shù)，以每孔3×105個(gè)細(xì)胞的量鋪入96 孔板中，加入100 μL 無(wú)血清培養(yǎng)液饑餓細(xì)胞過夜，次日PBS洗滌細(xì)胞，加入100 μL含2%BSA 的KRPH 緩沖液，預(yù)孵育40 min，再加10 μL 的10 mmol/L 2-脫氧葡萄糖（2-DG）孵育20 min，再經(jīng)過NADPH產(chǎn)生、NADP降解以及循環(huán)放大反應(yīng)后412 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)吸光度值，每間隔10 min檢測(cè)1次，直到100 pmol標(biāo)準(zhǔn)孔吸光度值達(dá)1.5～2.0，此時(shí)所有孔吸光度值為最終值，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線將吸光度值換算為細(xì)胞攝取葡萄糖類似物2-DG 的含量轉(zhuǎn)化為糖攝取水平。

1.2.5.2 糖酵解實(shí)驗(yàn)

收集與SKOV3 細(xì)胞共培養(yǎng)后的CD4+Treg 和CD4+Teff細(xì)胞，PBS清洗計(jì)數(shù)，以每孔3×105個(gè)細(xì)胞的量鋪入96孔板中，加入200 μL RPMI 1640培養(yǎng)液，置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，10 000 r/min離心5 min，收集上清液，再使用糖酵解試劑盒用比色法檢測(cè)上清液中L-乳酸（L-lactate）的含量后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線轉(zhuǎn)化為糖酵解水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

在相同實(shí)驗(yàn)條件下，使用不同健康人的外周血樣本，進(jìn)行3 次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用SPSS 27.0軟件進(jìn)行處理，各組數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中CD4+Treg 細(xì)胞糖代謝相關(guān)基因和蛋白表達(dá)水平升高

將擴(kuò)增后的CD4+Treg細(xì)胞與卵巢癌細(xì)胞SKOV3共培養(yǎng)72 h 后，RT-PCR 和Western blot 檢測(cè)其糖代謝相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與SKOV3共培養(yǎng)的CD4+Treg細(xì)胞中，糖代謝相關(guān)8個(gè)基因（Glut1、Glut3、HIF-1α、PKM2、ENO1、GPI、LDHα、TPI1）的表達(dá)水平均顯著高于未與SKOV3共培養(yǎng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境可以促進(jìn)人外周血CD4+Treg 細(xì)胞糖代謝相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)上調(diào)（圖1A）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)在卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的CD4+Treg 細(xì)胞糖代謝相關(guān)4 個(gè)蛋白（Glut1、LDH-α、PKM2、GPI）表達(dá)水平均顯著高于未與SKOV3 共培養(yǎng)組（P＜0.05），提示卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境可以促進(jìn)人外周血CD4+Treg 細(xì)胞糖代謝相關(guān)蛋白翻譯水平上調(diào)（圖1B）。這些結(jié)果顯示CD4+Treg細(xì)胞與卵巢癌細(xì)胞共培養(yǎng)后，其主要糖代謝相關(guān)基因的mRNA 和蛋白表達(dá)水平會(huì)增強(qiáng)，提示腫瘤微環(huán)境中CD4+Treg細(xì)胞的糖代謝更加活躍。

圖1 與SKOV3共培養(yǎng)前后CD4+Treg細(xì)胞的糖代謝相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平Figure 1 The expression levels of glucose metabolism-related genes and proteins of CD4+Treg cells before and after co-culture with SKOV3

2.2 卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的CD4+Treg 細(xì)胞糖代謝相關(guān)基因和蛋白水平高于CD4+Teff細(xì)胞

CD4+T細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中根據(jù)其表面標(biāo)志和功能特征可分為若干亞群，各亞群之間相互調(diào)節(jié)，發(fā)揮著不同的免疫學(xué)功能，因此也有著各自獨(dú)特的代謝特征。將CD4+Treg、Teff 細(xì)胞與卵巢癌細(xì)胞共培養(yǎng)后，比較兩者主要糖代謝相關(guān)基因的mRNA 和蛋白表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的CD4+Treg細(xì)胞糖代謝相關(guān)8個(gè)基因（Glut1、Glut3、HIF-1α、PKM2、ENO1、GPI、LDH-α、TPI1）除PKM2外，表達(dá)水平均顯著高于CD4+Teff 細(xì)胞，（P＜0.05，圖2A），提示卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中CD4+Treg 細(xì)胞的糖代謝相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平高于CD4+Teff 細(xì)胞。在卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的CD4+Treg 細(xì)胞糖代謝相關(guān)4 個(gè)蛋白（Glut1、LDH-α、PKM2、GPI）除PKM2 外，表達(dá)水平均顯著高于CD4+Teff 細(xì)胞（P＜0.05，圖2B），提示卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中CD4+Treg 細(xì)胞的糖代謝相關(guān)蛋白翻譯水平高于CD4+Teff 細(xì)胞。

圖2 卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中CD4+Treg、CD4+Teff細(xì)胞的糖代謝相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)水平Figure 2 The expression levels of genes and proteins related to glucose metabolism in CD4+Treg and CD4+Teff cells in the growth environment of ovarian cancer cells

2.3 卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的CD4+Treg 細(xì)胞糖攝取水平高于CD4+Teff細(xì)胞

糖攝取是糖代謝的第一步也是關(guān)鍵的一步。為了進(jìn)一步了解腫瘤微環(huán)境中CD4+Treg、Teff 細(xì)胞的糖代謝特征，我們?cè)跍y(cè)定兩者主要糖代謝相關(guān)基因的mRNA 和蛋白表達(dá)水平的基礎(chǔ)上，又比較了兩者在卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的糖攝取水平。結(jié)果如圖3所示，卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的CD4+Treg 細(xì)胞葡萄糖攝取水平高于CD4+Teff 細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［（59.78±2.57）pmolvs.（44.93±1.86）pmol，P＜0.05］，提示卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中CD4+Treg 細(xì)胞相較CD4+Teff 細(xì)胞具有更高的葡萄糖攝取能力，從而攝取更多的葡萄糖。

圖3 卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中CD4+Treg、CD4+Teff 細(xì)胞的糖攝取水平Figure 3 The levels of glucose uptake of CD4+ Treg and CD4+Teff cells in the growth environment of ovarian cancer cells

2.4 卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的CD4+Treg 細(xì)胞糖酵解水平高于CD4+Teff細(xì)胞

細(xì)胞將葡萄糖攝入胞內(nèi)后，會(huì)進(jìn)行分解代謝，這是生物體獲得能量的主要方式，其中糖酵解過程是所有生物體進(jìn)行葡萄糖分解代謝所必須經(jīng)過的共同階段，所以我們又比較了CD4+Treg、CD4+Teff細(xì)胞在卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的糖酵解產(chǎn)物L(fēng)-乳酸（圖4）。卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的CD4+Treg細(xì)胞L-乳酸水平顯著高于CD4+Teff細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［（15.31 ± 2.05）mmol/Lvs.（7.98 ± 0.88）mmol/L，P＜

圖4 卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中CD4+Treg、CD4+Teff 細(xì)胞的糖酵解水平Figure 4 The levels of glycolysis of CD4+ Treg and CD4+Teff cells in the growth environment of ovarian cancer cells

0.05 ］，提示卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中CD4+Treg 細(xì)胞比CD4+Teff 細(xì)胞有更高的糖酵解能力，所以糖酵解活動(dòng)更加活躍。

3 討論

不同的CD4+T 細(xì)胞亞群對(duì)生理和病理?xiàng)l件有各自不同的效應(yīng)功能［13-14］，這表明不同細(xì)胞亞群需要特定的代謝程序來滿足它們不同的能量和生物合成需求，因此糖代謝特征和免疫細(xì)胞功能的發(fā)揮是緊密相連的。

一般來說，糖代謝過程主要分為糖攝取和糖酵解兩部分，糖攝取是糖代謝的第一步，葡萄糖的代謝取決于細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取，然而葡萄糖無(wú)法自由通過細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)進(jìn)入細(xì)胞，需要借助細(xì)胞膜上葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（Glut）的轉(zhuǎn)運(yùn)功能才能得以實(shí)現(xiàn)。近年來越來越多的研究發(fā)現(xiàn)Glut1和Glut3是加速代謝的主要因素，Glut1 和Glut3 的高表達(dá)在大多數(shù)受訪的癌癥類型中都與低分化程度有關(guān)，包括直腸癌、乳腺癌、肺腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、卵巢癌和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤［10，15］。葡萄糖被細(xì)胞從胞外攝入后，經(jīng)過幾步生成丙酮酸，然后以兩種方式處理。第一種是被導(dǎo)入線粒體，然后轉(zhuǎn)化為乙酰輔酶A，再進(jìn)入三羧酸循環(huán)通過氧化磷酸化產(chǎn)生ATP即有氧糖酵解；第二種是在無(wú)氧條件下通過乳酸脫氫酶在細(xì)胞溶膠中轉(zhuǎn)化為乳酸，這個(gè)過程產(chǎn)生NAD+，在糖酵解過程中被消耗，而糖酵解調(diào)節(jié)控制過程主要是通過改變酶的活性來實(shí)現(xiàn)的，比如丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶等，它們的活性大小直接影響著整個(gè)代謝途徑的速度和方向。

有趣的是，在氧氣充足的情況下，有時(shí)細(xì)胞仍然利用葡萄糖產(chǎn)生乳酸，這被稱為瓦伯格效應(yīng)。這種獨(dú)特的現(xiàn)象最近經(jīng)常在腫瘤細(xì)胞和T細(xì)胞激活中被報(bào)道。癌細(xì)胞在有氧環(huán)境中偏向糖酵解進(jìn)行代謝，這被認(rèn)為是腫瘤細(xì)胞的適應(yīng)性改變，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)缺氧條件的耐受能力增強(qiáng)，以至于在與正常細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)中獲得內(nèi)部生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)［16］。腫瘤微環(huán)境中T 細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)代謝也偏向于這一方式，即發(fā)生了“代謝重編程”，雖然糖酵解不能提供大量能量，但其在產(chǎn)生一定能量的同時(shí)，產(chǎn)生的中間產(chǎn)物在細(xì)胞分化和發(fā)揮功能過程中起到重要作用［4，17-18］。因此腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞獨(dú)特的代謝方式對(duì)于腫瘤的發(fā)生發(fā)展有極其重要的影響。

以往研究認(rèn)為，Teff 細(xì)胞主要依靠糖代謝途徑進(jìn)行代謝，Treg 細(xì)胞則以脂肪酸氧化作為主要代謝方式［19-20］。然而近年來認(rèn)為這種二分法是不準(zhǔn)確的，已有研究證實(shí)在腫瘤微環(huán)境中的Treg細(xì)胞能表達(dá)比Teff細(xì)胞更高水平的Glut1，并擁有更高的糖酵解通量［21］。另外對(duì)葡萄糖的競(jìng)爭(zhēng)是T細(xì)胞衰老的主要誘因，Treg細(xì)胞可能與腫瘤細(xì)胞合作消耗葡萄糖，并使腫瘤微環(huán)境中的Teff 細(xì)胞饑餓從而導(dǎo)致其衰老。然而對(duì)于Treg細(xì)胞和Teff細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中的代謝特征到底如何，目前仍然有很大爭(zhēng)論，而且由于細(xì)胞的難獲取性，先前研究多集中在小鼠模型，有學(xué)者認(rèn)為小鼠和人的細(xì)胞在這一問題上的表現(xiàn)截然相反［22］。因此我們直接分離和擴(kuò)增人的Treg細(xì)胞和Teff細(xì)胞，并模擬卵巢癌免疫微環(huán)境，探討卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中Treg細(xì)胞和Teff細(xì)胞的糖代謝特征。

研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，將健康人外周血中的CD4+Treg與卵巢癌細(xì)胞SKOV3 共培養(yǎng)后，其糖攝取、糖酵解相關(guān)基因和蛋白表達(dá)水平均高于正常培養(yǎng)的CD4+Treg細(xì)胞。處于靜止期的T細(xì)胞只需要較低的氧化磷酸化就可以維持其正常的生命活動(dòng)，而這種低水平的氧化磷酸化是由細(xì)胞白介素-7 通過表達(dá)Glut1增加葡萄糖攝取量來維持的［23］，當(dāng)細(xì)胞處于腫瘤微環(huán)境中，卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)導(dǎo)致靜止的T 細(xì)胞被激活，Glut 表達(dá)的增高促進(jìn)CD4+Treg 細(xì)胞和CD4+Teff細(xì)胞的糖攝取，耗氧量增加，而且T細(xì)胞必須大量增殖以產(chǎn)生足夠的Teff 細(xì)胞來對(duì)抗腫瘤，同時(shí)需要和增殖水平極快的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)，這時(shí)細(xì)胞的代謝需求明顯增加，能量產(chǎn)生的主要途徑也從低水平的氧化磷酸化轉(zhuǎn)變?yōu)楦咚降奶墙徒夂凸劝滨０反x以支持其生長(zhǎng)增殖所需要的能量［24］，同時(shí)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中CD4+Treg 細(xì)胞的糖攝取與糖酵解水平顯著高于CD4+Teff 細(xì)胞，說明在卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境下，CD4+Treg細(xì)胞代謝特征與效應(yīng)細(xì)胞相比會(huì)消耗更多能量，抑制效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮功能，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)，同時(shí)提示卵巢癌細(xì)胞可能通過誘導(dǎo)CD4+T 細(xì)胞分化為Treg 細(xì)胞從而增強(qiáng)其糖代謝水平，這些結(jié)果都證明了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)影響了腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的代謝，對(duì)抑制免疫細(xì)胞、促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展具有重要意義。由此我們猜想，如果能通過抑制CD4+Treg細(xì)胞的糖代謝從而調(diào)控免疫抑制功能，或?qū)槁殉舶┑拿庖咧委熖峁┖芎玫乃悸贰?/p>

深入理解T 細(xì)胞尤其是Treg 細(xì)胞糖代謝的表型、調(diào)控機(jī)制、及其動(dòng)態(tài)變化，將為自身免疫、腫瘤等免疫相關(guān)疾病的防治提供有效的分子靶點(diǎn)和潛在的臨床治療新方法。