鄒云眉

（無錫市新吳區(qū)疾病預(yù)防控制中心，江蘇 無錫 214100）

0 引言

沙門菌屬（Salmonella）是全球健康領(lǐng)域定義城市安全和耐藥傳播的重要指標(biāo)菌?？股卦谂R床及養(yǎng)殖業(yè)的持續(xù)廣泛濫用，使沙門菌耐藥性越來越嚴(yán)重[1]。筆者通過對(duì)2017～2018年監(jiān)測(cè)過程中分離出的307株沙門氏菌進(jìn)行抗生素藥敏試驗(yàn)，回顧性了解并分析本地區(qū)人群攜帶與感染優(yōu)勢(shì)沙門菌的抗生素屬耐藥情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 菌株來源：本實(shí)驗(yàn)所用307株沙門菌分離自2017至2018年本地區(qū)人群，其中220株分離自健康食品從業(yè)人員，87株分離至食源性感染腹瀉患者。所有菌株均已生化鑒定復(fù)核確認(rèn)為沙門菌屬。質(zhì)控菌株大腸埃希氏菌ATCC 25922。

1.1.2 主要儀器與試劑：AIM Vizion全自動(dòng)藥敏試驗(yàn)菌液接種判讀儀（Thermo Fisher Scientific公司，美國）；全自動(dòng)菌液接種儀配套接頭及肉湯管（Thermo Fisher Scientific公司，美國）；比濁儀（梅里埃公司，法國）；革蘭氏陰性菌藥敏板（Thermo Fisher Scientific公司，美國）；血平板（上?？片敿喂荆簧锇踩?；恒溫培養(yǎng)箱。

1.2 方法

標(biāo)準(zhǔn)菌懸液制備：使用一次性無菌接種環(huán)，將復(fù)核鑒定后保存于40%BHI-甘油凍存管菌株中取出一環(huán)劃線接種于BHA平板，經(jīng)37℃24 h培養(yǎng)復(fù)蘇，得到新鮮的純菌落，挑取單個(gè)菌落再次劃線轉(zhuǎn)接BHA平板37℃24 h培養(yǎng)純化。再次挑取單個(gè)純化菌落至3 mL去離子水，用經(jīng)過校準(zhǔn)的比濁儀調(diào)整菌液濁度至0.5麥?zhǔn)蠁挝粷岫?。本?shí)驗(yàn)共制備307管菌懸液。

藥敏板接種：取菌懸液50 ul加入至11 mLCAMHT稀釋肉湯試管中，試管加裝移液頭，連接全自動(dòng)藥敏試驗(yàn)菌液接種判讀儀的無菌加樣槽，充分混勻后，自動(dòng)加樣，按照100 ul/孔加至藥敏板，置于恒溫恒濕培養(yǎng)箱內(nèi)，37℃培養(yǎng)24 h。本實(shí)驗(yàn)共接種307塊藥敏板。

陰性對(duì)照：每塊藥敏板設(shè)一孔陰性對(duì)照。自動(dòng)加樣，100ul加至藥敏板H12孔（無抗菌素空白孔），作為陰性對(duì)照。

結(jié)果判讀：將藥敏板放入AIM Vizion全自動(dòng)藥敏判讀試驗(yàn)菌液接種判讀儀，使用判讀儀連接機(jī)算機(jī)，運(yùn)行SWIN3.3系統(tǒng)，對(duì)藥敏板進(jìn)行讀數(shù)與數(shù)據(jù)自動(dòng)錄入，結(jié)果輸出。實(shí)驗(yàn)者肉眼選定藥敏板每行（一種抗菌素）中菌懸液澄清（無細(xì)菌繁殖），并且抗菌素濃度為最低的一孔，讀取為每種抗菌素的最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC），選定結(jié)果由判讀儀自動(dòng)讀入，由SWIN3.3系統(tǒng)根據(jù)美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合腸桿菌科耐藥判定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)藥敏結(jié)果進(jìn)行判斷，結(jié)果：敏感（S）、中度敏感（I）、耐藥（R）。

以大腸埃希菌（ATCC 25922）菌株為質(zhì)控菌株，依據(jù)美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)2019年抗生素敏感性測(cè)試操作標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控范圍判斷藥敏板上的抗生素質(zhì)量。

陰性對(duì)照結(jié)果判讀：藥敏板H12孔（無抗菌素空白孔），菌懸液渾濁。

2 結(jié)果

2.1 不同源沙門菌耐藥特征。健康者攜帶源與患者源分離到的沙門菌對(duì)四環(huán)素類、青霉素類、磺胺類、酰胺醇類的耐藥率相對(duì)較高，對(duì)碳青霉素烯類、頭孢類（除頭孢）、大環(huán)內(nèi)酯類耐藥率相對(duì)較低。不同源沙門菌耐藥特征，見表1。

表1 無錫市不同來源沙門菌對(duì)14種抗生素的耐藥情況

2.2 沙門菌優(yōu)勢(shì)血清型的抗生素耐藥特征。307株沙門菌共鑒定出46個(gè)血清型，優(yōu)勢(shì)血清型分別為鼠傷寒占17.59%，山夫登堡占15.31%，腸炎沙門菌占8.47%，倫敦與阿貢納占6.19%，余血清型占比均低于5%。5種沙門菌優(yōu)勢(shì)血清型的抗生素耐藥特征，見表2。

表2 無錫市5種非傷沙門菌優(yōu)勢(shì)血清型對(duì)14種抗生素的耐藥情況

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，無錫地區(qū)健康者攜帶源與患者源沙門菌株對(duì)青霉素類、四環(huán)素類、磺胺類等多種抗生素耐藥率相對(duì)較高，同時(shí)對(duì)3種以上抗生素耐藥的率分別為48.18%和65.52%。通過文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，無錫地區(qū)沙門菌抗生素耐藥情況與同期國內(nèi)其他省份監(jiān)測(cè)結(jié)果存在差異[2]。青霉素與喹諾酮類抗生素耐藥率高于美國[3]，這可能與各個(gè)國家與地區(qū)的臨床用藥管理、經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平及衛(wèi)生條件有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本地區(qū)人群攜帶與感染的沙門菌對(duì)碳青霉素烯類、頭孢類（除頭孢唑啉）、大環(huán)內(nèi)酯類耐藥率低，對(duì)臨床用藥有一定參考意義[4-5]。

本實(shí)驗(yàn)研究存在一定的局限性，一是僅收集到2017年至2018兩年的人群樣本，無法分析近年來人群攜帶或感染沙門菌抗生素耐藥性變化趨勢(shì)；二是未收集到無錫地區(qū)食品與環(huán)境中沙門菌菌株，無法檢測(cè)分析人群攜帶與感染沙門菌抗生素耐藥情況與本地區(qū)抗生素在動(dòng)植物養(yǎng)殖中使用與環(huán)境污染關(guān)系分析。