文 娟

湖南省湘潭市中心醫(yī)院病理科 411100

喉癌是頭頸家族中比較常見的一種惡性腫瘤，主要的臨床表現(xiàn)為聲音嘶啞、咳嗽、異物感等，嚴(yán)重者會(huì)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，危及患者生命安全[1]。并且該病病因復(fù)雜，形成過程也比較復(fù)雜，涉及基因、外界環(huán)境等因素。隨著基因醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，喉癌基因研究成為新的研究熱點(diǎn)。同時(shí)有研究報(bào)道[2]，喉癌的發(fā)生、發(fā)展與基因的表達(dá)密切相關(guān)。凋亡相關(guān)因子能夠通過抑制Caspase活性，參與調(diào)解核因子NF-κB，起到抑制細(xì)胞凋亡的作用[3]。另外，Survivin也是凋亡抑制蛋白家族成員，與其他凋亡抑制蛋白家族成員比較，結(jié)構(gòu)簡單，特異性強(qiáng)[4]。本文選取2019年1月—2020年1月診治的94例喉癌患者與94例聲帶息肉患者作為觀察對(duì)象，旨在分析喉癌組織中Survivin的表達(dá)及凋亡相關(guān)因子水平的相關(guān)性。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月—2020年1月診治的94例喉癌患者(觀察組)與94例聲帶息肉患者(對(duì)照組)作為觀察對(duì)象。觀察組男65例，女29例；年齡38～64歲，平均年齡(51.24±10.27)歲；病變部位：聲門上型41例、聲門型32例、聲門下型21例；分化程度：中低分化52例、高分化42例；TNM分期：Ⅰ ～Ⅱ期51例、Ⅲ ～Ⅳ期43例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：無轉(zhuǎn)移71例、有轉(zhuǎn)移23例。對(duì)照組男64例，女30例；年齡38～65歲，平均年齡為(51.23±10.30)歲；病變部位：聲門上型40例、聲門型33例、聲門下型21例。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組經(jīng)術(shù)前活檢確診為喉癌者，對(duì)照組經(jīng)頻閃喉鏡確診為聲帶息肉者；②首次接受治療者；③知情本次研究者。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神障礙者；②接受過專業(yè)發(fā)聲或歌唱學(xué)習(xí)者；③不配合本次研究者。本次研究獲得我院倫理委員會(huì)的認(rèn)證。

1.3 試劑及藥品 從上海研卉生物科技有限公司購買單克隆鼠Survivin、p53、bcl-2、caspase-3抗體。武漢華美生物工程有限公司購買從免疫組染色(SP)試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒。

1.4 檢測方法 先用10%甲醛固定喉癌組織標(biāo)本和聲帶息肉組織標(biāo)本，然后用石蠟包埋進(jìn)行切片，切片厚度為4μm，并用免疫組織化學(xué)SP染色處理(先脫蠟水化，用10%H2O2封閉10min，在pH=6.0的檸檬酸鹽緩沖液中行高溫高壓抗原修復(fù)并加血清封閉；然后加一抗孵育，用DAB染色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明封片)。選取自制磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗設(shè)定為陰性對(duì)照，以陽性組織切片設(shè)定為陽性對(duì)照，按照購買試劑盒的操作說明進(jìn)行操作。涉及儀器包括石蠟切片機(jī)、顯微鏡、電熱恒溫干燥箱等。

采用免疫組織化學(xué)法測試Survivin及凋亡相關(guān)因子(p53、bcl-2、caspase-3)的表達(dá)。在400倍鏡下隨機(jī)發(fā)現(xiàn)500個(gè)細(xì)胞中Survivin、p53、bcl-2、caspase-3陽性細(xì)胞>5%判定為陽性，≤5%判定為陰性。其中細(xì)胞質(zhì)或/和細(xì)胞核出現(xiàn)淡黃至棕黃色顆粒判定為Survivin陽性細(xì)胞；細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃至褐色顆粒判定為p53陽性細(xì)胞；細(xì)胞質(zhì)/和細(xì)胞膜中出現(xiàn)棕黃至褐色顆粒判定為bcl-2陽性細(xì)胞；細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)淡黃至棕黃色顆粒判定為caspase-3陽性細(xì)胞。

2 結(jié)果

2.1 喉癌組織中Survivin的表達(dá)與病理特征的關(guān)系 檢測結(jié)果顯示，觀察組中Survivin陽性67例，陰性27例。觀察組中高分化、TNM分期Ⅲ ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Survivin陽性表達(dá)患者比例顯著高于Survivin陰性表達(dá)患者比例，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表1。

表1 喉癌組織中Survivin的表達(dá)與病理特征的關(guān)系[ n(%)]

2.2 兩組組織中Survivin及p53、bcl-2、caspase-3的表達(dá) 觀察組的Survivin、p53、bcl-2陽性率顯著高于對(duì)照組，caspase-3陽性率顯著低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 兩組組織中Survivin及p53、bcl-2、caspase-3的表達(dá)[ n(%)]

2.3 喉癌組織中Survivin及p53、bcl-2、caspase-3的陽性表達(dá)率的相關(guān)性分析 經(jīng)Spearspon相關(guān)性分析，喉癌組織中Survivin的陽性表達(dá)與p53、bcl-2陽性表達(dá)呈正相關(guān)性；與caspase-3陽性呈負(fù)相關(guān)性。詳見表3。

表3 喉癌組織中Survivin及p53、bcl-2、caspase-3的陽性表達(dá)率的相關(guān)性研究[ n(%)]

3 討論

喉癌是發(fā)生在喉部的惡性腫瘤，發(fā)病率占全身癌癥的1%～5%。該病早期診斷，治療方式較多，且治療效果較佳。但是喉癌早期臨床癥狀往往不明顯，影像診斷時(shí)常為晚期。目前臨床上多用基因因子進(jìn)行早期診斷，其中Survivin具有腫瘤特異性，只表達(dá)于腫瘤和胚胎組織，且與腫瘤細(xì)胞的分化增殖及浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，被廣泛應(yīng)用于腫瘤的早期診斷中[5]。本文結(jié)果顯示，喉癌組織中高分化、TNM分期Ⅲ ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Survivin陽性表達(dá)患者比例顯著高于Survivin陰性表達(dá)患者比例。

隨著醫(yī)學(xué)研究的深入發(fā)展，有研究報(bào)道[6]，細(xì)胞凋亡失衡與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。而p53、bcl-2、caspase-3是常見的凋亡相關(guān)因子，其中p53的生物活性較高，與DNA的復(fù)制和修復(fù)有密切的關(guān)系，對(duì)促進(jìn)細(xì)胞分裂增生具有重要的作用；bcl-2是細(xì)胞凋亡的拮抗基因，能夠延長細(xì)胞壽命；caspase-3是細(xì)胞凋亡過程中的一種重要效應(yīng)因子，能夠促使細(xì)胞失活[7]。說明p53、bcl-2對(duì)喉癌腫瘤細(xì)胞的增長和存活具有促進(jìn)作用，而caspase-3促進(jìn)喉癌腫瘤細(xì)胞失活。并且相關(guān)研究報(bào)道[8]，喉癌組織中Survivin、p53、bcl-2的陽性表達(dá)明顯高于正常組織，caspase-3陽性表達(dá)明顯低于正常組織。與本次研究的喉癌組織中的Survivin、p53、bcl-2陽性率顯著高于聲帶息肉組織，caspase-3陽性率顯著低于聲帶息肉組織相似。并且經(jīng)Spearspon相關(guān)性分析，喉癌組織中Survivin的陽性表達(dá)與p53、bcl-2陽性表達(dá)呈正相關(guān)性；與caspase-3陽性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性。

綜上所述，Survivin參與喉癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，Survivin的陽性表達(dá)與p53、bcl-2陽性表達(dá)呈正相關(guān)性；與caspase-3陽性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性。