楊志剛，羅進光

冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┦峭{人類健康的常見心血管疾病，患者發(fā)病率及病死率都很高，且發(fā)病呈年輕化趨勢，危害健康[1]。經(jīng)皮冠狀動脈介入術(shù)（PCI）在臨床上應(yīng)用廣泛，但患者易發(fā)生支架內(nèi)再狹窄（ISR），給家庭和

社會帶來沉重負擔(dān)[2,3]。因此，尋找早期預(yù)測ISR的因子對于及早預(yù)防PCI后冠心病動脈ISR具有重要意義。微小RNA（miRNA）在多種疾病中應(yīng)用廣泛，可能與炎癥、氧化應(yīng)激、癌癥等關(guān)系密切，其中miR-146a-3p在冠心病中高表達，且與疾病嚴重程度呈正相關(guān)，可能對其有較高預(yù)測價值[4,5]；在PCI不穩(wěn)定型心絞痛患者發(fā)生ISR中miR-146a-3p水平升高，可作為預(yù)測PCI患者發(fā)生ISR的生物學(xué)標(biāo)志物[6]，因此miR-146a-3p對于預(yù)測ISR具有較高價值。本研究檢測PCI冠心病患者血清中miR-146a-3p水平，探究其與ISR間的關(guān)系，為臨床上PCI冠心病患者早期預(yù)測ISR提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象選自2017年6月至2019年6月于河南省安陽市第六人民醫(yī)院接受院內(nèi)PCI的197例冠心病患者為研究對象，其中男性133例，女性64例，年齡45～82（63.2±7.8）歲，所有患者隨訪3～18個月，均行冠狀動脈（冠脈）造影，冠脈造影顯示ISR（狹窄直徑≥50%）患者76例（ISR組），無ISR患者121例（無ISR組）。本研究經(jīng)本院倫理協(xié)會審核通過。診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合全國冠心病座談會上關(guān)于冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合冠心病診斷標(biāo)準(zhǔn)且首次接受PCI患者；患者均成功植入雷帕霉素藥物涂層支架1枚；術(shù)后患者均接受阿司匹林、氯吡格雷抗凝治療；所有患者均在發(fā)病12 h內(nèi)PCI；患者資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：出現(xiàn)嚴重心、腎功能不全患者；合并重大疾病，如：惡性腫瘤、急性感染等患者；存在自身免疫缺陷疾病患者。收集患者一般資料，包括：年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)（BMI）、高血壓史、卒中史、吸煙史、飲酒史；所有患者術(shù)后2 h取靜脈血5 ml，檢測空腹血糖（FBG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）。

1.2 實時熒光定量PCR（qRT-PCR）法檢測血清中miR-146a-3p水平靜脈血置于促凝管中，3000 r/min離心10 min，收集血清。血清miRNA提取試劑盒（美國Invitrogen公司，貨號：貨號：AM1561）提取miRNA，分光光度計（美國Thermofisher公司，型號：NanoDrop ND 1000）檢測RNA純度和濃度，miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit（賽默飛世爾，貨號：K1622）合成cDNA，熒光定量PCR儀（瑞典Roche公司，型號：LightCycler480）檢測血清中miR-146a-3p水平。miR-146a-3p上游引物：5’-GTCGTAT CCAGTGCAGGGTCCG-3’，下游引物5’-GC GGCCTCTGAAATTCAGTT-3’；U6上游引物：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’、下游引物：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’（上海生工生物工程股份有限公司合成）。反應(yīng)體系20 μl：1 μl 50 ng/μl cDNA、上/下游引物（10 μmol/L）各0.5 μl、10 μl 2×SYBR Premix Ex Taq（日本TAKARA公司，貨號：RR420A）、8 μl ddH2O。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性30 s；95℃變性30 s，60℃退火45 s，共40個循環(huán)。2-ΔΔCt法計算miR-146a-3p相對表達水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析利用SPSS 25.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用例數(shù)（構(gòu)成比）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料符合正態(tài)分布，用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）（±s）表示，行t檢驗；Logistic分析影響PCI后冠心病動脈ISR的因素；受試者工作特性（ROC）曲線分析血清中miR-146a-3p水平對PCI后冠心病動脈ISR的診斷價值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般資料比較兩組患者性別、高血壓史、卒中史、吸煙史、飲酒史、年齡、BMI、HDL-C水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與無ISR組相比，ISR組血清中FBG、LDL-C、hs-CRP水平升高（P＜0.05），表1。

表1 兩組患者一般資料比較

2.2 兩組患者血清中miR-146a-3p水平情況與無ISR組相比，ISR組血清中miR-146a-3p水平升高（P＜0.05），表2。

表2 兩組患者血清中miR-146a-3p水平比較

2.3 Logistic分析影響PCI后冠心病動脈ISR的因素將PCI術(shù)后冠心病患者是否發(fā)生ISR為因變量，F(xiàn)BG、LDL-C、hs-CRP、miR-146a-3p為自變量行Logistic多因素分析，結(jié)果顯示miR-146a-3p（OR=1.439，95%CI：1.156～1.792）是PCI后冠心病患者發(fā)生ISR的獨立危險因素（P＜0.05），表3。

表3 影響PCI術(shù)后冠心病患者發(fā)生ISR的多因素分析

2.4 血清中miR-146a-3p水平診斷PCI后冠心病患者ISR的效能分析ROC曲線顯示，血清中miR-146a-3p預(yù)測PCI后冠心病患者發(fā)生ISR的曲線下面積為0.836（95%CI：0.777～0.895），截斷值為1.256，此時的敏感度為77.60%、特異度為81.80%（圖1）。

圖1 血清中miR-146a-3p預(yù)測PCI術(shù)后冠心病患者發(fā)生ISR的ROC曲線

3 討論

冠心病是冠脈粥樣硬化引起的血管狹窄或堵塞現(xiàn)象，造成心臟供血不足，缺氧缺血，出現(xiàn)一系列心臟重構(gòu)疾病[8,9]，是患者致死、致殘的主要原因，PCI能夠改善冠心病患者的臨床和預(yù)后狀況，在治療中具有明顯效果[10]。但PCI會使血管內(nèi)皮損傷，導(dǎo)致內(nèi)皮基質(zhì)暴露在血液中，內(nèi)皮細胞損傷、造成大量炎癥因子聚集、細胞因子及趨化因子聚集、血小板聚集等導(dǎo)致平滑肌細胞遷移和過度增殖，引起血管組織重構(gòu)和肉芽增生等，導(dǎo)致ISR，影響治療效果[11,12]。本研究以197例行PCI的冠心病患者為研究對象，其中冠脈造影顯示ISR（狹窄直徑≥50%）患者76例（38.58%）；無ISR121例（61.42%），在PCI術(shù)后冠心病患者ISR易造成血管阻塞，嚴重時危害生命安全，因此，早期發(fā)現(xiàn)ISR并及早治療對于疾病意義重大。

miRNA是一類19-25個核苷酸組成的內(nèi)源性非編碼小分子RNA，可以通過抑制或促進靶基因mRNA降解發(fā)揮作用[13]，且每種miRNA可以調(diào)控多種靶基因的表達。已有研究發(fā)現(xiàn)miR-330-5p在PCI后冠心病ISR患者血清中水平低于非ISR患者，且與血管生成因子受體關(guān)系密切，可以作為預(yù)測ISR的預(yù)測指標(biāo)[14]，發(fā)現(xiàn)更多與ISR相關(guān)miRNA對于疾病治療意義重大。miR-146家族由miR-146a、miR-146b組成，其中miR-146a定位在5號染色體上，具有免疫調(diào)控功能[15]。研究發(fā)現(xiàn)miR-146a與血管的生物性能關(guān)系密切，可以明顯提高內(nèi)皮細胞增殖、遷移、侵襲能力，降低內(nèi)皮細胞的凋亡率，對于血管生成有促進作用[16]。另外促炎因子濃度、NF-KB轉(zhuǎn)錄活性等均可調(diào)節(jié)miR-146a的表達水平，且miR-146a可以直接作用于炎癥因子受體負調(diào)控炎癥和免疫[17]。miR-146a-5p和miR-146a-3p是來源于同一個莖環(huán)miRNA的兩個不同成熟體miR-146a，其中miR-146a-3p在脂多糖誘導(dǎo)的滋養(yǎng)層細胞中高表達，且可以激活TLR4誘導(dǎo)分泌IL-8[18]；miR-146a-3p與細胞的遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[19,20]，可能影響內(nèi)皮細胞生長。在本研究中，發(fā)現(xiàn)miR-146a-3p在PCI后冠心病發(fā)生ISR患者中高表達，其可能促進炎癥因子分泌、促進內(nèi)皮細胞增殖、侵襲、遷移，從而造成ISR，加重疾病。另外本研究發(fā)現(xiàn)，ISR患者與無ISR患者血清中FBG、LDL-C、hs-CRP水平存在差異，但在本研究中可能受病例例數(shù)限制這些因素沒有成為影響ISR發(fā)生的因素。進一步Logistic分析發(fā)現(xiàn)，miR-146a-3p是PCI后冠心病患者發(fā)生ISR的獨立危險因素，提示miR-146a-3p水平升高可能影響下游靶向基因mRNA的表達，從而發(fā)揮作用。ROC曲線顯示，血清中miR-146a-3p預(yù)測PCI后冠心病患者發(fā)生ISR的曲線下面積為0.836，截斷值為1.256，此時的敏感度為77.60%、特異度為81.80%，提示當(dāng)miR-146a-3p水平＞1.256時，PCI后冠心病患者發(fā)生ISR的幾率增加，臨床上應(yīng)該受到重視。

綜上所述，PCI后冠心病動脈ISR患者血清中miR-146a-3p水平升高，是ISR發(fā)生的獨立危險因素，且可以預(yù)測ISR，在臨床上應(yīng)該受到重視。本文首次驗證了miR-146a-3p與PCI后冠心病動脈ISR的關(guān)系，具有一定意義。但miR-146a-3p下游靶基因眾多，具體作用機制尚不清楚，另外支架類型、植入情況等亦影響疾病狀況，臨床上需綜合考慮。