吳云輝 陸許貞 王柯尹

原發(fā)性肝癌（PHC）簡(jiǎn)稱(chēng)肝癌，其發(fā)病率和死亡率居我國(guó)惡性腫瘤的第二位，其中肝細(xì)胞癌（HCC）約占90%，具有侵襲性強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快、轉(zhuǎn)移范圍廣等特性，是其臨床治療效果差和死亡率高的主要原因［1］。研究發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)金屬蛋白酶-7（MMP-7）等基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）參與癌細(xì)胞的浸潤(rùn)、生長(zhǎng)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等過(guò)程，是肝癌等惡性腫瘤發(fā)展的必經(jīng)階段［2］。近年來(lái)，中醫(yī)臨床治療癌癥的開(kāi)展得到了醫(yī)學(xué)界的廣泛認(rèn)可，已知槐杞黃顆粒可抑制肝癌細(xì)胞中MMP-7等基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)，進(jìn)而降低腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲力，然而臨床研究資料目前尚缺乏［3］。本研究旨在觀(guān)察肝癌患者口服槐杞黃顆粒治療前后的血清中MMP-7水平變化，通過(guò)隨訪(fǎng)并進(jìn)行生存分析以明確其治療效果。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2018年1月至2018年12月本院收治的肝癌患者90例。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床和病理確診為肝癌，臨床分期Ⅲ～Ⅳ期，預(yù)計(jì)生存期≥3個(gè)月；②存在手術(shù)禁忌或患者及家屬不愿意接受手術(shù)。均行TACE介入治療，未行放化療或其他介入治療；③自愿簽署知情同意書(shū)。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重心、肝、腎、肺等臟器疾??；②合并其他原發(fā)惡性腫瘤；③各種因素導(dǎo)致資料無(wú)法收集的患者。隨機(jī)分為常規(guī)治療組和觀(guān)察組，每組各45例，另同期選取健康體檢者45例作為正常對(duì)照組。常規(guī)治療組，男31例、女14例；年齡（52.11±13.20）歲；觀(guān)察組，男24例、女21例，年齡（53.58±17.97）歲；對(duì)照組，男28例、女17例，年齡（51.16±13.17）歲。三組的性別、年齡等資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。觀(guān)察組和常規(guī)治療組以影像學(xué)發(fā)現(xiàn)肝占位病灶開(kāi)始到行TACE術(shù)前的病程分別為33.00（43.5）d和31.00（36.50）d，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=0.827，P=0.408）。觀(guān)察組的病因包括乙型肝炎病毒感染31例（68.89%），血吸蟲(chóng)病14例（31.11%）；38例（84.44%）合并肝硬化；臨床分期Ⅲ期12例（26.67%），Ⅳ期33例（73.33%）。常規(guī)治療組的病因包括乙肝病毒感染37例（82.22%），血吸蟲(chóng)病8例（17.78%）；35例合并肝硬化（77.78%）；臨床分期Ⅲ期17例（37.78%），Ⅳ期28例（62.22%）；兩組肝癌患者的病因、合并癥及臨床分期構(gòu)成比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（2017-107）。

1.2 治療方法 TACE術(shù)后，常規(guī)治療組給予護(hù)肝等對(duì)癥處理，觀(guān)察組在常規(guī)治療組的基礎(chǔ)上加用槐杞黃顆粒（規(guī)格：10 g/袋，國(guó)藥準(zhǔn)字B20020074，廠(chǎng)家：?jiǎn)|蓋天力藥業(yè)有限公司），2袋/次，2次/d，連續(xù)口服3個(gè)月。

1.3 血清MMP-7檢測(cè) 所有受試者分別于TACE治療的前1日、觀(guān)察組治療結(jié)束的次日空腹采集全血 5～10 ml，置于分離膠-促凝管中，4 ℃低溫離心機(jī)以2000 r/min離心10 min，收集血清立即儲(chǔ)存于-70 ℃冰箱。提前20 min從冰箱取出試劑盒和待測(cè)樣本血清，室溫下放置至樣本復(fù)溶，采用ELISA法檢測(cè)MMP-7（試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司），檢測(cè)程序嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，采用全自動(dòng)定量酶標(biāo)儀（購(gòu)自芬蘭Thermo公司）讀取吸光度值。

1.4 觀(guān)察隨訪(fǎng) 電話(huà)或門(mén)診隨訪(fǎng)至2020年7月，了解患者生存情況。生存時(shí)間為從TACE術(shù)后日期至因肝癌相關(guān)死亡日期或隨訪(fǎng)終點(diǎn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（）表示，方差齊組間比較采用t檢驗(yàn)；多樣本比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步比較采用LSD-t檢驗(yàn)；治療前后血清MMP-7水平比較，采用兩因素重復(fù)測(cè)量的方差分析；偏態(tài)分布則以［M（QR）］表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。采用Kaplan.Meier法繪制生存曲線(xiàn)并計(jì)算生存率，Log.rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前三組血清MMP-7水平比較 常規(guī)治療組和觀(guān)察組的血清MMP-7水平分別為（12.072±4.151）ng/ml和（11.679±4.253）ng/ml，明顯高于健康對(duì)照組（1.856±0.772）ng/ml，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.465，14.003，P＜0.001）；常規(guī)治療組和觀(guān)察組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.538，P=0.591）。

2.2 治療前后常規(guī)治療組和觀(guān)察組血清MMP-7水平比較 見(jiàn)表1。

表1 肝癌患者在治療前后MMP-7水平變化比較［ng/ml，（）］

表1 肝癌患者在治療前后MMP-7水平變化比較［ng/ml，（）］

組別 治療前 治療后 F值 P值常規(guī)治療組 12.072±4.151 11.663±4.329 3.010 0.090觀(guān)察組 11.679±4.253 9.461±3.907* 53.710 ＜0.001 F值 0.268 9.496 P值 0.607 0.004

2.3 隨訪(fǎng)情況與生存分析 90例患者均獲得隨訪(fǎng)，隨訪(fǎng)時(shí)間為4～29個(gè)月，中位隨訪(fǎng)時(shí)間為13個(gè)月；常規(guī)治療組刪失病例1例，為隨訪(fǎng)結(jié)束時(shí)未死亡病例，該組中位生存時(shí)間為11個(gè)月，第1、2年的生存率分別為37.78%和23.53%；觀(guān)察組刪失病例5例，其中4例為隨訪(fǎng)結(jié)束時(shí)未死亡病例，1例在隨訪(fǎng)18個(gè)月時(shí)退出研究為脫落病例，其余均結(jié)束隨訪(fǎng)，中位生存時(shí)間為16個(gè)月，第1、2年的生存率分別為64.44%和44.83%；兩組患者的生存率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=5.095，P=0.024）。生存曲線(xiàn)見(jiàn)圖1。

圖 1 肝癌患者總體生存曲線(xiàn)

3 討論

肝癌浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，其中腫瘤微環(huán)境中ECM被降解，形成轉(zhuǎn)移灶是關(guān)鍵的步驟［4］。MMPs是一族活性依賴(lài)于鋅離子和鈣離子的內(nèi)源性蛋白水解酶，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)MMPs與肝癌惡性腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切［5］。MMP-7又稱(chēng)基質(zhì)溶解素，具有廣泛的作用底物，是MMPs主要成員之一，能降解 Ⅳ型膠原、纖維連接蛋白（FN）、層粘連蛋白（LN）和可溶性彈性蛋白等多種ECM，通過(guò)滅活а1抗胰蛋白酶來(lái)激活其他MMPs，進(jìn)一步降解ECM及基底膜，破壞腫瘤入侵的自然屏障，還能調(diào)節(jié)VEGF受體等影響內(nèi)皮細(xì)胞的活力參與腫瘤血管新生［6］，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的浸潤(rùn)、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。黎爵等［7］研究表明，肝癌、胰腺癌、胃癌、結(jié)腸癌等多種惡性腫瘤中都有MMP-7高表達(dá)，并與病情進(jìn)展密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，兩組肝癌患者的血清 MMP-7 水平明顯高于正常對(duì)照組，提示血清MMP-7升高可能參與肝癌的進(jìn)展。

槐杞黃顆粒是由槐耳菌質(zhì)配伍中藥枸杞子、黃精而制成的顆粒劑。枸杞子補(bǔ)肝明目，可促進(jìn)肝損傷的修復(fù)和肝細(xì)胞再生；黃精補(bǔ)氣而兼潤(rùn)養(yǎng)，抗疲勞抗氧化，具有益氣滋陰之功效；槐耳菌質(zhì)是槐杞黃顆粒主要成分，歷代本草書(shū)籍記載槐耳有“治風(fēng)”“破血”“益力”之功效，具有提高機(jī)體免疫力等功能［8］。其他惡性腫瘤既往研究顯示，槐耳能通過(guò)抑制MMPs表達(dá)而降低腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲力，將槐耳顆粒和輔助化療聯(lián)合應(yīng)用，乳腺癌患者總生存率顯著提高，預(yù)后明顯改善［9］。推測(cè)血清中的MMP-7等水平下降與TIMPs抑制MMPs的活性相關(guān)，從而削弱了腫瘤細(xì)胞的遷移能力［10］。本研究觀(guān)察組患者在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上口服槐杞黃顆粒，治療后的血清MMP-7水平明顯下降，與治療前及常規(guī)治療組治療后比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），提示槐杞黃顆粒也能降低肝癌患者的MMP-7表達(dá)水平。經(jīng)隨訪(fǎng)，觀(guān)察組患者的中位生存時(shí)間也明顯長(zhǎng)于常規(guī)治療組對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），可推測(cè)聯(lián)合槐杞黃顆粒治療可延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間。肝癌的常規(guī)治療，目前國(guó)內(nèi)外主要采用手術(shù)、放療、介入治療，但效果不太理想，TACE殺死大部分腫瘤中央部分的癌組織，術(shù)后腫瘤完全壞死率僅為0%～4.8%［11］，在取得一定療效的同時(shí)安全性也較大，因此選擇TACE術(shù)治療的肝癌患者逐漸增多。本研究為減少偏倚，選用TACE術(shù)作為常規(guī)治療，其它常規(guī)治療方案聯(lián)合槐杞黃顆粒治療的相關(guān)研究今后將擴(kuò)大病例數(shù)量進(jìn)一步開(kāi)展。

綜上，槐杞黃顆粒可能通過(guò)降低MMP-7水平，進(jìn)而影響通過(guò)MMP-7激活的多種MMPs成員在肝癌細(xì)胞的表達(dá)，從而降低肝癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力。提示聯(lián)合槐杞黃顆粒治療可以起到抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，可能將在肝癌發(fā)病中扮演重要角色，成為防治肝癌的選擇之一。