巫瑤 劉丹陽(yáng) 于洋 陳雪棽 劉琳玲 萬(wàn)莉紅 朱玲△ 易智慧

（1四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，四川 成都 610041；2 四川大學(xué)華西醫(yī)院神經(jīng)外科，四川 成都 610041；3 四川大學(xué)華西基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)院2015級(jí)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)，四川 成都 610041；4 四川大學(xué)華西醫(yī)院消化內(nèi)科，四川 成都 610041）

消化系統(tǒng)潰瘍是臨床常見(jiàn)疾病，尤其以胃、十二指腸潰瘍最為常見(jiàn)，主要由各種應(yīng)激、藥物因素誘發(fā)，具有病程長(zhǎng)、易復(fù)發(fā)等特點(diǎn)[1]。目前關(guān)于消化系統(tǒng)潰瘍形成機(jī)制的公認(rèn)理論是胃黏膜的攻擊因子與保護(hù)因子水平失衡，其中胃酸、胃蛋白酶增多以及幽門(mén)螺桿菌（Helicobacterpylori，HP）感染是導(dǎo)致胃粘膜損傷的主要因素[2]。因此臨床對(duì)于消化系統(tǒng)潰瘍的常規(guī)治療是抑制胃酸分泌與抗幽門(mén)螺桿菌感染聯(lián)合。

國(guó)產(chǎn)艾司奧美拉唑鈉（艾速平）屬于質(zhì)子泵抑制劑（Proton pump inhibitor，PPI），是消化系統(tǒng)潰瘍的一線(xiàn)治療藥物，可持續(xù)抑制胃酸分泌，減少消化性潰瘍活動(dòng)性出血[3]。最近臨床研究表明，艾速平注射液與進(jìn)口奧美拉唑鈉制劑——耐信在相同劑量（40 mg）治療下的抑酸效果相當(dāng)[4]。近期艾速平腸溶膠囊獲批上市，該口服制劑質(zhì)量穩(wěn)定、療效確切且價(jià)格低廉，為消化系統(tǒng)潰瘍治療提供了更多的用藥選擇。為探究艾速平注射液與腸溶膠囊對(duì)消化系統(tǒng)潰瘍的療效差異，本文以無(wú)水乙醇灌胃建立小鼠急性胃潰瘍出血模型，評(píng)價(jià)不同劑型艾速平對(duì)胃酸、胃蛋白酶以及潰瘍形成的影響，以期為臨床選擇適當(dāng)?shù)闹委熕幬飫┬吞峁﹨⒖肌?/p>

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物與試劑

艾速平注射液購(gòu)自正大天晴藥業(yè)集團(tuán)，40 mg，201230148；艾速平腸溶膠囊購(gòu)自正大天晴藥業(yè)集團(tuán)，20 mg，19062501；無(wú)水乙醇（分析純）購(gòu)自成都金山化學(xué)試劑有限公司，2500 mL，20200602；氯化鈉注射液購(gòu)自四川科倫藥業(yè)股份有限公司，250 mL：2.25 g，N20122707A；胃蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，100T/48S，20210125；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（增強(qiáng)型）購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司，500次，112720210126；pH精密試紙購(gòu)自上海三愛(ài)思試劑有限公司，2.7-4.7，20200907。

1.1.2 動(dòng)物

清潔級(jí)雌性昆明小鼠，6-8周齡，購(gòu)自成都達(dá)碩動(dòng)物有限公司，飼養(yǎng)于室溫22-24℃、相對(duì)濕度50-60%、12 h晝夜循環(huán)交替照明環(huán)境中，所有小鼠自由攝食飲水并保持籠舍清潔。適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 急性胃潰瘍小鼠模型建立及分組

將30只雌性昆明小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、胃潰瘍模型組、高、低劑量艾速平注射液組（6.06 mg?kg-1、3.03 mg?kg-1，腹腔注射）、高、低劑量艾速平腸溶膠囊組（6.06 mg?kg-1、3.03 mg?kg-1，灌胃）（n=5）。除對(duì)照組外，所有小鼠按相應(yīng)給藥途徑及劑量預(yù)防性給藥5 d；末次給藥后2 h，無(wú)水乙醇0.2 mL灌胃建立急性胃潰瘍模型。對(duì)照組小鼠灌胃等量生理鹽水，所有小鼠均于1 h后處死。

1.2.2 胃液pH值測(cè)定

用1 mL注射器沿著胃大彎側(cè)部抽取胃液，用pH試紙測(cè)定胃液pH值。

1.2.3 胃潰瘍形成情況觀(guān)察及胃潰瘍指數(shù)測(cè)定

沿胃大彎側(cè)部剖開(kāi)小鼠胃腔，去除胃內(nèi)殘雜后用5 mL蒸餾水沖洗胃腔。將各組小鼠洗凈后的全胃自然展開(kāi)，胃內(nèi)面朝上平鋪于白色潔凈濾紙上，肉眼觀(guān)察胃黏膜面潰瘍形成情況，并采用解剖顯微鏡（10倍）拍照并計(jì)算胃潰瘍指數(shù)。潰瘍指數(shù)計(jì)算方法：解剖顯微鏡下觀(guān)察胃黏膜出血、潰瘍面的多少、大小及其分布部位，測(cè)量各個(gè)潰瘍面的長(zhǎng)徑，長(zhǎng)徑≤1 mm者計(jì)為1分；>1～2 mm者計(jì)為2分；>2～3 mm者計(jì)為3分；>3～4 mm者計(jì)為4分；>4 mm者計(jì)為5分，各潰瘍面計(jì)分之和即為潰瘍指數(shù)。

1.2.4 胃蛋白酶活力測(cè)定

稱(chēng)取約0.1 g 胃組織加入1 mL胃蛋白酶活性測(cè)定試劑盒中的提取液冰浴勻漿后，4 °C條件下、10000 rpm離心10 min取上清，采用BCA試劑盒在562 nm處測(cè)定其蛋白濃度Cpr。采用紫外分光光度法使用胃蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒，測(cè)定所有樣本在275 nm處測(cè)定吸光度，并計(jì)算胃蛋白酶酶活性（U·mg prot-1）=1.31×（A測(cè)定-A對(duì)照）/Cpr

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件Prism 5.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，采用t檢驗(yàn)；P<0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 不同劑型艾速平對(duì)胃潰瘍小鼠胃液pH值、胃蛋白酶活力的影響

與對(duì)照組相比，胃潰瘍模型小鼠胃蛋白酶活性明顯升高（P<0.05），而胃液pH值未見(jiàn)明顯改變（P>0.05）；與胃潰瘍模型組相比，低劑量艾速平腸溶膠囊以及高、低劑量艾速平注射液治療均可明顯降低胃蛋白酶活性（P<0.05），而胃液pH 值仍未見(jiàn)明顯改變（P>0.05），見(jiàn)表1。

表1 胃潰瘍小鼠胃液pH值、胃蛋白酶活力（±SD，n=5）

表1 胃潰瘍小鼠胃液pH值、胃蛋白酶活力（±SD，n=5）

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05；與模型組相比，#P<0.05。

組別 劑量（mg·kg-1） 胃液pH值 胃蛋白酶活力（U·mg prot-1） 對(duì)照組 - 1.9 ± 0.95 0.02737±0.00462 胃潰瘍模型組 - 3.1 ± 0.10 0.05762±0.00306* 高劑量艾速平注射液組 6.06 3.1 ± 1.09 0.02545±0.00574# 低劑量艾速平注射液組 3.03 3.0 ± 0.18 0.01745±0.01296# 高劑量艾速平腸溶膠囊組 6.06 3.4 ± 0.50 0.04264±0.01166 低劑量艾速平腸溶膠囊組 3.03 3.0 ± 0.25 0.02397±0.01404#

2.2 不同劑型艾速平對(duì)胃潰瘍小鼠胃潰瘍形成情況及潰瘍指數(shù)的影響

與對(duì)照組相比，胃潰瘍模型小鼠明顯出現(xiàn)胃粘膜潰瘍、出血，潰瘍指數(shù)與對(duì)照組相比明顯升高（P<0.05）；與胃潰瘍模型組相比，低劑量艾速平腸溶注射液治療明顯減輕小鼠胃粘膜潰瘍、出血，明顯降低潰瘍指數(shù)（P<0.05），見(jiàn)圖1，表2。

圖1 小鼠胃潰瘍形成情況

表2 胃潰瘍小鼠潰瘍指數(shù)（±SD，n=5）

表2 胃潰瘍小鼠潰瘍指數(shù)（±SD，n=5）

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05；與模型組相比，#P<0.05。

組別 劑量（mg·kg-1） 潰瘍指數(shù) 對(duì)照組 - 0.0±0.00 胃潰瘍模型組 - 4.0±0.00* 高劑量艾速平注射液組 6.06 2.7±1.16 低劑量艾速平注射液組 3.03 1.5±1.58# 高劑量艾速平腸溶膠囊組 6.06 2.2±1.48 低劑量艾速平腸溶膠囊組 3.03 2.3±1.25

3 討論

乙醇是常見(jiàn)的致胃黏膜損傷的攻擊因子，對(duì)胃粘膜有極強(qiáng)的腐蝕性。乙醇通過(guò)代謝物乙醛與胃蛋白結(jié)合, 促進(jìn)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、釋放氧自由基、髓過(guò)氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）等導(dǎo)致胃粘膜損傷[5]，因而是常用的復(fù)制急性胃潰瘍模型的手段。

質(zhì)子泵即H+- K+-ATP酶，具有催化和轉(zhuǎn)運(yùn)H+、K＋的功能，是胃酸分泌的最終環(huán)節(jié)。質(zhì)子泵抑制劑（Proton pump inhibitor，PPI）能特異性抑制胃壁細(xì)胞中的H+- K+-ATP酶，發(fā)揮抑制胃酸分泌的作用[6]，是目前治療消化系統(tǒng)潰瘍的首選藥物。艾司奧美拉唑是奧美拉唑的S-異構(gòu)體，與奧美拉唑相比首過(guò)消除更低、生物利用度高，且具有根除幽門(mén)螺桿菌（Helicobacter pylori，HP）的作用，目前廣泛用于臨床治療胃、十二指腸潰瘍[7]，其作用機(jī)制主要包括抗酸以及抗氧化作用，對(duì)p38 MAPK和NF-κB信號(hào)通路具有明顯的抑制作用[7]。而臨床研究表明，艾司奧美拉唑晚餐前一次服用40 mg對(duì)夜間胃酸分泌的抑制作用明顯優(yōu)于早餐前服用[8]。艾速平作為國(guó)產(chǎn)艾司奧美拉唑鈉，目前臨床使用的劑型包括針劑和腸溶膠囊。其中艾速平腸溶膠囊是最近上市的新劑型，以腸溶微丸充填膠囊、易于吞咽，尤其適合兒童、老年人、精神病患者和吞咽困難患者，可大幅提高患者的順應(yīng)性，具有明顯的臨床優(yōu)勢(shì)。

本研究通過(guò)以相同劑量的艾速平針劑和腸溶膠囊分別應(yīng)用于小鼠急性胃潰瘍模型，通過(guò)胃酸、胃蛋白酶以及胃潰瘍形成評(píng)價(jià)不同劑型艾速平的療效差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：低劑量艾速平腸溶膠囊（對(duì)應(yīng)臨床等效劑量20 mg）、高劑量艾速平注射液（對(duì)應(yīng)臨床等效劑量40 mg）、低劑量艾速平注射液（對(duì)應(yīng)臨床等效劑量20 mg）對(duì)小鼠急性胃潰瘍模型具有較好的預(yù)防作用，主要體現(xiàn)為明顯抑制胃蛋白酶活性，減少胃潰瘍、出血形成。然而在該動(dòng)物模型中，pH值未見(jiàn)明顯影響，這可能是由于本次小鼠模型采用的無(wú)水乙醇建立急性胃粘膜損傷，對(duì)pH值影響較小有關(guān)；也與pH值測(cè)定方法有關(guān)，本次實(shí)驗(yàn)采取pH試紙進(jìn)行測(cè)定，靈敏度不足。

綜上所述，低劑量艾速平腸溶膠囊（對(duì)應(yīng)臨床等效劑量20 mg）、高劑量艾速平注射液（對(duì)應(yīng)臨床等效劑量40 mg）、低劑量艾速平注射液（對(duì)應(yīng)臨床等效劑量20 mg）對(duì)乙醇致小鼠急性胃潰瘍出血模型具有一定的保護(hù)作用，可減輕潰瘍形成、抑制胃蛋白酶活性。